lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-132-5p对帕金森病细胞损伤的保护机制

目的探究长链非编码RNA KCNQ1OT1(lncRNA KCNQ1OT1)靶向调控微小RNA-132-5p(miR-132-5p)对帕金森病细胞损伤的保护机制。方法SH-SY5Y细胞通过1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MMP+)诱导建立帕金森病细胞模型,检测SH-SY5Y细胞中lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达,验证lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p的调控关系。结果与Con组相比,MMP+组lncRNA KCNQ1OT1、miR-132-5p表达量较高(P<0.05)。低表达lncRNA KCNQ1OT1、干扰miR-132-5p表达均可减轻MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及炎性损伤,抑制细胞死亡,lncRNA KCNQ1OT1靶向正调控miR-132-5p表达,miR-132-5p过表达逆转了lncRNA KCNQ1OT1低表达对MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤及凋亡。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-132-5p表达减轻了MMP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激、炎症损伤,抑制了细胞凋亡。

lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病细胞模型炎症和细胞凋亡的实验研究

目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-129-5p调控帕金森病(PD)细胞模型炎症和细胞凋亡的机制。方法 体外培养人SK-N-SH细胞,用1、2、4 mmol/L MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞损伤模型。将si-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1、miR-NC、miR-129-5p、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-NC、si-lncRNA KCNQ1OT1与anti-miR-129-5p分别转染至MPP+处理SK-N-SH构建PD细胞中,记为si-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组、miR-NC+MPP+组、miR-129-5p+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-NC+MPP+组、si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+组。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞TNF-α、IL-6、IFN-γ水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p表达情况;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-129-5p的靶向关系。结果 与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。与NC组比较,1、2、4 mmol/L MPP+组细胞lncRNA KCNQ1OT1表达,其水平明显较高,而miR-129-5p表达,明显更低(P <0.05)。与si-NC+MPP+组比较,si-lncRNA KCNQ1OT1+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。与miR-NC+MPP+组比较,miR-129-5p+MPP+组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著降低(P <0.05)。si-lncRNA KCNQ1OT1+anti-miR-129-5p+MPP+细胞凋亡、Cleaved-caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-6、IFN-γ水平显著升高(P <0.05)。结论 lncRNA KCNQ1OT1下调miR-129-5p表达抑制PD细胞模型炎症和细胞凋亡。

宫颈癌患者组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平及其临床意义

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达水平及临床意义。方法收集2017年9月至2018年9于我院行手术切除的83例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织,测定其lncRNA KCNQ1OT1的表达,术后对患者进行3年随访,并分析其与患者预后的关系。结果LncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织中的相对表达量为(3.47±0.38),显著高于其在癌旁组织中的相对表达量(1.06±0.15),差异有统计学意义(t=3.798,P<0.05)。宫颈癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与FIGO分期、组织分化程度、肿瘤浸润深度及淋巴结转移显著相关(χ^(2)值分别为6.181、3.927、9.863、4.571,P<0.05),与年龄和肿瘤直径无明显相关性(χ^(2)值分别为0.287和0.113,P>0.05)。LncRNA KCNQ1OT1高表达组宫颈癌患者的3年生存率为68.09%,显著低于lncRNA KCNQ1OT1低表达组的生存率(91.67%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.675,P=0.010)。单因素分析显示FIGO分期、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和lncRNA KCNQ1OT1水平均是影响患者预后的因素(HR值分别为2.671、1.771、2.459、2.664、2.175,P<0.05);Cox多因素回归分析后发现高FIGO分期、肿瘤浸润深度≥1/2肌层、发生淋巴结转移和lncRNA KCNQ1OT1高表达是影响患者预后的独立危险因素(HR值分别为1.736、2.146、2.168、1.884,P<0.05)。结论LncRNA KCNQ1OT1在宫颈癌组织中高表达,且与患者的预后相关。

