黄芪糖蛋白干扰lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

目的基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、HQGP组,每组6只。复制AA模型,第19天开始给药,连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI),HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况,ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量,实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达,Western blot法检测心肌组织TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠足趾肿胀度、AI显著升高;大鼠心肌纤维溶解、断裂,肌节结构模糊,心肌纤维排列紊乱,组织间有炎性细胞浸润,线粒体嵴明显断裂稀疏,焦亡小体数量增加;血清促炎细胞因子IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著升高;心肌组织中GAS5表达显著降低,miR-21表达显著升高,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,HQGP组大鼠足趾肿胀度、AI和心肌组织病理状态明显改善;血清IL-6、IL-18、IL-1β和TNF-α表达显著降低;心肌组织中GAS5表达显著升高,miR-21表达显著降低,LDH释放量、TLR4、NF-κB p65、caspase-1、NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低,GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导,抑制细胞焦亡,减少促炎细胞因子表达,改善AA大鼠心肌损伤。

lncRNA GAS5调控miR-452-5p/Mcl-1通路对急性肺损伤大鼠肺组织细胞焦亡的影响

目的探讨长链非编码RNA生长抑制特异因子5(lncRNA GAS5)调控miR-452-5p/髓样细胞白血病序列-1(Mcl-1)通路对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞焦亡的影响。方法取SD大鼠随机分成6组(每组10只):对照组、模型组、pUC57-lncRNA GAS5组、miR-452-5p抑制剂组、pUC57-NC+miR-452-5p-NC组、pUC57-lncRNA GAS5+miR-452-5p激活剂组。模型组和各干预组大鼠以腹腔注射脂多糖的方法构建ALI模型,对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,造模同时进行分组干预。然后检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)/FVC、潮气量(VT);HE染色观察大鼠肺组织病理损伤,并以Holfbauer评分评估其损伤程度;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肺泡灌洗液(BALF)和血清炎症因子白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;免疫印迹法检测大鼠肺组织焦亡相关指标[消皮素D(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Caspase-11]及Mcl-1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织lncRNA GAS5、miR-452-5p及Mcl-1表达;双荧光素酶报告基因实验验证大鼠肺泡上皮细胞L2中lncRNA GAS5对miR-452-5p的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、lncRNA GAS5表达、Mcl-1蛋白及mRNA表达降低(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达升高(均P<0.05)。与模型组比较,pUC57-lncRNA GAS5组、miR-452-5p抑制剂组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、Mcl-1蛋白及mRNA表达均升高(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达均降低(均P<0.05);pUC57-NC+miR-452-5p-NC组大鼠各指标无显著差异(均P>0.05)。与pUC57-lncRNA GAS5组比较,pUC57-lncRNA GAS5+miR-452-5p激活剂组大鼠FVC、FEV0.3/FVC、Mcl-1蛋白及mRNA表达降低(均P<0.05),VT、Holfbauer评分、IL-18及IL-1β水平、GSDMD、NLRP3、Caspase-1及Caspase-11蛋白表达、miR-452-5p表达升高(均P<0.05)。结论lncRNA GAS5可通过靶向下调miR-452-5p而促进Mcl-1表达,进而抑制ALI大鼠炎症反应及肺组织细胞焦亡,最终减轻大鼠肺损伤并改善其肺功能。

LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)生长停滞特异性转录本5反义RNA(growth arrest specific transcript 5 antisense RNA,GAS5-AS1)被发现在多种癌症中扮演肿瘤抑制因子的作用.但是其在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用和机制尚不清楚.目的探讨LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p在CRC进展中的作用.方法实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p在43对CRC组织和癌旁组织样本中的表达.分别转染pcDNA、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、si-NC、si-LncRNA GAS5-AS1、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics至HCT8细胞.细胞计数试剂盒-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数.通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,CRC组织中LncRNA GAS5-AS1表达降低(P<0.05),miR-106a-5p表达升高(P<0.05).与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1后HCT8细胞活力、迁移、侵袭、miR-106a-5p表达显著降低(P<0.05).与转染anti-miR-NC比较,转染anti-miR-106a-5p后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05).与转染si-NC比较,转染si-LncRNA GAS5-AS1后miR-106a-5p表达水平显著升高(P<0.05).与转染miR-NC比较,转染miR-106a-5p能显著降低LncRNA GAS5-AS1-WT载体的荧光素酶活性,表明miR-106a-5p是LncRNA GAS5-AS1的直接靶点.与转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05).结论LncRNA GAS5-AS1通过靶向miR-106a-5p来抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

