LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型,si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理;采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量;根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率,SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3AP-AS1可靶向调控miR-19b-3p;共转染si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p可提高OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6的水平,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),并可明显降低SOD水平(P<0.05)。结论 干扰MCM3AP-AS1表达可减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤。

LncRNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-16-5p表达对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及机制

目的研究LncRNA MCM3AP-AS1对肺癌细胞增殖、迁移侵袭的影响和潜在机制。方法以BEAS-2B为对照组,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MCM3AP-AS1和miR-16-5p RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western印迹检测增殖蛋白CyclinD1、p21和p27及迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-14,双荧光素酶报告系统验证MCM3AP-AS1和miR-16-5p的关系。结果与对照组相比,肺癌细胞系A549、SPC-A1和NCI-H460中MCM3AP-AS1表达量均显著升高(P<0.05),miR-16-5p表达量显著下降(P<0.05);抑制MCM3AP-AS1表达和过表达miR-16-5p均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;MCM3AP-AS1靶向负向调控miR-16-5p的表达;抑制miR-16-5p表达逆转了下调MCM3AP-AS1表达对A549细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论LncRNA MCM3AP-AS1通过靶向miR-16-5p调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。MCM3AP-AS1是肺癌潜在分子靶点。

下调lncRNA MCM3AP-AS1通过调控miR-205-5p/NEGR1轴抑制动脉粥样硬化的机制

目的探讨lncRNA MCM3AP-AS1对氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用10 mg/L OX-LDL诱导HUVEC细胞48 h,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中MCM3AP-AS1、miR-205-5p和神经生长调节因子(NEGR)1 mRNA表达水平,Western印迹检测NEGR1蛋白表达。分别转染MCM3AP-AS1小干扰RNA、NEGR1小干扰RNA、miR-205-5p模拟物(mimics)或共转染MCM3AP-AS1小干扰RNA与NEGR1过表达载体至HUVEC细胞,然后再用10 mg/L OX-LDL干预48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱天冬酶(Cleaved-caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证MCM3AP-AS1与miR-205-5p、miR-205-5p与NEGR1的调控关系。结果OX-LDL诱导HUVEC细胞后,细胞中MCM3AP-AS1水平、NEGR1 mRNA和蛋白水平明显升高,miR-205-5p水平明显降低(均P<0.05)。下调MCM3AP-AS1、下调NEGR1或上调miR-205-5p均提高了OX-LDL诱导的HUVEC细胞存活率和CyclinD1蛋白表达,而降低了细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达(均P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负调空miR-205-5p表达,NEGR1是miR-205-5p的靶基因。上调NEGR1逆转了下调MCM3AP-AS1对OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖和凋亡的影响。结论下调MCM3AP-AS1可能通过调控miR-205-5p/NEGR1轴促进OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖,并降低细胞凋亡。

lncRNA MCM3AP-AS1靶向miR-524-5p在CIK细胞诱导肺癌细胞A549凋亡中作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1(lncRNA MCM3APAS1)参与细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞杀伤肺癌细胞过程中的调控作用,并确定MCM3AP-AS1的发挥功能的靶基因和分子机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定CIK细胞对A549细胞的杀伤效应。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测与CIK细胞共培养前后A549细胞中MCM3AP-AS1和miR-524-5p的表达水平。流式细胞术检测CIK细胞共培养前后A549细胞凋亡情况。将MCM3AP-AS1过表达载体、miR-524-5p抑制物、pcDNA-MCM3AP-AS1+miR-524-5p分别转染A549细胞,与CIK细胞共培养后,流式细胞术检测A549细胞凋亡变化。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证MCM3AP-AS1对miR-524-5p的靶向作用。结果 CIK细胞大体以时间、浓度依赖性方式杀伤肺癌细胞,选择效靶比20∶1作用12 h进行后续研究。与CIK细胞共培养后,A549细胞MCM3AP-AS1的表达显著降低,miR-524-5p的表达显著升高,A549细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。过表达MCM3AP-AS1或干扰miR-524-5p表达后,CIK细胞对A549细胞的凋亡促进作用显著降低(P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负性调控miR-524-5p表达。过表达miR-524-5p可以逆转过表达MCM3AP-AS1对CIK细胞诱导的A549细胞凋亡的影响(P<0.05)。结论 CIK细胞通过调控MCM3AP-AS1/miR-524-5p通路促进肺癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗肺癌提供新的依据。