LncRNA KCNQ1OT1调节miR-145/PAK4轴对结直肠癌SW480细胞恶性发展的影响

目的:探究LncRNA KCNQ1OT1在结直肠癌SW480细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法:miRanda与TargetScan分别分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-145的作用靶点。通过双荧光素酶报告基因实验验证相关的分子间靶标关系。qRT-PCR实验分析KCNQ1OT1、miR-145和PAK4在结直肠癌组织、癌旁组织、SW480细胞和CCC-HIE-2细胞中的基因表达量。将SW480细胞分为siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组、PAK4 siRNA组、inhibitor NC组、miR-145 inhibitor组、pcDNA-3.1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、pcDNA-3.1(+)+miR-145 mimics组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-145 mimics组,分别敲低KCNQ1OT1、miR-145和PAK4表达,MTT实验分析细胞活力,细胞克隆形成实验分析细胞克隆数目,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测SW480细胞EMT能力。结果:与癌旁组织相比(1.37±0.27),结直肠癌组织中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.32±0.89)(t=23.84,P<0.01);与癌旁组织相比(1.21±0.09),结直肠癌组织中PAK4表达上调(2.03±0.54)(t=20.75,P<0.01);与癌旁组织相比(1.26±0.35),结直肠癌组织中miR-145表达显著下调(0.45±0.13)(t=18.76,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.05±0.21),SW480细胞中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.09±0.27)(t=18.79,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.18±0.62),SW480细胞中PAK4表达上调(2.58±0.82)(t=22.17,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.46±0.28),SW480细胞中miR-145表达显著下调(0.58±0.23)(t=17.86,P<0.01)。LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-145,miR-145靶向PAK4。KCNQ1OT1或PAK4表达降低后,SW480细胞活力,克隆数目与EMT能力显著降低,上调了细胞凋亡率;上调KCNQ1OT1靶向miR-145促进了SW480细胞增殖和EMT,下调了细胞凋亡率。结论:下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-145/PAK4轴抑制了SW480细胞增殖和EMT,促进了癌细胞凋亡。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p/TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制

目的探讨长链非编RNA(lncRNA)、KCNQ1重叠转录物(KCNQ1OT)1对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si-NC+HPC组、si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、miR-NC+HPC组、miR-499a-5p+HPC组、si-硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC组、pcDNA-NC+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组、pcDNA-TXNIP+si-lncRNA KCNQ1OT1+HPC组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p和TXNIP mRNA的表达水平;Western印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测MDA含量和细胞SOD活性;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-499a-5p、TXNIP之间的靶向关系。结果心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA KCNQ1OT1表达水平显著升高(P<0.05)。下调lncRNA KCNQ1OT1、下调TXNIP或上调miR-499a-5p后,心肌细胞H9C2中CyclinD1表达、细胞活性、SOD活性显著升高,Cleaved-caspase-3表达、细胞凋亡率、MDA含量显著降低(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-499a-5p调控TXNIP表达。过表达TXNIP可以逆转lncRNA KCNQ1OT1下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2的影响。结论下调lncRNA KCNQ1OT1可能通过miR-499a-5p/TXNIP轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。

miR-452、LncRNA KCNQ1OT1在肝癌组织中的表达情况及与预后间关系分析

目的探讨微小RNA(miR)-452、长链非编码RNA KCNQ1OT1(LncRNA KCNQ1OT1)在肝癌患者瘤组织中的表达情况及预后的关系。方法选取2017年9月至2021年6月邯郸市第一医院收治的肝癌患者92例作为研究对象。对比患者肝癌组织及癌旁组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平,随访至2022年2月,统计患者预后生存情况,Cox比例风险回归模型分析预后的影响因素,绘制不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者Kaplan-Meier生存曲线。结果肝癌组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);患者1年、3年生存率分别为64.37%(56/87)、42.53%(37/87);校正原发疾病、临床分期、肿瘤最大径、肿瘤数量、分化程度、Child Pugh分级、合并肝硬化、血管侵犯后,miR-452及LncRNA KCNQ1OT1表达仍是肝癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);拟合模型:h(t,X)=h0(t)exp(1.188X1+1.326X2),X1为miR-452,X2为LncRNA KCNQ1OT1,构建个体PI方程:PI=1.188X1+1.326X2;不同miR-452、LncRNA KCNQ1OT1表达患者生存曲线率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝癌患者组织miR-452、LncRNA KCNQ1OT1水平均呈异常高表达,且高表达情况与3年内高病死风险有关。