原发性膜性肾病患者外周血lncRNA GAS5-AS1、白细胞介素-27表达及与Treg/Th17平衡的关系

目的检测原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者外周血长链非编码RNA-生长停滞特异性转录本5反义RNA1(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5 antisense RNA1,lncRNA GAS5-AS1)、白细胞介素(interleukin,IL)-27表达,并分析其与患者调节性T细胞/辅助性T细胞17(regulatory T cell/T help 17cells,Treg/Th17)平衡的关系。方法选择2019年9月至2020年9月间河北以岭医院收治的PMN患者94例作为PMN组。另选取同期体检健康者96例作为对照组。收集所有研究对象外周血标本,实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法测定血清lncRNA GAS5-AS1水平、酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法测定IL-27、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)水平,流式细胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞比例,并计算Treg/Th17比值。Pearson法分析PMN患者lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平与IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、Treg/Th17的相关性。结果对照组血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)为(4.03±0.66)mmol/L,PMN组患者BUN为(6.52±1.05)mmol/L;对照组血尿酸(uric acid,UA)为(266.13±44.35)μmol/L,PMN组患者UA为(338.92±56.45)μmol/L;对照组胱抑素C(cystatin C,Cys C)为(0.72±0.12)mg/L,PMN组患者Cys C为(1.38±0.23)mg/L;对照组抗磷脂酶A2受体抗体(phospholipase A2 receptor antibody,PLA2R-Ab)为(9.37±1.92)RU/mL,PMN组患者PLA2R-Ab为(32.92±6.19)RU/mL;对照组24 h尿蛋白定量(0.11±0.02)g,PMN组患者24 h尿蛋白定量(7.96±0.94)g;对照组lncRNA GAS5-AS1为(1.02±0.17),PMN组患者lncRNA GAS5-AS1为(3.46±0.56);对照组IL-27为(62.71±10.44)ng/L,PMN组患者IL-27为(124.76±20.77)ng/L;对照组Th17为(0.75±0.12)%,PMN组患者Th17为(4.86±0.81)%;对照组Th17/Treg为(0.11±0.02),PMN组患者Th17/Treg为(1.43±0.23)。对照组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为(109.22±14.85)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1),PMN组患者GFR为(57.47±10.24)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1);对照组Treg水平为(6.42±1.07)%,PMN组患者Treg水平为(3.21±0.53)%。不同危险程度PMN患者Th17/Treg、IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平差异均有统计学意义(P<0.05);PMN患者外周血lncRNA GAS5-AS1与Th17/Treg、IL-17、TNF-α正相关(r=0.632、0.554、0.572,P<0.05),与IL-10负相关(r=−0.468,P<0.05);IL-27与Th17/Treg、IL-17正相关(r=0.581、0.602,P<0.05),与IL-10、TGF-β1负相关(r=−0.533、−0.436,P<0.05)。结论PMN患者血清lncRNA GAS5-AS1、IL-27均高表达,二者均调节Th17/Treg免疫平衡,在PMN中发挥重要作用,有望成为PMN的研究靶点。

生物信息学分析miR-221/26a、lncRNA GAS5和RECK mRNA在结直肠癌转移中的作用

目的基于生物信息学筛选结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,分析其在结直肠癌转移中的作用。方法通过生物信息学方法筛选出与结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,采用荧光定量PCR(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测筛选出的miR-221/26a、lncRNA GAS5和回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(RECK)mRNA在结直肠癌组织中的表达;构建lncRNA GAS5过表达和沉默细胞株验证miRNA、lncRNA和RECK相互关系。结果软件预测结果显示miR-221/26a可以跟RECK mRNA结合,lncRNA GAS5可同时结合miR-221/26a;qPCR结果显示miR-221/26a在结直肠癌组织中的表达高于相应的癌旁组织(P<0.001、或0.05),而lncRNA GAS5在结直肠癌中表达水平降低(P<0.001);成功构建GAS5过表达和沉默细胞株后,结果显示过表达GAS5时miR-221/26a含量下降(P<0.011,或<0.05),RECK蛋白含量降低;而沉默GAS5会上调miR-221/26a含量(P<0.05),促进RECK蛋白表达。结论miR-221/26a与lncRNA GAS5在结肠癌肿瘤组织均存在异常表达,并可能影响RECK蛋白表达进而影响结直肠癌肿瘤的转移。

藤黄酸通过增加lncRNA GAS5水平抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应和转移标志物表达

