LncRNA SATB2-AS1调控miR-373-5p/BTG3轴对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究长链非编码RNA SATB2-AS1作为内源性竞争RNA调控miR-373-5p/BTG3轴在宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞增殖、凋亡中的作用。方法qRT-PCR技术检测CC患者癌旁组织、癌组织中LncRNA SATB2-AS1、miR-373-5p和BTG3的表达水平。预测并验证LncRNA SATB2/miR-373-5p/BTG3之间的相互作用关系。干预细胞中SATB2-AS1和miR-373-5p的表达并将CC细胞分组,MTT检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果qRT-PCR显示对比癌旁组织和正常宫颈细胞,SATB2-AS1和BTG3在癌组织和CC细胞中表达明显下降,miR-373-5p在癌组织和CC细胞中表达显著上升(均P<0.05)。SATB2-AS1和miR-373-5p的靶向关系被验证。与NC组比较,过表达SATB2-AS1能抑制癌细胞增殖,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。而过表达miR-373-5p则能促进癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,但该作用被SATB2-AS1部分挽救。结论上调LncRNA SATB2-AS1的表达水平可通过调控miR-373-5p/BTG3轴参与CC的进展,抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的作用及其机制研究

目的探索LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中的功能及可能的机制。方法原位杂交和免疫组织化学分别检测ZEB2-AS1和ZEB2在卵巢癌组织中的表达;建立ZEB2-AS1的过表达和沉默SKOV3细胞模型;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;细胞免疫荧光和Western blotting检测上皮-间充质相互作用(EMT)相关蛋白的表达;双萤光素酶基因报告实验检测ZEB2-AS1与ZEB2、microRNA-145(miR-145)的结合关系。结果ZEB2-AS1和ZEB2均表达于卵巢癌组织中的细胞质和细胞核;相比SKOV3细胞,ZEB2-AS1过表达的SKOV3细胞增殖能力增强(P<0.05),凋亡能力减弱(P<0.05),侵袭和迁移能力增强(P<0.05),S期细胞数增加(P<0.05),G1期细胞数减少(P<0.05);EMT相关蛋白E-cadherin相对表达量降低(P<0.05),N-cadherin和Vimentin相对表达量升高(P<0.05);而ZEB2-AS1沉默的SKOV3细胞则相反。双萤光素酶报告实验结果证实,ZEB2-AS1和miR-145具有结合关系,ZEB2-AS1与ZEB2 mRNA具有结合关系。结论LncRNA ZEB2-AS1联合亲本基因ZEB2在卵巢癌SKOV3细胞中发挥促EMT的功能作用。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。

长链非编码RNA SATB2-AS1抑制肺腺癌进展的机制研究

目的长链非编码RNA(lncRNA)SATB2的反义转录物(SATB2-AS1)对肺腺癌细胞生物学功能的影响和机制研究。方法收集25例肺腺癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,检测SATB2-AS1表达水平。用lncRNA SATB2-AS1的过表达载体(pcDNA-SATB2-AS1)和shRNA或IGF2BP2的shRNA(sh-SATB2-AS1;sh-IGF2BP2)和/或SLC7A11的shRNA(sh-SLC7A11)转染肺腺癌细胞A549。RIP分析评估IGF2BP2蛋白分别与SATB2-AS1或SLC7A11 mRNA的结合;CCK-8和Transwell实验分别用于检测肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力;RT-qPCR和Western blot分别检测基因和蛋白表达。结果与癌旁组织和人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B相比,SATB2-AS1在肺腺癌患者的肿瘤组织和肺腺癌细胞系中的表达显著下调(P<0.01)。过表达SATB2-AS1抑制A549细胞增殖和侵袭,沉默SATB2-AS1促进细胞增殖和侵袭(P<0.05)。过表达SATB2-AS1后A549细胞中的Fe2+浓度、活性氧(ROS)水平以及丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.01),还原性谷胱甘肽(GSH)含量及铁死亡关键蛋白SLC7A11、GPX4的表达显著升高(P<0.01)。SATB2-AS1通过与IGF2BP2蛋白结合显著促进IGF2BP2蛋白与SLC7A11 mRNA结合,降低SLC7A11 mRNA的稳定性(P<0.01)。沉默SLC7A11显著逆转了SATB2-AS1沉默对A549细胞的影响。结论lncRNA SATB2-AS1通过招募IGF2BP2蛋白破坏SLC7A11mRNA稳定性,诱导肺腺癌细胞铁死亡,抑制细胞增殖和侵袭,从而抑制肺腺癌进展。

lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症中的功能

【背景】奶牛乳腺炎是奶牛中危害最严重的疾病之一,严重影响乳品质,不仅造成经济损失,甚至危及人类健康。已有研究表明,lncRNAs广泛参与人和动物的炎症和免疫调节。lncRNA RRAS2-AS1是我们在前期研究中新发现的差异表达lncRNA,其表达模式和功能尚不清楚。【目的】通过探究lncRNA RRAS2-AS1在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)炎症反应中的作用机制,为奶牛乳腺炎的分子调控机制解析和抗乳腺炎分子选育提供理论依据。【方法】利用RT-PCR和RACE等技术进行了lncRNA RRAS2-AS1的克隆,并通过生物信息学方法进行lncRNA RRAS2-AS1的靶基因预测及功能富集分析;利用细胞免疫荧光技术鉴定bMECs,利用细胞核质分离及半定量PCR技术检测了lncRNA RRAS2-AS1的亚细胞定位情况;采用qRT-PCR检测了lncRNA RRAS2-AS1在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导bMECs炎症反应和乳腺炎奶牛乳腺组织中的表达模式;利用LPS诱导bMECs构建了炎症细胞模型,在此基础上,通过lncRNA超表达、qRT-PCR和ELISA等技术研究了lncRNA RRAS2-AS1对炎性bMECs内的促炎细胞因子基因、增殖相关基因和凋亡相关基因在mRNA和(或)蛋白质水平表达的影响,同时采用EdU、CCK-8和流式细胞术进一步验证了lncRNA RRAS2-AS1对bMECs增殖、活力和凋亡的影响。【结果】lncRNA RRAS2-AS1基因的长度为363 bp,主要定位于细胞质中。表达量检测结果表明,与对照组相比,lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导炎症的bMECs和乳腺炎组织中的表达量显著下调(P<0.05);lncRNA RRAS2-AS1超表达试验结果表明,与对照组相比,lncRNA RRAS2-AS1超表达组的炎症信号通路关键基因(TLR4和NF-κB1)、促炎细胞因子基因(IL-1β、IL-6和IL-8)、促凋亡基因(BAD、CASP3和BAX等)的表达量显著下调(P<0.01),而增殖标志基因(CDK2、CDK4和PCNA)的表达量显著上调(P<0.05)。此外,lncRNA RRAS2-AS1超表达组的细胞活力显著增加(P<0.05),而bMECs的凋亡率极显著降低(P<0.01)。【结论】lncRNA RRAS2-AS1在LPS诱导bMECs的炎症反应和乳腺炎奶牛的乳腺组织中均显著下调;超表达lncRNA RRAS2-AS1可下调促炎细胞因子IL-6、IL-8和IL-1β在mRNA和蛋白质水平的表达,并促进细胞活力和增殖、抑制细胞凋亡,从而减轻LPS诱导的bMECs炎症反应,该结果可为解析奶牛乳腺炎的分子调控网络奠定了基础。

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA2蛋白表达;小鼠移植瘤实验验证lncRNA PSMA3-AS1对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2表达升高,miR-142-3p表达降低(P<0.05);lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2在SKOV3细胞中表达水平最高,miR-142-3p在SKOV3细胞中表达水平最低;下拉实验和双荧光素酶报告显示,lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p存在靶向关系;敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p后,细胞OD值、细胞克隆数、划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、HMGA2表达显著降低,细胞凋亡率、cleaved caspase 3表达显著增加(P<0.05);抑制miR-142-3p表达或过表达HMGA2可逆转敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用;体内实验表明,敲低lncRNA PSMA3-AS1表达可抑制小鼠肿瘤生长。结论:lncRNA PSMA3-AS1在卵巢癌中高表达,敲低lncRNA PSMA3-AS1可调节miR-142-3p/HMGA2轴抑制卵巢癌恶性发展。

lncRNA SBF2-AS1通过调控miR-140-5p/VEGFA分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的:探讨1ncRNASBF2-AS1通过调控miR-140-5p/.血管内皮生长因子A(VEGFA)分子轴对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNA SBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS 1+miR-140-5p mimic组5组。采用qPCR检测1ncRNA SBF2-AS1在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让1ncRNASBF2-AS1、miR-140-5p与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表达水平,Transwell实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果:1ncRNA SBF2-AS 1在宫颈癌组织及细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01),1ncRNA SBF2-AS 1靶向结合miR-140-5p,且VEGFA是miR-140-5p的靶基因(P<0.05)。敲降lncRNA SBF2-AS1抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,1ncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa细胞侵袭、迁移及EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:1ncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。

沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤增殖和迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44增殖、迁移和侵袭的影响及其可能作用机制。方法:收集病理确诊且临床资料完整的视网膜母细胞瘤组织标本25例,同时选取因外伤摘除眼球的正常视网膜组织9例为对照;qRT-PCR法检测正常视网膜组织、视网膜母细胞瘤组织、人正常视网膜血管内皮细胞ACBRI-181、视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44中DLGAP1-AS2、miR-1193的表达量;将si-NC、si-DLGAP1-AS2、miR-NC、miR-1193 mimic、si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor(共转染)分别转染至HXO-Rb44细胞;双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS2与miR-1193的靶向关系;CCK-8法、平板克隆形成实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成数、迁移及侵袭;Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:视网膜母细胞瘤组织中DLGAP1-AS2的表达量高于正常视网膜组织(P<0.05),而miR-1193的表达量低于正常视网膜组织(P<0.05);HXO-Rb44细胞中DLGAP1-AS2的表达量高于ACBRI-181细胞(P<0.05),miR-1193的表达量低于ACBRI-181细胞(P<0.05);DLGAP1-AS2可靶向调控miR-1193的表达;转染si-DLGAP1-AS2或转染miR-1193 mimic可抑制HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭;共转染si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor可降低转染si-DLGAP1-AS2对HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:沉默DLGAP1-AS2可通过靶向调控miR-1193表达而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移及侵袭。

子痫前期病人长链非编码RNA H19和长链非编码RNA HAND2-AS1表达水平与胰岛素抵抗的相关性研究

目的检测子痫前期病人胎盘组织、血清长链非编码RNA H19(LncRNA H19)与长链非编码RNAHAND2-AS1(Ln⁃cRNA HAND2-AS1)表达水平,并分析其与病人胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法将2021年1—12月在唐山市妇幼保健院建卡的子痫前期孕妇105例作为子痫前期组,根据子痫前期孕妇严重程度分为轻度子痫前期组与重度子痫前期组,另选取同期孕周、年龄相符的健康孕妇97例作为对照组,收集所有孕妇身体质量指数(BMI)、孕周、收缩压、舒张压、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)等一般资料,并计算稳态模型的IR指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定孕妇血清、胎盘组织中LncRNA H19,LncRNA HAND2-AS1水平;比较对照组与子痫前期组、轻度子痫前期组与重度子痫前期组间血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1水平;Pearson法分析子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1与HOMA-IR的相关性。结果子痫前期组病人收缩压、舒张压高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期病人收缩压、舒张压高于轻度子痫前期病人,孕周低于轻度子痫前期病人(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇24 h尿蛋白、FBG[(5.84±0.97)mmol/L比(4.22±0.70)mmol/L]、FINS[(13.37±2.23)mU/L比(7.52±1.25)mU/L]、HOMI-IR水平(3.47±0.57比1.41±0.23)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇24 h尿蛋白、FBG[(6.90±1.15)mmol/L比(5.24±0.85)mmol/L]、FINS[(13.97±2.32)mU/L比(13.05±2.17)mU/L]、HOMI-IR水平(4.27±0.71比3.03±0.50)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);与对照组相比,子痫前期组孕妇血清、胎盘组织Ln⁃cRNA H19(2.52±1.42比1.01±0.15,3.75±0.62比1.02±0.17)与LncRNA HAND2-AS1水平(1.98±0.33比1.01±0.15,2.87±0.47比1.02±0.17)升高(P<0.05),且重度子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19(2.84±0.47比2.34±0.39,4.28±0.71比3.45±0.57)与LncRNA HAND2-AS1水平(2.59±0.43比1.63±0.27,3.56±0.59比2.49±0.41)高于轻度子痫前期孕妇(P<0.05);子痫前期病人血清与胎盘组织间LncRNA H19水平呈正相关(r=0.55,P<0.05),血清与胎盘组织间LncRNA HAND2-AS1水平呈正相关性(r=0.65,P<0.05)。子痫前期孕妇血清、胎盘组织LncRNA H19水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.53、0.59,P<0.05);血清、胎盘组织LncRNA HAND2-AS1水平分别与HOMI-IR呈正相关(r=0.60、0.61,P<0.05)。结论子痫前期病人血清、胎盘组织LncRNA H19、LncRNA HAND2-AS1高表达,二者与IR密切相关,可能通过影响IR参与子痫前期发生发展。