糖尿病肾病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK通路的关系

目的探讨分析糖尿病肾病(DN)患者外周血长链非编码RNA(LncRNA)、电压门控钾通道亚家族Q1重叠转录物(KCNQ1OT)1表达与氧化应激水平及转化生长因子(TGF)-β1/p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)通路的关系。方法选择2型糖尿病患者162例,其中2型糖尿病合并DN患者75例作为DN组,其余单纯2型糖尿病患者87例作为DM组;选择同期医院健康体检人员80例作为对照组。采用qRT-PCR检测3组受试者外周血LncRNA KCNQ1OT1、TGF-β1、P38MAPK、半胱天冬酶(Caspase)-3 mRNA相对表达及血清氧化应激指标,分析LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1/p38MAPK通路及氧化应激指标相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA KCNQ1OT1对DN诊断价值。结果糖尿病患者外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血LncRNA KCNQ1OT1相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),其中DN组外周血TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA相对表达量显著高于DM组(P<0.05)。糖尿病患者血清丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)显著高于对照组(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)显著低于对照组(P<0.05),其中DN组血清MDA、ROS显著高于DM组(P<0.05),DN组血清SOD显著低于DM组(P<0.05)。DN患者外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA、MDA、ROS呈显著正相关关系(P<0.05),外周血LncRNA KCNQ1OT1表达与SOD呈显著负相关关系(P<0.05)。采用ROC曲线分析2型糖尿病患者中LncRNA KCNQ1OT1对DN的诊断价值,ROC曲线下面积为0.875。结论DN患者可出现外周血LncRNA KCNQ1OT1异常表达,且其表达情况与患者氧化应激水平及TGF-β1/p38MAPK信号转导通路激活有关,LncRNA KCNQ1OT1对DN具有良好的诊断价值。

lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-486-5p调控舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和凋亡

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1对舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法选取我院30例舌鳞癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测KCNQ1OT1和miR-486-5p的表达水平;CAL-27细胞分为si-NC组、si-KCNQ1OT1组、pcDNA组、pcDNA-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-486-5p组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-486-5p组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验和RIP实验检测KCNQ1OT1和miR-486-5p的靶向关系。结果舌鳞癌组织中KCNQ1OT1表达水平升高,miR-486-5p表达水平降低(P<0.05)。抑制KCNQ1OT1表达或过表达miR-486-5p后,CAL-27细胞OD值降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达水平降低,p21、Bax表达水平升高(P<0.05)。KCNQ1OT1靶向调控miR-486-5p;下调miR-486-5p表达逆转了抑制KCNQ1OT1表达对舌鳞癌CAL-27细胞增殖和凋亡的影响。结论抑制KCNQ1OT1表达可通过靶向上调miR-486-5p抑制舌鳞癌CAL-27细胞的增殖,且促进细胞凋亡。

LncRNA KCNQ1OT1通过调控miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制。方法于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达。以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系。结果喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)]。喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)]。与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)%比(3.79±2.37)%]。KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达。敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为。

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖诱导的人视网膜上皮细胞增殖与凋亡

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。方法:运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率,qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达,Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。结果:15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率,后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平,降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率,降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p靶向TSHZ3,lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。结论:lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3,促进HG诱导的ARPE-19,并抑制其凋亡和氧化应激。

LncRNA KCNQ1OT1在糖尿病肾病患者血清中的表达及临床意义

目的探讨LncRNA KCNQ1OT1(KCNQ1OT1)在Ⅱ型糖尿病(T2D)、糖尿病肾病(DN)患者血清中的表达及意义。方法 qRT-PCR法检测KCNQ1OT1在77例T2D患者,60例DN患者,60例健康对照组中的表达,分析其临床意义。结果 KCNQ1OT1在T2D及DN患者中的表达较健康对照组明显升高(F=19.790,P <0.001)。KCNQ1OT1在合并大量蛋白尿的DN患者中的表达明显高于合并微量蛋白尿患者(t=13.620,P <0.001)。KCNQ1OT1的表达与蛋白尿的水平呈正相关关系(r=0.690,P <0.001),与肾小球滤过率呈负相关关系(r=-0.780,P <0.001)。在T2D与DN患者中KCNQ1OT1作为糖尿病肾病患者血清标志物的潜能的ROC曲线下面积(AUC)为0.861(95%CI:0.786～0.935,P <0.001),在DN患者与健康患者中KCNQ1OT1作为糖尿病肾病的AUC为0.914(95%CI:0.828～0.980,P <0.001)。结论 KCNQ1OT1的高表达与T2D患者DN的发展有关,有望成为预测DN患者预后的生物标志物。