目的藤黄酸(Gambogic acid,GA)可在卵巢癌中扮演抗癌作用,但其抗癌的分子机制并不清楚。本研究旨在探讨卵巢癌细胞中藤黄酸抗癌的分子机制。方法RT-qPCR检测12例卵巢癌组织和癌旁正常组织中非编码RNA(lncRNA GAS5)的表达;将具有稳定沉默GAS5的siRNA-GAS5(si-GAS5)和藤黄酸试剂共处理卵巢癌细胞系SW626,RT-qPCR检测GAS5、miR-21、MMP-2和MMP-9 mRNA表达变化。细胞增殖使用CCK-8试剂盒进行测定。Western blot法检测转移标记物MMP-2、MMP-9、VEGF和靶基因侧支发芽因子同源物2(Sprouty homolog2,SPRY2)的表达,ELISA试剂盒法检测IL-6和IL-1β在细胞培养物上清中水平。结果卵巢癌细胞和组织中GAS5表达降低(P<0.05),藤黄酸处理SW626细胞24 h,上调GAS5表达(P<0.05),抑制SW626增殖能力(P<0.05),下调MMP2、MMP-9、VEGF的表达及IL-6和IL-1β的分泌(P<0.05)。藤黄酸减少细胞核磷酸化p65水平(P<0.05)。在藤黄酸处理细胞的基础上沉默GAS5,可部分逆转藤黄酸的上述功能(P<0.05)。另外,藤黄酸抑制miR-21的水平并上调SPRY2的表达(P<0.05)。结论藤黄酸通过上调GAS5抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应、转移能力。

lncRNA H19和lncRNA GAS5在急性缺血性脑卒中的表达及临床意义

目的本研究旨在检测长链非编码RNA H19和生长阻滞特异转录物5(GAS5)在急性缺血性脑卒中(IS)患者单个核细胞(PBMC)、大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠脑皮质组织和氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型PC12细胞的表达水平,探讨其作为IS分子诊断指标的可行性。方法收集23例IS组患者和33例健康对照外周血,提取PBMC,采用实时定量PCR(qPCR)检测PBMC中lncRNA H19和GAS5的表达水平。进一步构建大鼠MCAO模型和PC12细胞OGD/R模型,qPCR分别检测lncRNA H19和GAS5在大鼠脑皮质和PC12细胞中的表达。结果 qPCR结果显示,IS组患者PBMC的lncRNA H19表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IS组患者PBMC中的lncRNA GAS5表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。和假手术组相比,MCAO模型大鼠缺血脑皮质lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果表明,PC12细胞在OGD/R后,lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA H19和lncRNA GAS5在IS表达升高,有望成为诊断IS的生物标志物。

白杨素调控lncRNA GAS5表达对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤的影响

目的研究白杨素对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)损伤的影响,并探讨其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)生长抑制特异性转录本5(GAS5)表达有关。方法采用30 mmol/L葡萄糖诱导HRMECs建立细胞损伤模型。将细胞分为9组:正常组(NC)、高糖组(HG)、白杨素低剂量组(LCG)、白杨素中剂量组(MCG)、白杨素高剂量组(HCG)、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、HCG+GAS5小干扰RNA(si-GAS5)组、HCG+si-NC组。采用CCK-8法和流式细胞术分析细胞活力和凋亡,检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR检测GAS5表达量。结果(1)GAS5表达:HG组与NC组比较降低(t=45.322,P=0.000),与MCG组比较降低(t=17.391,P=0.000),与HCG组比较降低(t=36.363,P=0.000),差异均有统计学意义;(2)MDA含量:HG组与NC组比较升高(t=36.123,P=0.000),与MCG组比较升高(t=7.510,P=0.002),与HCG组比较升高(t=27.228,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较升高(t=24.231,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较升高(t=21.766,P=0.000),差异均有统计学意义;(3)SOD活性:HG组与NC组比较降低(t=26.923,P=0.000),与MCG组比较降低(t=12.231,P=0.000),与HCG组比较降低(t=22.654,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较降低(t=29.259,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较降低(t=19.410,P=0.000),差异均有统计学意义;(4)凋亡率:HG组与NC组比较升高(t=36.811,P=0.000),与MCG组比较升高(t=8.896,P=0.001),与HCG组比较升高(t=24.091,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组升高(t=26.321,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较升高(t=14.135,P=0.000),差异均有统计学意义;(5)细胞活力(48 h、72 h):HG组与NC组比较降低(t_(48h)=9.507,P=0.001;t_(72h)=16.089,P=0.000),与MCG组比较降低(t_(48h)=4.406,P=0.012;t_(72h)=6.689,P=0.003),与HCG组比较降低(t_(48h)=7.884,P=0.001;t_(72h)=12.835,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较降低(t_(48h)=7.323,P=0.002;t_(72h)=13.244,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较降低(t_(48h)=4.909,P=0.008;t_(72h)=9.581,P=0.001),差异均有统计学意义。结论白杨素能够减弱高糖诱导的HRMECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调lncRNA GAS5表达实现的。

