糖尿病肾病患者外周血lncRNA PACER表达与炎症反应及肾功能进展的关系

目的研究糖尿病肾病(DN)患者外周血长链非编码(lncRNA)PACER表达与炎症反应及肾功能进展的关系。方法选择2018年1月至2020年5月期间在石家庄市第二医院就诊的72例DN患者作为DN组、80例2型糖尿病患者作为DM组、88例健康者作为对照组,检测外周血lncRNA PACER的表达水平及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量。根据DN患者的24 h尿白蛋白水平分为微量白蛋白尿(30~300 mg/24 h)为和大量蛋白尿(>300 mg/24 h),根据估算内生肌酐清除率分为慢性肾脏病(CKD)1期、2期、3期,随访DN患者肾功能不良进展的累积发生情况。结果各组外周血中lncRNA PACER表达水平及血清中TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平比较:DN组>DM组>对照组,差异有统计学意义(F=14.822,23.811,17.582,19.508,P<0.05)。DN组中大量白蛋白尿患者高于微量白蛋白尿患者,差异有统计学意义(t=2.215,9.300,6.257,10.018,P<0.05)。DN组中CKD1期患者<CKD2期患者<CKD3患者,差异有统计学意义(F=14.952,22.812,19.382,26.842,P<0.05);DN组中lncRNA PACER高表达患者的肾功能不良进展累积发生率高于lncRNA PACER低表达患者(P<0.05);lncRNA PACER表达水平对DN患者肾功能不良进展具有预测价值。结论外周血lncRNA PACER高表达与DN病情加重、炎症反应激活及肾功能不良进展有关。

lncRNA PACER促进脓毒症急性肺损伤炎症反应的实验研究

目的探讨lncRNA PACER对小鼠脓毒症急性肺损伤炎症反应的促进作用。方法分离和培养急性肺损伤和健康非吸烟者的肺泡巨噬细胞,以及获取细菌脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织,采用qRT-PCR方法检测lncRNA PACER的表达;过表达或敲低PACER后,ELISA方法检测THP-1和RAW264.7细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达;对LPS所致ALI小鼠,尾静脉注射PACER siRNA慢病毒后,ELISA检测小鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6的表达,HE染色观察肺组织病理学变化。结果 ALI患者肺泡巨噬细胞和ALI小鼠肺组织中lncRNA PACER表达均显著升高(P<0.01);细胞过表达PACER后,细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达升高,而敲低PACER后,炎性因子TNF-α、IL-6的表达则降低(P<0.01); ALI小鼠敲低PACER后,小鼠肺组织和血清中炎性因子TNF-α、IL-6的表达均显著降低(P<0.01),肺组织损伤程度明显减弱。结论 lncRNA PACER可显著促进脓毒症急性肺损伤炎症反应,为明确lncRNA PACER作为ALI防治的靶标提供了依据。

重症肺炎支原体肺炎患儿外周血长链非编码核糖核酸P50相关的环氧合酶2外源性核糖核酸与核因子-κB表达的相关性及临床意义

目的探讨重症肺炎支原体肺炎患儿外周血长链非编码核糖核酸(long non-coding RNA,lncRNA)P50相关的环氧合酶2外源性核糖核酸(p50-associated cyclooxygenase-2 extragenic RNA,PACER)与核因子(nuclear factor,NF)-κB表达的相关性及临床意义。方法收集2020年7月—2023年7月间在绵阳市第一人民医院接受治疗的重症肺炎支原体肺炎患儿238例作为重症组,另选取同期在我院接受治疗的轻症肺炎支原体肺炎患儿100例作为轻症组,体检的健康儿童100例作为对照组。分析3组的外周血lncRNA PACER与NF-κB mRNA表达水平的差异及相关性。根据病情转归将重症组患儿分为好转组(n=197)、恶化组(n=41),对比2组入院后早期外周血lncRNA PACER与NF-κB mRNA表达水平的差异,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析重症组患儿外周血lncRNA PACER、NF-κB mRNA表达量对治疗转归的预测价值。结果重症组、轻症组、正常对照组的外周血lncRNA PACER、NF-κB表达水平逐渐降低,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。重症组患儿外周血lncRNA PACER表达水平与血清NF-κB水平呈正相关(P<0.05)。恶化组患儿入院时外周血lncRNA PACER、NF-κB mRNA表达量分别高于好转组患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,入院早期外周血lncRNA PACER表达量预测重症肺炎患儿预后不良的最佳截断值为1.715,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.816[95%CI:0.733~0.898],对应的灵敏度、特异度分别为71.15%、74.47%;外周血NF-κB mRNA表达量预测重症肺炎患儿预后不良的最佳截断值为2.890,AUC为0.776[95%CI:0.687~0.865],对应的灵敏度、特异度分别为74.0%、63.27%。结论重症肺炎支原体肺炎患儿外周血lncRNA PACER与NF-κB的表达水平呈正相关且对预后具有预测价值。

LncRNA-PACER通过NF-κB通路上调COX-2和PGE2促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭

背景:p50蛋白相关的环氧合酶-2外源性RNA(PACER)是新近发现的位于环氧合酶-2(COX-2)启动子上游的反义长链非编码RNA(lncRNA)。初步研究显示,PACER参与调节巨噬细胞和骨肉瘤细胞中COX-2的表达,但这种lncRNA在结直肠癌中的作用尚不清楚。我们研究了PACER在结直肠癌中的表达及其对细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时定量PCR(RT-qPCR)方法分析PACER在结直肠癌组织和细胞系中的表达,采用MTT实验研究敲除PACER对细胞增殖的抑制作用,并通过划痕愈合实验、克隆形成实验、细胞侵袭实验分析该lncRNA对结直肠癌细胞侵袭的促进作用。然后,我们使用荧光原位杂交实验(FISH)确定PACER的亚细胞定位,在PACER敲除后通过western blot对COX-2进行蛋白定量,通过荧光素酶实验分析PACER对COX-2启动子区域的调节。建立裸鼠肿瘤移植模型,分析PACER对体内结直肠癌细胞的影响。最后,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PACER敲除后前列腺素E2(PGE2)水平。结果:RT-qPCR结果显示,PACER在结直肠癌组织和细胞中均呈高表达,其高表达与预后不良有关。MTT分析、划痕愈合实验、克隆形成实验和细胞侵袭实验结果显示,PACER促进结直肠癌细胞在体外的增殖、侵袭和转移。FISH实验显示,lncRNA主要定位于细胞核中。RTqPCR检测发现,PACER增加COX-2 mRNA水平。Western blot分析表明,在正常情况下,敲除PACER会降低COX-2蛋白水平;但在缺少p50蛋白的情况下,PACER敲除后COX-2蛋白表达增加并保持高表达。萤光素酶实验显示,PACER调控COX-2启动子区域。裸鼠结直肠癌异种移植模型显示,PACER可促进体内结直肠肿瘤的发生。ELISA检测结果表明,敲除PACER可抑制PGE2的产生。结论:PACER通过NF-jB通路调节结直肠癌中COX-2表达。PACER高表达可以通过增加COX-2和PGE2的合成来促进结直肠肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。