LncRNA MCM3AP-AS1在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者组织中长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1 (lncRNA MCM3AP-AS1)的表达情况及其临床意义。方法 收集2017年1月至2018年7月在咸阳市中心医院血液内科接受手术治疗的80例DLBCL患者术中切除的组织(癌组织及其对应的癌旁组织),使用q RT-PCR法检测组织中MCM3AP-AS1、微小RNA (miR)-195-5p表达水平;收集DLBCL患者临床病理资料,术后随访3年,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p不同表达水平与患者病理特征的关系;Pearson法分析MCM3AP-AS1与miR-195-5p的相关性;Logistics回归分析影响DLBCL患者预后不良的主要因素;构建Kaplan-Meier生存曲线,分析MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与DLBCL患者3年累积生存率的关系。结果 DLBCL组织中MCM3AP-AS1表达水平为1.64±0.48,明显高于癌旁组织的1.26±0.35;miR-195-5p表达水平为0.69±0.22,明显低于癌旁组织的1.08±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);DLBCL组织中MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关(r=-0.560,P=0.000);MCM3AP-AS1、miR-195-5p表达水平与患者临床分期、B症状、国际预后指数(IPI)评分、肿瘤直径有关(P<0.05);生存分析表明,MCM3AP-AS1低表达、miR-195-5p高表达患者的3年累积生存率较高;此外,MCM3AP-AS1、miR-195-5p水平、IPI评分、临床分期、B症状是影响患者预后的主要因素(P<0.05)。结论 DLBCL中MCM3AP-AS1高表达,miR-195-5p低表达,MCM3AP-AS1与miR-195-5p呈负相关,两者表达水平均与DLBCL病理特征有关,可影响预后。

宫颈鳞状细胞癌组织LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1表达与增殖侵袭基因和预后的关系

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)组织长链非编码核糖核酸(LncRNA)DC-STAMP结构域1-反义1(DCST1-AS1)、LncRNA MCM3AP反义RNA 1(MCM3AP-AS1)表达与增殖侵袭基因和预后的关系。方法:选择2018年1月至2020年1月苏州大学第二附属医院收治的124例CSCC患者,取CSCC组织及其癌旁正常组织,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA DCST1-AS1、LncRNA MCM3AP-AS1以及增殖基因(YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε)和侵袭基因(Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1)m RNA表达。患者出院后随访3年。Pearson相关性分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与增殖基因、侵袭基因的相关性。分析Lnc RNA DCST1-AS1、Lnc RNA MCM3AP-AS1表达与临床病理特征的关系。绘制Kaplan-Meier曲线分析预后情况,多因素COX回归分析影响CSCC患者预后的因素。结果:CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于癌旁组织(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于癌旁组织(P<0.05)。YAP1、Piwil2、EZH2、PKCε、Rab11、TUG1、Gli1、FoxM1 m RNA水平与CSCC癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达呈正相关(P<0.05),与Lnc RNA MCM3AP-AS1呈负相关(P<0.05)。低中度分化、FIGO分期Ⅲa期、盆腔淋巴结转移CSCC患者癌组织中Lnc RNA DCST1-AS1表达高于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1表达低于高度分化、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者(P<0.05)。Lnc RNA DCST1-AS1高表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1低表达CSCC患者3年总生存率低于Lnc RNA DCST1-AS1低表达、Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达患者(P<0.05)。多因素COX回归分析显示盆腔淋巴结转移、Lnc RNA DCST1-AS1高表达是CSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05),Lnc RNA MCM3AP-AS1高表达是保护因素(P<0.05)。结论:CSCC组织中LncRNA DCST1-AS1表达上调,LncRNA MCM3AP-AS1表达下调,且与CSCC增殖侵袭和预后不良有关。