过表达LncRNA GAS5对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的应用长链非编码RNA GAS5(LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性对照组和空白对照组,应用LncRNA GAS5基因的过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)通过脂质体瞬时转染细胞,48 h后收获细胞。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测GAS5、Ⅰ型胶原前胶原(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot分析Col1A1和α-SMA蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖活力。结果 TGF-β1刺激心肌成纤维细胞后,qRT-PCR结果显示LncRNA GAS5的表达量较正常组下降(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,转染了pEG-FP-C1-GAS5的实验组,qRT-PCR结果显示实验组的GAS5表达均明显升高(P<0.05),同时α-SMA和Col1A1 mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot结果显示转染pEG-FP-C1-GAS5的实验组α-SMA和Col1A1蛋白表达量均明显降低(P<0.05);MTT法检测结果表明在实验组心肌成纤维细胞的增殖活力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论过表达LncRNA GAS5可显著降低心肌成纤维细胞的增殖活力,提示GAS5有抑制心肌成纤维细胞的活化增殖的作用,为以后进一步研究提供依据。

肉苁蓉总苷通过调控lncRNA GAS5保护神经细胞缺血再灌注损伤

目的 探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法 体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(GAS5)组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-GAS5组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞活力、凋亡以及pro-caspase3、cleaved-caspase3蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA GAS5表达,试剂盒检测细胞上清液中TNF-α、IL-6水平。结果 与对照组比较,I/R组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncRNA GAS5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);与I/R组比较,肉苁蓉总苷中、高剂量组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncRNA GAS5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-GAS5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05);与肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组比较,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-GAS5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。结论 肉苁蓉总苷通过下调lncRNA GAS5表达对神经细胞缺血再灌注损伤具有保护作用。

敲减lncRNA Gas5减轻小鼠脑外伤继发性脑水肿及神经元损伤

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest speci fic transcript 5,lncRNA Gas5)在创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠模型中继发的脑水肿及神经元损伤中的作用。方法应用自由落体打击法制作小鼠TBI模型,脑内注射shRNA靶向lncRNA Gas5的腺病毒(AAV-sh-GAS5)用来敲减lncRNA Gas5,RT-qPCR检测脑组织中lncRNA Gas5的表达水平,功能性MRI成像评估脑区域的表观弥散系数(apparent dispersion coefficient,ADC)和脑血流量(cerebral blood flow,CBF),TUNEL法测定脑组织TUNEL阳性细胞数,免疫组织化学法检测脑组织中Cleaved caspase-3阳性细胞数,Western blot法检测脑组织中Bax和Cyt c水平。结果TBI后,小鼠脑组织中lncRNA Gas5表达水平随着时间递增。在TBI后24h,敲减脑lncRNA Gas5能抑制TBI诱导的脑组织中TUNEL阳性细胞数和Cleaved caspase-3阳性细胞数增加,缓解ADC值和CBF值增高,抑制TBI导致的Bax转位和Cyt c释放。结论敲减脑lncRNA Gas5对TBI小鼠有明显的神经保护作用,lncRNA Gas5可以作为治疗TBI后脑水肿及神经元损伤的一个潜在治疗靶点。

LncRNA GAS5与肾脏病发生关系

最新研究发现,生长抑制特异性转录本5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)在多种急、慢性疾病的发生和发展过程中具有重要调控作用。研究显示,GAS5能够调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等生命过程,与急性心肌梗死、缺血性脑卒中、高血压等多种疾病发生、发展及治疗密切相关,推测其有望成为疾病精准靶向治疗的新靶标。本文就GAS5在肾脏病中的相关研究进展进行综述。