LncRNA KCNQ1OT1对恶性黑色素细胞瘤细胞增殖和侵袭的作用机制研究

目的:研究长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1对恶性黑色素细胞瘤的作用及其机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)实验检测恶性黑色素细胞瘤组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中KCNQ1OT1的表达量;采用EDU染色实验检测KCNQ1OT1对黑素瘤细胞A375增殖的影响,Transwell实验检测KCNQ1OT1对A375细胞侵袭的影响,Western blotting测定VEGF、RAS、p38和ERK的蛋白表达量。结果:qPCR结果显示,与正常组织和细胞相比,KCNQ1OT1在恶性黑色素细胞瘤组织和细胞中的表达量显著增加(P<0.05);与对照组和pcDNA3.1-NC组相比,pcDNA3.1-KCNQ1OT1显著促进黑素瘤细胞A375的增殖和侵袭(P<0.05);此外,与对照组和Ctrl-siRNA组相比,si-KCNQ1OT1显著抑制黑素瘤细胞A375的增殖和侵袭(P<0.05);与对照组相比,KCNQ1OT1可显著抑制miR-129-5p的表达,并激活RAS/MAPK通路促进A375细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论:lncRNA KCNQ1OT1能够促进恶性黑素瘤细胞A375的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控RAS/MAPK信号通路来实现的,这一结果能够为恶性黑色素细胞瘤的进一步研究提供分子基础。

2型糖尿病心肌病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-181a-5p表达及其与左心功能的相关性研究

目的:探讨2型糖尿病心肌病(T2DCM)患者血清长链非编码核糖核酸KCNQ1OT1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-181a-5p(miR-181a-5p)表达水平及其与左心功能的相关性。方法:选择2021年6月至2023年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治的T2DCM患者80例作为T2DCM组,单纯2型糖尿病(T2DM)患者80例作为T2DM组,另选取同期体检健康者80例作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测并比较三组血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-181a-5p表达水平。Pearson相关性分析法分析血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-181a-5p表达与左心功能相关指标[二尖瓣早期血流速度峰值/左侧壁二尖瓣环早期峰值速度均值(E/e’)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、Tei指数、左心室收缩末期内径(LVESD)、二尖瓣早期血流速度峰值/晚期血流速度峰值(E/A)]的相关性。结果:T2DCM组体质指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、B型脑肽钠(BNP)、肌酸激酶(CK)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbAlc)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于健康对照组(P<0.05);T2DCM组BNP、CK、TC、LDL-C高于T2DM组(P<0.05)。T2DCM组血清miR-181a-5p表达水平低于T2DM组、健康对照组(P<0.05);T2DCM组血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平高于T2DM组、健康对照组(P<0.05)。T2DCM组LVEDD、LVESD、E/e’、Tei指数高于T2DM组、健康对照组(P<0.05),LVEF、E/A低于T2DM组、健康对照组(P<0.05)。T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1与LVEDD、LVESD、E/e’、Tei指数呈正相关(P<0.05),与E/A、LVEF、miR-181a-5p呈负相关(P<0.05);血清miR-181a-5p与LVEDD、LVESD、E/e’、Tei指数呈负相关(P<0.05),与E/A、LVEF呈正相关(P<0.05)。结论:T2DCM患者血清LncRNA KCNQ1OT1表达水平升高,miR-181a-5p表达水平降低,可能参与左心功能损伤过程。

Role of oncogenic long noncoding RNA KCNQ1OT1 in colon cancer

The role of lncRNA KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1(KCNQ1OT1)in colon cancer involves various tumorigenic processes and has been studed widely.However,the mechanism by which it promotes colon cancer remains unclear.Retrovirnl vector pSEB61 was retroftted in established HCT116 siKCN and SW480-siKCN cells to silence KCNQ1 OT1.Cellular proliferation was measured using CCK8 assay,and flow cytometry(FCM)detected cell cydle changes.RNA sequencing(RNA Seq)analysis showed differentially expressed genes(DEGs).Gene ontology(GO)and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway enrichment analyses were carried out to analyze enriched functions and signaling pathways.RT-qPCR,immunofluorescence,and western blotting were carried out to validate downstream gene expressions.The effects of tumorigenesis were evaluated in BALB/c nude mice by tumor xenografts.Our data revealed that the silencing of KONQ1OT1 in HCT116 and SW480 cells slowed cell growth and decreased the number of cells in the G2/M phase.RNA-Seq analysis showed the data of DEGs enriched in various GO and KEGG pathways such as DNA replication and cell cyde.RT qPCR,immunofluorescence,and western blotting confirmed downstream CCNE2 and PCNA gene expressions.HCT116 siKCN cells signifcantly suppressed tumorigenesis in BALB/c nude mice.Our study suggests that lncRNA KCNQ1OT1 may provide a promising therapeutic strategy for colon cancer.

