lncRNA MALAT1通过miR-124-3p/SOX7分子轴促进视网膜血管内皮细胞增殖及迁移和血管生成

目的:探讨lncRNA MALAT1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其分子机制。方法:qPCR检测正常对照组、糖尿病患者无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变患者组血清中lncRNA MALAT1的表达水平以及葡萄糖培养对lncRNA MALAT1的表达水平的影响。qRT-PCR检测miR-124-3p表达水平;Western blotting检测SOX7表达水平;双荧光素酶报告系统检测lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7的靶向作用关系;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;Transwell实验检测细胞的迁移能力;体外成管实验检测hRMECs血管形成能力。结果:lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平显著高于糖尿病患者无视网膜病变组和正常对照组(P<0.001);体外葡萄糖培养显著促进lncRNA MALAT1在hRMECs细胞的表达,并显著促进hRMECs细胞的增殖、迁移和血管形成(均P<0.05)。敲低lncRNA MALAT1显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7之间存在靶向结合作用。过表达miR-124-3p显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P <0.05);过表达lncRNA MALAT1+miR-124-3p,同时过表达miR-124-3p+SOX7,敲低lncRNA MALAT1+过表达SOX7均显著消除了过表达miR-124-3p对hRMECs细胞增殖、迁移和血管形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p对SOX7的负调控作用促进糖尿病视网膜病变中视网膜内皮细胞增殖、迁移和血管形成。lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者的异常上调可能是微血管功能障碍的潜在生物标志。

绝经后骨质疏松症差异表达lncRNAs及其靶基因抑瘤素M在外周血的表达研究

目的探讨绝经后骨质疏松症差异表达lncRNAs及其靶基因抑瘤素M(oncostatin M,OSM)在绝经后骨质疏松症外周血的表达及其意义。方法在前期lncRNA-mRNA芯片检测绝经后骨质疏松症差异lncRNAs并进行共表达分析的基础上,利用blat软件分析lncRNA TTC28-AS1、linc-IRF2BP2-1、linc-FAM126B-1靶基因;RNAfold预测其二级结构;随机选择绝经后妇女受试者,检测骨密度,正常骨密度妇女25例为对照组,骨质疏松症患者25例为骨质疏松症组;定量PCR检测两组人群外周血lncRNA TTC28-AS1、linc-IRF2BP2-1、linc-FAM126B-1及抑瘤素M的表达。结果blat软件预测lncRNA TTC28-AS1、linc-IRF2BP2-1、linc-FAM126B-1的靶基因为OSM,相关系数分别为0.8506(P=0.0037)、0.9314(P=0.0003)及0.9222(P=0.0004);RNAfold预测3个lncRNAs均具有多个茎环、多分枝内部环结构;lncRNA TTC28-AS1、linc-IRF2BP2-1、linc-FAM126B-1及其靶基因抑瘤素M在骨质疏松症组中表达水平均显著低于对照组(P值均小于0.05)。结论lncRNA TTC28-AS1、linc-IRF2BP2-1、linc-FAM126B-1及其靶基因抑瘤素M表达下调可能与绝经后骨质疏松症存在相关性。

长链非编码RNA M通过作为miRNA-1的中心诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探究LncRNA M是否可以通过作为miRNA-1的中心来诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移。方法:将体外培养的VSMC按照各检测指标需要进行转染,通过生物信息学找到可以与LncRNA M结合的miRNA-1;通过双荧光素酶报告基因检测各组的荧光素酶活性;RT-PCR检测LncRNA M与miRNA-1之间的调控关系,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,从而找出LncRNA M及miRNA-1对细胞增殖的影响;通过MTT实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移情况。结果:通过生物信息学及双荧光素酶报告基因检测得出LncRNA M可能是miRNA-1的一个靶向调控基因,并且miRNA-1能够和LncRNA M结合从而调控其在VSMC中的表达;RT-PCR和流式细胞术研究发现,敲低LncRNA M可能通过上调miRNA-1的表达来促进VSMC细胞的增殖。通过MTT实验和Transwell实验发现,与对照组相比miRNA-1 mimics组、miRNA-1 mimics+pmirGLO组的细胞活力和迁移率明显上升(P<0.05),过表达LncRNA M后其细胞活力和细胞迁移率明显下降(P<0.05)。结论:LncRNA M可能通过作为miRNA-1的中心上调miRNA-1的表达诱导VSMC的增殖和迁移。