lncRNA GAS5与JAK1/STAT3信号通路对大鼠心肌细胞缺氧损伤影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5 long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncRNA GAS5)与JAK1/STAT3信号通路在大鼠心肌H9C2细胞缺氧损伤中的调控作用,为心血管疾病的治疗提供实验基础。方法通过缺氧培养建立体外缺氧模型,以正常培养的H9C2细胞为对照,用RT-qPCR方法检测GAS5的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症细胞因子,CCK-8法用于测定细胞活力。通过细胞活力、凋亡和炎症反应的变化来评估下调GAS5对缺氧心肌细胞的影响。采用RT-qPCR检测JAK1/STAT3信号通路中mRNA的表达,用酪氨酸激酶抑制剂(AG490)抑制JAK1/STAT3信号通路,探讨JAK1/STAT3信号通路对GAS5的表达水平缺氧细胞活力、凋亡和炎症的影响。结果(1)缺氧能够减低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡和炎症的发生;(2)GAS5在缺氧诱导的细胞中表达较高,在缺氧H9C2细胞中下调GAS5可抑制细胞凋亡和炎症细胞因子,促进细胞活力;(3)JAK1/STAT3信号通路在缺氧细胞中被激活,并受到GAS5的调控。当JAK1/STAT3信号通路受到抑制时细胞活力会明显增加,细胞凋亡和炎症的发生会明显降低。结论GAS5可通过JAK1/STAT3信号通路调控H9C2细胞的缺氧损伤,GAS5的抑制剂可能与酪氨酸激酶抑制剂协同作用,保护心肌细胞免受缺氧损伤。

LncRNA GAS5在足细胞损伤中的作用研究

足细胞损伤是导致肾小球疾病蛋白尿持续发生和慢性肾脏疾病进展的关键危险因素。近年来,LncRNA GAS5在影响细胞存活或死亡中的功能已引起越来越多的关注,LncRNA GAS5参与了足细胞的损伤,学者们一直在不断探讨其参与足细胞损伤的作用机制。在此,本文概述LncRNA GAS5的结构和生物学功能及其参与足细胞损伤的作用机制,以更加全面有效地认识足细胞损伤发生发展的分子机制,从而为足细胞损伤与修复提供不可或缺的理论依据。

儿童淋巴瘤患者化疗前后血液中lncRNA GAS5水平变化的临床意义

目的:探究儿童淋巴瘤患者化疗前后血液中长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)水平变化的临床意义。方法:收集淋巴瘤患儿(81例)及健康儿童(52例)的血液样本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组样本血液中的lncRNA GAS5含量。分析不同临床分期儿童淋巴瘤化疗有效和无效患儿血液中lncRNA GAS5表达及凝血功能在化疗前后的变化差异。淋巴瘤患儿血液中lncRNA GAS5水平与凝血指标的相关性利用皮尔森(Pearson)相关性分析。结果:患儿组lncRNA GAS5水平与凝血指标均显著高于对照组(P<0.01);淋巴瘤Ⅰ-Ⅱ期(n=45)与Ⅲ-Ⅳ期(n=36)患儿的lncRNA GAS5水平以及凝血功能间无统计学差异(P>0.05);化疗有效患儿(n=60)化疗后凝血指标及lncRNA GAS5水平与化疗前相比均显著降低(P<0.01);而化疗无效患儿组凝血指标lncRNA GAS5水平化疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA GAS5水平分别与PT(r^(2)=0.792)、APTT(r^(2)=0.776)和FIB含量(r^(2)=0.750)呈正相关(P<0.001)。结论:血液中lncRNA GAS5水平可能是反映淋巴瘤患儿化疗疗效和血栓发生风险的潜在标志物。

LncRNA GAS5基因启动子区5 bp插入/缺失多态性在广西地区人群中的分布

目的 探讨广西地区人群中LncRNA GAS5 基因启动子区1个功能性插入/缺失位点(rs145204276I/D)多态性的分布特点,并分析广西地区人群与其他地区人群rs145204276I/D位点多态性的分布差异。方法 采用SNPscan技术对289例广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点进行基因分型检测,统计其基因型和等位基因在广西地区人群不同性别间的分布,并分析其多态性与国际千人基因组计划(1000 genome project)数据库公布的欧洲人群(European,EUR)、日本人群(Japanese in Tokyo;JPT,)、西亚人群(South Asian,SAS)、美国人群(Ad Mixed American,AMR)、非洲人群(African,AFR)、北京人群(Han Chinese in Beijing,CHB)以及文献报道的南京、吉林、重庆和昆明人群的分布差异。结果 广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点I/I、I/D和D/D基因型频率分别为48.4%、43.6%和8.0%,I和D等位基因频率分别为70.2%和 29.8%。rs145204276I/D基因型和等位基因频率在广西地区人群不同性别间比较差异无统计学意义( P >0.05)。广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点的基因型和等位基因频率与EUR、AFR、AMR和JPT人群比较差异均有统计学意义( P 均<0.05 ),而与CHB、南京、吉林、重庆和昆明人群比较差异均无统计学意义( P > 0.05 )。结论 广西地区人群LncRNA GAS5 基因rs145204276I/D位点基因多态性在男性和女性人群中分布无差异,而其多态性与其他地区人群间比较存在不同程度的差异。