LncRNA MCM3AP-AS1调节miR-424-5p/PSAT1轴对乳腺癌恶性进展的影响

目的:探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)调节微小核糖核酸(miR)-424-5p/磷酸丝氨酸氨基转移酶1(PSAT1)轴对乳腺癌恶性进展的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中LncRNA MCM3AP-AS1、miR-424-5p和PSAT1信使核糖核酸(m RNA)的表达水平。构建LncRNA MCM3AP-AS1低表达模型、miR-424-5p敲低与过表达模型,并使用RT-qPCR方法验证转染模型构建的成功。分别采用四氮甲基唑蓝(MTT)法、Transwell实验检测乳腺癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。免疫印迹法检测各组MDA-MB-231细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和PSAT1蛋白的表达。经生物信息学分析后,采用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫共沉淀(RIP)实验分别验证LncRNA MCM3AP-AS1与miR-424-5p、miR-424-5p与PSAT1之间的靶向关系。结果:在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT549、BT20中MCM3AP-AS1、PSAT1 m RNA的表达水平显著高于MCF-10A(P<0.05),miR-424-5p表达水平显著低于MCF-10A(P<0.05)。敲低MCM3AP-AS1或过表达miR-424-5p均可以降低MDA-MB-231细胞的吸光度(OD490)值、细胞迁移数目和细胞侵袭数目、CyclinD1、N-cadherin和PSAT1蛋白表达水平(P<0.05),提高细胞E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05)。敲低miR-424-5p的表达逆转了下调MCM3AP-AS1对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭以及相关蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实MCM3AP-AS1靶向负调控miR-424-5p表达,miR-424-5p靶向负调控PSAT1的表达。结论:LncRNA MCM3AP-AS1在乳腺癌中呈高表达,其低表达可通过靶向调节miR-424-5p/PSAT1轴抑制乳腺癌的恶性进展。

长链非编码RNA MCM3AP-AS1在老年晚期乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)MCM3AP-AS1在乳腺癌患者中的表达及其临床病理意义。方法:收集老年女性(年龄≥60岁)晚期乳腺癌患者肿瘤组织穿刺标本64例,应用qRT-PCR技术检测肿瘤组织中的LncRNA MCM3AP-AS1表达情况,免疫组化检测乳腺癌组织样本中的雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,Her-2)、Ki-67抗原、Dickkopf相关蛋白1(Dickkopf-related protein 1,Dkk1)蛋白表达情况。Her-2免疫组化结果2+的患者进一步行荧光原位杂交试验(FISH)检测。分析LncRNA MCM3AP-AS1表达情况与乳腺癌患者临床病理之间的关系及对预后的影响。结果:组织分化差及ER、PR阴性的乳腺癌患者肿瘤组织中LncRNA MCM3AP-AS1的表达明显升高(P <0.01)。LncRNA MCM3AP-AS1的表达与是否存在肺、肝、脑转移均无相关性,但与骨转移关系密切(P <0.01)。激素受体阴性、Her-2阳性、Dkk1阳性的患者更容易发生骨转移(P <0.01)。LncRNA MCM3AP-AS1高表达的乳腺癌患者无进展生存期明显低于低表达组(P <0.01)。结论:LncRNA MCM3APAS1与女性乳腺癌的恶性生物学行为关系密切。检测LncRNA MCM3AP-AS1表达对明确乳腺癌发病、转移机制及判断乳腺癌患者预后具有潜在的价值。

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-876-5p促进人结直肠癌细胞系的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白-反义链1(MCM3AP-AS1)靶向调控miR-876-5p对结直肠癌(CRC)细胞的增殖和迁移的作用。方法实时定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测CRC组织和细胞中MCM3AP-AS1的表达;用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测CRC细胞的增殖和迁移;采用生物信息分析、双荧光素酶基因报告实验、RT-qPCR验证MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果与非肿瘤组织和正常结直肠上皮细胞系相比,MCM3AP-AS1在CRC组织和细胞系中表达上调(P<0.05);敲低MCM3AP-AS1能抑制CRC细胞增殖和迁移(P<0.05);生物信息学分析、双荧光素酶基因报告实验和RT-qPCR表明MCM3AP-AS1与miR-876-5p可相互作用;miR-876-5p可削弱MCM3AP-AS1对CRC细胞增殖和迁移的促进作用(P<0.05)。结论MCM3AP-AS1可以通过吸附miR-876-5p促进CRC细胞的增殖和迁移。

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-876-5p对卵巢癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1(MCM3AP antisense RNA 1,MCM3AP-AS1)靶向调控微小RNA-876-5p(miR-876-5p)对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,及卵巢癌细胞系(CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90)和正常卵巢上皮细胞系(HOSE)。采用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平;建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型,采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖,采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平;采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为(8.45±0.86),高于癌旁组织(4.45±0.45);在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3(1.53±0.12),SKOV3(1.82±0.23),OVCAR3(1.34±0.12),高于正常卵巢上皮细胞HOSE(1.00±0.10);下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。