lncRNA DLGAP1-AS2靶向miR-1193调控非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨lncRNA DLGAP1-AS2对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:选取49例肺癌患者的癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测DLGAP1-AS2和miR-1193的表达水平;将A549细胞分为si-DLGAP1-AS2组、si-NC组、miR-1193组、miR-NC组、si-DLGAP1-AS2+anti-miR-1193组、si-DLGAP1-AS2+anti-miR-NC组;MTT法、克隆形成实验及流式细胞术分别检测细胞活性、克隆形成数及细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS2和miR-1193的靶向关系。结果:NSCLC组织中DLGAP1-AS2表达水平高于癌旁组织,miR-1193表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。抑制DLGAP1-AS2表达或过表达miR-1193,A549细胞的活性降低,克隆形成数减少,A549细胞凋亡率升高(P<0.05)。DLGAP1-AS2靶向调控miR-1193;干扰miR-1193表达可减弱抑制DLGAP1-AS2表达对NSCLC A549细胞增殖和凋亡的作用。结论:抑制lncRNA DLGAP1-AS2表达可能通过靶向上调miR-1193抑制NSCLC A549细胞增殖,并促进其凋亡。

TNF-α和lncRNA DLX6-AS1在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达及诊断价值

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和长链非编码RNA(lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA 1(DLX6-AS1)在2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清中的表达水平及诊断价值。方法选取126例2型糖尿病患者为研究对象,根据骨密度(BMD)测定结果分为单纯2型糖尿病组(72例)和2型糖尿病合并骨质疏松症组(54例)。另选取同时期60例健康体检者作为对照组。酶联免疫法检测各组患者血清TNF-α表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血清lncRNA DLX6-AS1表达水平。Pearson相关性分析2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平与临床指标相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析TNF-α和lncRNA DLX6-AS1对2型糖尿病合并骨质疏松症的诊断价值,Logistic回归分析2型糖尿病合并骨质疏松症的影响因素。结果与健康对照组比较,单纯2型糖尿病组和2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。与单纯2型糖尿病组比较,2型糖尿病合并骨质疏松症组患者血清TNF-α和lncRNA DLX6-AS1表达水平均升高(P<0.05)。2型糖尿病合并骨质疏松症患者血清TNF-α、lncRNA DLX6-AS1与空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均呈正相关(P<0.05),与BMD呈负相关(P<0.05)。与TNF-α或lncRNA DLX6-AS1单独诊断比较,二者联合检测诊断2型糖尿病合并骨质疏松症的灵敏度、特异度及准确度升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1是2型糖尿病合并骨质疏松症的独立影响因素(P<0.05)。结论TNF-α和lncRNA DLX6-AS1参与2型糖尿病合并骨质疏松症发生发展,可能成为该疾病的诊断指标。

