LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控ZNF217对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

背景与目的针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗和诊断仍然是医学界的难题,而探究NSCLC发生发展的分子机制是当前研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NORAD在多种癌细胞中高表达,可能是促进NSCLC发生的分子靶点。探讨LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)对NSCLC细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B、肺癌H460细胞和顺铂(Cisplatin,DDP)耐药细胞株H460/DDP细胞中NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达;将H460/DDP细胞分为control组、si-NC组、si-NORAD组、miR-NC组、miR-199a-3p mimic组、si-NORAD+inhibitor NC组、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组。检测细胞增殖、细胞凋亡情况,各组细胞NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达,Ki-67、caspase-9、ZNF217蛋白表达量;验证miR-199a-3p与NORAD和ZNF217的关系。结果与BEAS-2B细胞相比,H460和H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与H460细胞相比,H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05)。与control组和si-NC组相比,si-NORAD组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-199a-3p mimic组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p、caspase-9表达显著升高(P<0.05)。与si-NORAD+inhibitor NC组相比,si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组H460/DDP细胞增殖率、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著升高,凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著降低(P<0.05)。结论下调NORAD表达可增强miR-199a-3p表达并抑制ZNF217表达,进而抑制H460/DDP细胞增殖,促进其凋亡,增强其DDP化疗敏感性。

LncRNA NORAD对高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子和纤维化因子表达的影响及机制研究

目的:探讨LncRNA NORAD对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化因子表达的影响及分子机制。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为空白对照(NC)组、渗透压对照(OSM)组、高糖处理(HG)组、si-NC+HG组、si-LncRNA NORAD+HG组、miR-NC+HG组、miR-367-3p+HG组、anti-miR-NC+si-LncRNA NORAD+HG组、anti-miR-367-3p+si-LncRNA NORAD+HG组。实时荧光定量PCR(q PCR)检测LncRNA NORAD和miR-367-3p的表达水平;蛋白质印迹(Western blotting)法检测α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TGF-β1、IL-1β水平;双荧光素酶报告实验检测LncRNA NORAD和miR-367-3p的靶向关系。结果:高糖诱导的人肾小管上皮细胞中LncRNA NORAD表达水平升高,miR-367-3p表达水平降低(P<0.05);α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白的表达水平升高,TGF-β1、IL-1β水平升高(P<0.05)。低表达LncRNA NORAD或过表达miR-367-3p,高糖诱导的人肾小管上皮细胞中α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白的表达水平降低,TGF-β1、IL-1β水平降低(P<0.05)。LncRNA NORAD靶向调控miR-367-3p;低表达miR-367-3p可以逆转LncRNA NORAD低表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性和纤维化因子表达的抑制作用。结论:抑制LncRNA NORAD表达可能通过靶向上调miR-367-3p抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化因子表达。

LncRNA NORAD通过调节miR-451a对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨lncRNA NORAD对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞HK-2上皮间充质转分化(EMT)的影响及作用机制。方法:HK-2细胞分为对照组、高糖组、si-NORAD+高糖组、si-NC+高糖组、miR-451a+高糖组、miR-NC+高糖组、si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组及si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组,RT-qPCR检测各组细胞中NORAD和miR-451a表达水平,Western Blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证NORAD与miR-451a调控关系。结果:与对照组比较,高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平升高(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P<0.05)。与si-NC+高糖组比较,si-NORAD+高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平降低(P<0.05),E-cadherin水平升高(P<0.05)。与miR-NC+高糖组比较,miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平降低(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平升高(P<0.05)。与si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组比较,si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平升高(P<0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P<0.05)。NORAD在HK-2细胞中负调控miR-451a表达。结论:下调NORAD表达可抑制高糖诱导的HK-2细胞发生EMT,其作用机制与上调miR-451a表达有关。

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P<0.05),miR-363-3p表达显著下调(P<0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P<0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P<0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。

LncRNA NORAD靶向miR-34a对口腔鳞癌细胞MMP-2表达的机制研究

目的:探究lncRNA NORAD靶向miR-34a对口腔鳞状细胞癌MMP-2表达的影响。方法:将SCC-9细胞随机分为control组(不转染任何质粒)、si-NORAD(SCC-9细胞转染si-NORAD质粒)及si-NC组(SCC-9细胞转染阴性对照质粒)、miR-34a组(SCC-9细胞转染miR-34a mimics质粒)、si-NORAD+miR-34a inhibitor组(SCC-9细胞同时转染si-NORAD质粒和miR-34a inhibitor质粒)。RT-PCR检测细胞中NORAD、miR-34a表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹(Western blotting)检测细胞中MMP-2蛋白表达;荧光素酶实验报告检测NOARD和miR-34a的靶向关系。结果:与人永生化口腔上皮细胞HIOEC相比,口腔鳞癌细胞株中NORAD表达均明显增加,miR-34a表达明显降低,且SCC-9细胞中NORAD表达和miR-34a表达变化最显著(P<0.05)。与control组相比,si-NORAD组和miR-34a组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2蛋白表达均明显降低(P<0.05);control组和si-NC组、si-NORAD组和miR-34a组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2蛋白表达相比无明显差异(P>0.05);与si-NORAD组相比,si-NORAD+miR-34a inhibitor组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2蛋白表达均明显增加(P<0.05)。结论:敲减NORAD可靶向调控miR-34a,进而抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和细胞中MMP-2表达。

LncRNANORAD通过ceRNA对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响机制

探究长链非编码RNA(LncRNA)DNA损伤激活的非编码RNA(NORAD)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭及迁移影响及可能机制。方法 采用基因芯片法在口腔鳞癌组织和癌旁组织中筛选差异表达的lncRNA及miRNA,并确定以LncRNA NORAD、miR-520b作为研究对象,采用CCK8、Transwell和划痕实验测定低表达LncRNA NORAD对OSCC细胞株Cal-27增殖、侵袭、转移能力的影响,双荧光素酶实验预测分析miR-520b与LncRNA NORAD、抗细胞凋亡因子(DAD1)作用关系。结果 基因芯片及RT-PCR显示,OSCC组织LncRNA NORAD、DAD1 mRNA表达低于癌旁组织,miR-520b表达高于癌旁组织(P<0.05);CCK8、Transwell和划痕实验显示,下调NORAD表达后Cal-27细胞增殖、侵袭、转移能力均降低(P<0.05);荧光素酶实验显示,miR-520b能分别与NORAD和DAD1的3'-UTR靶向结合,且NORAD能通过吸附miR-520b作为内源性竞争RNA(ceRNA)。结论 LncRNA NORAD能作为miR-520b的竞争性RNA上调DAD1表达,促进OSCC细胞增殖、侵袭及迁移。

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组:对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外,其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果:与对照组比较,LPS组心肌细胞中NORAD的表达量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率升高,miR-378a-3p的表达量降低(P均<0.05);与LPS+阴性序列组比较,LPS+干扰NORAD组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平降低及细胞凋亡率降低(P均<0.05);双荧光素酶报告实验证实NORAD可靶向结合miR-378a-3p;与LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组比较,LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率升高(P均<0.05)。结论:NORAD可通过调控miR-378a-3p减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。