LncRNA KCNQ1OT1在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1OT1在非小细胞肺癌(NSCLC)肺组织中的表达及临床意义。方法收集2011年1月至2013年12月期间在四川省肿瘤医院行手术治疗的89例NSCLC患者的临床资料,采用实时荧光定量PCR法检测肺癌组织以及距离癌组织5 cm以上癌旁组织中LncRNA KCNQ1OT1的表达,结合临床资料分析其临床意义。结果与癌旁组织比较,LncRNA KCNQ1OT1在NSCLC组织中的表达水平明显增高(P<0.001)。单因素分析显示LncRNA KCNQ1OT1的表达与患者年龄、性别及病理类型无关(P>0.05),与肿瘤大小(X^2=12.619,P<0.001)、淋巴结转移(X^2=10.298,P=0.001)、TNM分期(X^2=7.199,P=0.007)及吸烟史(X^2=24.005,P<0.001)明显相关。生存分析提示LncRNA KCNQ1OT1高表达患者的总生存时间(20.0个月比35.0个月,X^2=45.860,P<0.001)和中位无进展生存时间(12.0个月比24.0个月,X^2=31.510,P<0.001)均显著低于低表达患者。Cox回归分析发现疾病分期和LncRNA KCNQ1OT1的表达可作为独立的预后不良的标志。结论 LncRNA KCNQ1OT1在NSCLC组织标本中高表达,与患者的预后相关,可作为潜在的肺癌预后预测分子标志物。

LncRNA KCNQ1OT1在人脂肪细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中的表达

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)KCNQ1OT1在脂肪前体细胞分化过程及肥胖者、脂肪组织中的表达变化,阐明KCNQ1OT1与肥胖的相关性,为进一步解读lncRNA参与肥胖发生发展的作用提供线索。方法用PPIA为内参基因,通过定量PCR,检测KCNQ1OT1于人脂肪前体细胞分化第0、1、3、5、9、12天的表达水平;应用定量PCR检测KCNQ1OT1在肥胖和正常人群白色脂肪组织中的表达变化;采用Pearson相关分析探讨KCNQ1OT1与人群体重指数、血清三酰甘油及总胆固醇的相关性。结果KCNQ1OT1在脂肪前体细胞分化第1、3、5、9和12天的相对表达量分别为(25.89±3.10)、(24.78±5.58)、(15.53±2.11)、(6.75±0.71)、(4.81±0.84),与第0天相比,均呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.01),在分化初始增长尤为明显(第1、3天)。KCNQ1OT1在肥胖人群内脏脂肪组织中的相对表达量为0.79±0.05,较正常人显著增加(P<0.01)。KCNQ1OT1与体重指数呈正相关(r=0.569,P<0.01),与三酰甘油含量呈正相关(r=0.489,P<0.05),与总胆固醇含量呈正相关(r=0.591,P<0.01)。结论KCNQ1OT1在人脂肪前体细胞分化过程中呈增高趋势;在肥胖人群脂肪组织中的表达增高,其表达与体重指数、血清三酰甘油等肥胖相关指标呈正相关,提示KCNQ1OT1可能是影响人脂肪细胞分化的重要调控因子及肥胖防治的潜在靶标。

基于生物信息学分析KCNQ1OT1在胃癌中的作用

长非编码RNA KCNQ1OT1在多种肿瘤中高表达,但是在胃癌中的研究较少并且研究结果不一致,其在胃癌中具体的作用机制也缺乏相关研究。通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库分析发现:KCNQ1OT1在胃癌中普遍高表达,且高表达KCNQ1OT1的胃癌病人预后不良,它与胃癌多种临床因素密切相关,尤其是与TP53的突变有明显的相关性,而且其表达与免疫细胞浸润明显相关;KCNQ1OT1在胃癌肿瘤细胞系中普遍高表达,敲低后可抑制胃癌肿瘤细胞的增殖能力,共表达网络分析发现,其表达与肿瘤代谢有密切的相关性;谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)在胃癌中普遍高表达,与预后不良密切相关,KCNQ1OT1与GLS1的表达具有明显的相关性,敲低KCNQ1OT1的表达可抑制GLS1 mRNA的表达,而过表达GLS1可以部分逆转敲低KCNQ1OT1造成的胃癌细胞增殖能力的下降,因此推测KCNQ1OT1可能通过GLS1调控胃癌肿瘤细胞的生长。本研究通过大数据及实验验证了KCNQ1OT1在胃癌中的表达及功能,提示KCNQ1OT1有可能通过调控谷氨酰胺代谢来促进了胃癌的发生发展,这为分子靶向治疗胃癌的临床研究提供了新的靶点和思路。

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。