莪术醇通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达抑制前列腺癌细胞增殖及转移

目的:探讨莪术醇对前列腺癌细胞增殖及转移的影响及其可能作用机制。方法:不同浓度的莪术醇处理人前列腺癌细胞LNCap,采用脂质体转染法将si-NC、si-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞,将pcDNA、pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞后加入100μg/ml莪术醇处理;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;qRT-PCR检测lncRNA NR2F1-AS1、miR-145-5p表达量;双荧光素酶报告实验验证lncRNA NR2F1-AS1与miR-145-5p的靶向关系。结果:莪术醇可降低细胞存活率,并可降低lncRNA NR2F1-AS1表达量,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),而miR-145-5p表达量升高(P<0.05);lncRNA NR2F1-AS1可靶向调控miR-145-5p的表达(P<0.05);转染si-lncRNA NR2F1-AS1后细胞存活率降低(P<0.05),miR-145-5p表达量升高(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);转染pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1可降低莪术醇对LNCap细胞增殖及转移的作用。结论:莪术醇可通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达,抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达,MTT检测细胞增殖,克隆形成检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果膀胱癌组织中lncRNA ZFPM2-AS1的水平高于癌旁组织;与正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,T24、J82、56373种膀胱癌细胞株中lncRNA ZFPM2-AS1表达水平均高于正常膀胱上皮细胞,且差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默对照组相比,沉默ZFPM2-AS1组T24细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达显著降低(P<0.01),细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin及其下游蛋白c-Myc和Cyclin D1表达显著降低,p-β-catenin蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中高表达,沉默LncRNA ZFPM2-AS1能够抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

lncRNA CERS6-AS1通过调控miR-138-2-3p抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的探讨lncRNA CERS6-AS1对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法qRT-PCR法检测胶质瘤组织、癌旁组织中CERS6-AS1和miR-138-2-3p的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中CERS6-AS1与miR-138-2-3p表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞T98G,将si-NC、si-CERS6-AS1、miR-NC、miR-138-2-3p mimics、si-CERS6-AS1与anti-miR-NC、si-CERS6-AS1与anti-miR-138-2-3p分别转染至T98G细胞;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测CERS6-AS1和miR-138-2-3p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,胶质瘤组织中CERS6-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-138-2-3p的表达量降低(P<0.05);CERS6-AS1与miR-138-2-3p呈负相关(r=-0.8899,P<0.001);si-CERS6-AS1组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均低于si-NC组(P<0.05);CERS6-AS1可靶向调节miR-138-2-3p的表达;miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均少于miR-NC组(P<0.05);si-CERS6-AS1+anti-miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均比si-CERS6-AS1+anti-miR-NC组增多(P<0.05).结论干扰CERS6-AS1表达可通过调控miR-138-2-3p而抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭.

LncRNA HAND2-AS1靶向调控miR-106b-5p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA HAND2-AS1对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用qRT-PCR法检测对照组、骨关节炎组血浆中HAND2-AS1、miR-106b-5p的表达量;采用IL-1β诱导人正常软骨细胞C28/I2建立细胞损伤模型,随机分为con组、IL-1β组、IL-1β+pcDNA组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;ELISA法检测IL-6、TNF-α的水平;双荧光素酶报告实验检测HAND2-AS1与miR-106b-5p的靶向关系。结果与对照组比较,骨关节炎组患者血浆中HAND2-AS1的表达量降低(P<0.05),miR-106b-5p的表达量升高(P<0.05);与con组比较,IL-1β组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组、IL-1β组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组细胞IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P<0.05);HAND2-AS1可靶向调控miR-106b-5p的表达;与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05);与IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论HAND2-AS1过表达可通过靶向调控miR-106b-5p的表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

LncRNA ITGB2-AS1靶向miR-338-3p对肺癌细胞多西他赛耐药性的影响

目的研究lncRNA ITGB2-AS1对肺癌细胞增殖、凋亡及多西他赛耐药性的影响及潜在的分子机制。方法用不同浓度(6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)多西他赛(DTX)处理肺癌A549和多西他赛耐药细胞A549/DTX细胞,CCK8法测定DTX对A549细胞增殖抑制率和IC 50,qRT-PCR检测A549和A549/DTX细胞中lncRNA ITGB2-AS1和miR-338-3p的水平,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证lncRNA ITGB2-AS1和miR-338-3p的靶向关系。结果多西他赛(DTX)(6.25μg/L、12.5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L)对A549/DTX细胞的抑制率显著低于A549细胞,呈浓度依赖性,A549/DTX对DTX的IC 50(256.80±10.22)μg/L显著高于A549细胞(23.57±2.11)μg/L;在A549/DTX中,lncRNA ITGB2-AS1含量显著高于A549细胞(P<0.05),miR-338-3p含量显著低于A549细胞(P<0.05);抑制lncRNA ITGB2-AS1联合12.5μg/L DTX处理可提高A549/DTX细胞凋亡率,增强DTX对A549/DTX细胞的增殖抑制率,上调p21和Bax水平,下调Cyclin D1和Bcl-2蛋白含量;lncRNA ITGB2-AS1靶向负调控miR-338-3p的表达;下调miR-338-3p可逆转抑制lncRNA ITGB2-AS1对A549/DTX细胞增殖、凋亡和多西他赛耐药性的作用。结论LncRNA ITGB2-AS1可靶向miR-338-3p调控A549/DTX细胞的增殖、凋亡及多西他赛耐药性。LncRNA ITGB2-AS1是肺癌潜在的分子靶点。