lncRNA-6617调控猪肌内前体脂肪细胞分化的筛选与功能研究

旨在探究lncRNA-6617的生物学特性及其对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响,以及初步探究其上游调节机制,为后续深入研究猪肌内脂肪沉积调控机制提供参考依据。本研究以饲养在相同条件下的1、90、180日龄健康马身公猪(n=3)和大白公猪(n=3)为研究对象,利用RNA-seq技术筛选脂肪型猪(马身猪)和瘦肉型猪(大白猪)肌肉特异表达的lncRNAs,并通过生物信息学分析、RT-PCR及Sanger测序鉴定lncRNA-6617生物学特性及其猪组织中的表达特征。在猪肌内前体脂肪细胞中干扰lncRNA-6617,检测lncRNA-6617对肌内脂肪细胞分化能力的影响。随后,检测m^(6)A修饰相关酶在不同品种猪中的表达差异,研究lncRNA-6617的上游调控机制。结果显示,lncRNA-6617位于猪18号染色体,RAMP3基因反义链的第3内含子区域,无蛋白编码能力,主要分布于细胞核;lncRNA-6617在猪所检测各组织中均有表达,背部皮下脂肪中表达量最高,且在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P<0.01);在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中,lncRNA-6617表达量呈上升趋势,且在分化第5天表达量达到最高;干扰lncRNA-6617诱导分化7 d后,分化的成熟脂肪细胞明显减少,成脂关键基因CEBPα、PPARγ和aP2的表达均极显著下调(P<0.01)。m^(6)A修饰的去甲基化酶FTO在马身猪背最长肌和股二头肌中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),在腰大肌中的表达显著高于大白猪(P<0.05),上游调节因子ZNF217在马身猪肌肉组织中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),与lncRNA-6617表达模式一致。干扰FTO后,lncRNA-6617的表达极显著下调(P<0.01)。本研究筛选了在马身猪肌肉组织中显著高表达的lncRNA-6617,并深入研究了lncRNA-6617促进猪肌内前体脂肪细胞分化的功能及其上游调节机制,丰富了脂肪细胞生成的表观调控网络。

m^(6)A修饰相关lncRNA与宫颈癌的预后不良及免疫治疗的相关性分析

目的本研究旨在通过挖掘宫颈癌TCGA数据库,分析N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰相关长链非编码RNA(lncRNA)与宫颈癌预后不良及免疫治疗的相关性,从而有效地评估宫颈癌患者的预后和宫颈癌免疫治疗的可行性。方法基于TCGA数据库宫颈癌样本,利用生物信息学的方法鉴定与宫颈癌预后相关的m^(6)A修饰相关lncRNA,并以此构建宫颈癌的预后风险模型。结果从304例患者样本中筛选出343个m^(6)A修饰相关lncRNA,通过单因素Cox回归分析得到26个m^(6)A修饰相关lncRNA与宫颈癌患者预后相关,并利用Lasso回归分析得到7个m^(6)A修饰相关lncRNA(DLEU1、AC099850.4、DDN-AS1、EP300-AS1、AC131159.1、AL441992.2、AL021707.6)用以构建预后风险模型。Kaplan-Meier曲线显示低风险组的OS高于高风险组(P<0.001);ROC曲线下面积(AUC)表明本风险模型准确性高、可信度强;多因素Cox分析显示风险评分是评估宫颈癌患者预后的独立因素。TIDE评分预测高风险组接受免疫治疗后获益更大。免疫检查点PD1与DDN-AS1等m^(6)A修饰相关lncRNA表达相关,且在高风险组中表达更高(P<0.05)。结论基于上述7个m^(6)A修饰相关lncRNA构建的预后风险模型能够有效预测宫颈癌患者的预后,并能评估以PD1为靶点的免疫治疗疗效。