LncRNA NUTM2A-AS1调控miR-183-5p/TGFα影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的研究

目的探讨LncRNA NUTM2A-AS1对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法将软骨细胞随机分为对照组、模型组(5μg/L的IL-1β)、miR-183-5p+模型组、miR-NC+模型组、si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、si-TGFα+模型组、si-NC+模型组、pcDNA-TGFα+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组、pcDNA+si-LncRNA NUTM2A-AS1+模型组;运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA NUTM2A-AS1、miR-183-5p和TGFαmRNA的表达水平;运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;运用流式细胞术检测软骨细胞凋亡情况;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α、IL-6水平;通过双荧光素酶报告实验检测NUTM2A-AS1、miR-183-5p、TGFα之间的靶向关系。结果IL-1β诱导的软骨细胞中LncRNA NUTM2A-AS1和TGFα表达升高,miR-183-5p表达降低,软骨细胞活性降低,而凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高。低表达LncRNA NUTM2A-AS1、低表达TGFα或过表达miR-183-5p后可促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎症反应。结论低表达LncRNA NUTM2A-AS1通过调控miR-183-5p/TGFα抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

LncRNA HIF1A-AS2通过抑制miR-138-5p促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)缺氧诱导因子-1α-反义链2(hypoxia-inducible factor 1 alpha antisense RNA 2,HIF1A-AS2)对滋养层细胞侵袭和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和机制。方法比较20个子痫前期(preeclampsia,PE)胎盘(PE组)和20个正常胎盘(对照组)组织中HIF1A-AS2及其预测的靶基因miR-138-5p的表达水平。选用人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/Svneo,在转染HIF1A-AS2过表达质粒、miR-138-5p拟似物和抑制物及各自阴性对照的HTR-8/SVneo细胞中,通过CCK-8检测细胞增殖、Transwell实验检测侵袭、Western blot检测细胞EMT标记分子和转录因子表达来研究HIF1A-AS2和miR-138-5p对滋养层细胞的作用和机制。通过荧光素酶基因报告实验验证HIF1A-AS2和miR-138-5p的结合关系。结果 PE胎盘中HIF1A-AS2显著降低(P<0.05),而miR-138-5p的表达显著增高(P<0.05)。过表达HIF1A-AS2能够抑制miR-138-5p的表达(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力(P<0.05),上调EMT标记分子Vimentin和N-cadherin以及EMT转录因子Twist1的表达水平(P<0.05)。此外,miR-138-5p抑制物与过表达HIF1A-AS2对HTR-8/SVneo细胞的作用相同,而miR-138-5p拟似物能够减弱过表达HIF1A-AS2对该细胞的作用。另外,HIF1A-AS2和miR-138-5p在HTR-8/Svneo细胞中可以直接结合。结论 LncRNA HIF1A-AS2能够促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化,其作用可能通过抑制miR-138-5p水平来实现。

LncRNA HIF1A-AS2对人骨髓间充质干细胞的影响

[目的]探讨LncRNA HIF1A-AS2对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用及机制。[方法]人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h MSCs)分为6组,为空白组、骨诱导组、AS2 NC过表达组、AS2过表达组、AS2 NC干扰组、AS2干扰组。后4组分别体外转染相应的LncRNA HIF1A-AS2的慢病毒载体,再将除空白组外的hMSCs进行成骨诱导培养。检测细胞凋亡、细胞增殖和细胞钙化沉积情况。检测HIF1A-AS2、MMP2和VEGF165 mRNA的表达水平及MMP2和VEGF165蛋白的表达水平。[结果]RT-PCR结果显示,成骨诱导分化最强时间点为7 d。细胞凋亡率由高至低依次为,空白组>AS2干扰组>AS2 NC过表达组>AS2 NC干扰组>骨诱导组>AS2过表达组,整体差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖OD值由低至高依次为:空白组<AS2干扰组<AS2 NC干扰组<骨诱导组<AS2 NC过表达组<AS2过表达组,整体差异有统计学意义(P<0.05)。AS2过表达组的红色钙化结节沉积较为显著,AS2干扰组的红色钙化结节沉积数量相对较少。AS2过表达组的MMP2和VEGF165的mRNA和蛋白表达水平显著高于AS2干扰组(P<0.05)。[结论]LncRNA HIF1A-AS2过表达会促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加MMP2和VEGF165的表达水平,促进hMSCs细胞分化为成骨细胞。

长链非编码RNA HIF1A-AS2在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的检测LncRNA HIF1A-AS2在结直肠癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2012年12月至2015年12月行结直肠癌患者根治术的114例结直肠癌患者临床病理资料;收集其癌组织及相对应的癌旁组织(距病灶2 cm)和正常组织(距癌灶边缘>5 cm)标本。通过qRT-PCR检测结直肠癌组织、癌旁组织及癌旁正常组织中HIF1A-AS2相对表达水平。取114例入组患者HIF1A-AS2表达水平的平均数,将HIF1A-AS2表达水平大于等于平均数的89例纳入高表达组,其余纳入低表达组;分析HIF1A-AS2表达与临床病理特征之间的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析两组患者术后5年生存情况,Log-rank检验比较生存差异;COX比例风险回归模型分析预后不良的独立危险因素;P<0.05为差异有统计学意义。结果结直肠癌组织中HIF1A-AS2相对表达量高于癌旁组织及正常组织(P<0.001)。HIF1A-AS2表达与临床分期及组织分化程度显著相关(P<0.05)。HIF1A-AS2高表达组患者术后5年总生存率低于HIF1A-AS2低表达组(Log-rankχ^2=5.037,P=0.025)。COX多因素分析显示淋巴结转移、临床分期Ⅳ期、中-低分化、有远处转移及HIF1A-AS2显著高表达是影响结直肠癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌组织中HIF1A-AS2显著高表达,与临床病理及预后密切相关,是影响结直肠癌患者预后不良的危险因素之一。