卵巢癌组织中差异lncRNAs的筛选及其lncRNA ZEB2-AS1的表达分析

目的通过表达谱芯片筛选卵巢癌(OC)有价值的核心长链非编码RNAs(lncRNAs)分子,并进行表达验证和分析。方法收集宁夏医科大学总医院2018年1月至2019年6月OC组织36份,正常卵巢组织22份,以表达谱芯片检测差异表达lncRNAs和mRNAs分子,以real-time PCR验证lncRNAs表达,原位杂交验证关键核心lncRNA的表达,生物信息学分析lncRNA可能的功能。结果相比于正常组织,癌组织中共有4982个差异表达的lncRNA,以锌指E盒结合同源盒蛋白2-AS1(ZEB2-AS1)的高表达最为显著(P<0.05);ZEB2-AS1在肝癌、结肠癌和肾癌等多个癌组织中过表达;表达水平与肿瘤大小、病理分级、病理分型及临床分期均有相关性(P<0.05),且高表达导致总生存期和无病生存期降低(P<0.05)。ZEB2-AS1具有多个microRNA结合位点,与相应邻近基因ZEB2的表达情况一致。结论ZEB2-AS1在卵巢癌中异常表达,提示ZEB2-AS1具有重要的研究价值。

敲低lncRNA HAS2-AS1增加氧化应激促进CAL-27人口腔鳞癌细胞自噬性死亡

目的探究长链非编码RNA透明质酸合成酶2反义转录本1(lncRNA HAS2-AS1)基因对口腔鳞癌细胞自噬性死亡和氧化应激的影响。方法采用RNA干扰技术沉默CAL-27人口腔鳞癌细胞HAS2-AS1基因,应用实时荧光定量PCR检测HAS2-AS1的表达,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3BⅠ(LC3BⅠ)、LC3BⅡ、自噬相关基因7(ATG7)、P62、胱天蛋白酶3(caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、caspase-9、c-caspase-9、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达,免疫荧光细胞化学染色法检测细胞LC3B的表达,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载检测细胞活性氧(ROS)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果敲低HAS2-AS1后,促进CAL-27细胞凋亡,提高细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ、c-caspase-9/caspase-9、c-caspase-3/caspase-3、BAX/Bcl2比值以及ATG7、LC3B、MDA及ROS水平,降低P62和SOD水平。结论敲低HAS2-AS1增加细胞氧化应激促进口腔鳞癌细胞发生自噬性死亡。

lncRNA FOXD2-AS1靶向miR-1299抑制口腔鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨lncRNAFOXD2-AS1靶向miR-1299抑制口腔鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究。方法实验分为si-NC组、si-FOXD2-AS1组、pcDNA-NC组、pcDNA-FOXD2-AS1组、miR-NC组、miR-1299组、anti-miR-NC+si-FOXD2-AS1组、anti-miR-1299+si-FOXD2-AS1组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测lncRNAFOXD2-AS1和miR-1299的表达水平。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告实验检测lncRNAFOXD2-AS1与miR-1299的靶向作用。Western blot法检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果口腔鳞癌细胞CAL27、SCC-090、HSC-3中lncRNAFOXD2-AS1表达水平显著升高,miR-1299表达水平显著降低(P<0.05)。lncRNAFOXD2-AS1低表达或miR-1299高表达均可抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。lncRNAFOXD2-AS1靶向调控miR-1299,低表达miR-1299可以逆转lncRNAFOXD2-AS1低表达对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。lncRNAFOXD2-AS1低表达抑制β-catenin蛋白表达,而低表达miR-1299逆转了lncRNAFOXD2-AS1低表达对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论干扰lncRNAFOXD2-AS1表达可能通过上调miR-1299抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。