lncRNA GAS5调控Notch通路对骨髓间充质干细胞软骨分化的影响

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化的影响,并探讨其机制是否与Notch通路有关。方法分离、培养大鼠BMSCs,并经倒相差显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测表面标志物表达鉴定证实。将第3代BMSCs分为对照组、p-EGFP-C1组(转染p-EGFP-C1空载体质粒)、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组(转染p-EGFP-C1-lncRNAGAS5过表达质粒)、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组[转染p-EGFP-C1-lncRNAGAS5过表达质粒+100 ng/mLNotch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑(DAPT)],采用qRT-PCR法检测各组细胞lncRNAGAS5表达。各组细胞进行软骨分化诱导,HE染色观察细胞形态及数量,免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原纤维α1(COL2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达率,Westernblotting法检测Notch1和兔抗Split多毛增强子1(Hes-1)蛋白表达。结果p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组细胞lncRNAGAS5相对表达量均明显高于对照组、p-EGFP-C1组(P均<0.05)。各组细胞均呈软骨细胞形态改变,即呈三角或多角形,细胞核为蓝紫色,细胞质和细胞外基质为红色,成团生长;p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组与p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组软骨细胞数量明显多于对照组和p-EGFP-C1组,以p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组软骨细胞数量最多。与对照组及p-EGFP-C1组比较,p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组及p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞COL2a1、Aggrecan阳性表达率均升高,Notch1、Hes-1蛋白相对表达量均降低,且p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组变化更明显(P均<0.05)。结论lncRNAGAS5可通过抑制Notch通路激活来促进BMSCs的软骨分化。

胃癌相关LncRNA Gas5/miRNA信号通路的研究进展

胃癌是消化系统中好发的恶性肿瘤之一。近年来,随着临床诊疗技术的提高,胃癌的5年生存率有了显著上升趋势,而进展期胃癌预后仍不理想。明确胃癌发病的分子机制与寻找新的分子靶点成为胃癌治疗中的关键。本文归纳了近年来国内外学者对长链非编码RNA Gas5在胃癌患者中通过调控相关miRNA表达影响胃癌发生发展的研究,指出LncRNA Gas5在胃癌中的表达机制,及其对相关miRNA影响的主要研究进展,并就该分子机制在胃癌生长、增殖、转移、预后等过程中起到的临床诊疗意义进行探讨。

血清lncRNA GAS5水平与2型糖尿病患者心血管疾病风险的相关性

目的 探讨2型糖尿病患者血清长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA GAS5)与心血管疾病(CVD)风险的相关性。方法 选取2017年8月至2019年6月河北中石油中心医院收治的2型糖尿病患者248例,根据随访2年期间是否发生CVD将患者分为CVD组106例和非CVD组142例。血清lncRNA GAS5与一般资料及实验室指标相关性采用Pearson法及Spearman法分析;血清lncRNA GAS5水平对2型糖尿病患者CVD的预测价值采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析;影响2型糖尿病患者发生CVD的因素采用单因素及多因素Logistic回归分析。结果 CVD组体质量指数(BMI)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于非CVD组,血清lncRNA GAS5低于非CVD组,差异有统计学意义(t=4.727、8.133、12.360,P<0.05)。2型糖尿病并发CVD患者血清lncRNA GAS5与BMI、舒张压、LDL-C、甘油三酯(TG)呈负相关(r=-0.524、-0.508、-0.496、-0.486,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA GAS5预测2型糖尿病患者CVD的曲线下面积(AUC)为0.844(95%CI:0.795~0.892),特异性为0.82%,敏感度为0.75%。多因素Logistic回归分析结果显示,BMI是2型糖尿病患者发生CVD的独立危险因素(P<0.05),lncRNA GAS5是2型糖尿病患者发生CVD的保护因素(P<0.05)。结论 血清lncRNA GAS5与2型糖尿病患者CVD的发生有关,可能作为2型糖尿病CVD风险的预测指标。