LncRNA SNHG15通过miR-483-3p/DDIT4轴调节非小细胞肺癌细胞的顺铂敏感性和上皮间质转化

目的 探究LncRNA SNHG15对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性和上皮间质转化的影响以及miR-483-3p/DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)轴在其中发挥的作用。方法 体外培养NSCLC细胞(A549)、NSCLC耐药细胞(A549/DDP),检测两种细胞对DDP的IC50及LncRNA SNHG15、miR-483-3p、DDIT4 mRNA与蛋白表达,将A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组、si NC组、si SNHG15组、si SNHG15+inhibitor NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si NC组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组;蛋白印迹分析法检测各组细胞E-cad、N-cad、DDIT4蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-483-3p与LncRNA SNHG15、DDIT4的靶向关系。结果 与A549细胞相比,A549/DDP细胞对DDP的IC50、LncRNA SNHG15、DDIT4 mRNA与蛋白升高,miR-483-3p水平降低(P <0.05);A549/DDP组细胞间黏附明显被破坏;si SNHG15组、si SNHG15+miR-483-3p inhibitor+si DDIT4组细胞排列相对紧密,呈现上皮细胞特性;si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组较si SNHG15组细胞排列松散、扩散细胞多;与A549/DDP组相比,si SNHG15组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达升高,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达降低(P <0.05);与si SNHG15组相比,si SNHG15+miR-483-3p inhibitor组A549/DDP细胞增殖抑制率、E-cad表达降低,侵袭细胞数、迁移细胞数、N-cad、DDIT4表达升高(P <0.05)。结论沉默A549/DDP细胞中SNHG15表达可通过调控miR-483-3p/DDIT4,抑制A549/DDP细胞增殖、侵袭、迁移、EMT,并降低A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

LncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过自噬对胃癌细胞活性及血管生成的影响

目的探讨lncRNA SNHG15/miR-123/PAK5轴通过调节自噬对胃癌细胞活性及血管生成的机制研究。方法将胃癌SCG-823细胞分为Control组、si-NC组、si-SNHG15组、miR-NC组、miR-123组、pcDNAPAK5组。RT-PCR检测细胞中SNHG15和miR-123表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;Matrigel体外成管实验检测细胞血管生成能力;蛋白质印迹检测细胞中PAK5、VEGF、LC3、Beclin1、p62蛋白表达;双荧光素酶报告基因检验SNHG15和miR-123、miR-123和PAK5的靶向关系。结果与人胃黏膜细胞系GES-1相比,人胃癌细胞系中ASG、MKN-45、SCG-823细胞中SNHG15表达明显升高,miR-123表达明显降低(P<0.05);且SCG-823细胞中SNHG15表达明显高于ASG、MKN-45细胞,miR-123表达明显低于ASG、MKN-45细胞(P<0.05)。si-SNHG15组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显低于Control组,细胞凋亡率高于Control组(P<0.05);si-SNHG15组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于Control组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于Control组(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-123组细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.05);miR-123组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显低于miR-NC组组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显高于miRNC组(P<0.05)。通过向细胞中分别转染野生型SNHG15(SNHG15-WT)、PAK5(SNHG15-WT)时,miR-123组荧光素酶活性均明显低于miR-NC组(P<0.05)。与si-SNHG15组相比,pcDNA-PAK5组细胞细胞增殖、侵袭及形成小管数量均明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05);pcDNA-PAK5组细胞中VEGF、PAK5、p62蛋白表达明显高于si-SNHG15组,LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达明显低于si-SNHG15组(P<0.05)。结论lncRNA SNHG15可靶向miR-123/PAK5轴抑制胃癌细胞增殖、侵袭和血管生成,促进胃癌细胞凋亡和自噬,进而为调控自噬途径治疗胃癌提供新的思路。

LncRNA SNHG15靶向miR-370-3p调控ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(Small nucleolar RNA host gene 15,SNHG15)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞损伤的影响及其分子机制。方法100 mg/L ox-LDL处理HUVECs细胞24 h,记为ox-LDL组,未经ox-LDL处理的HUVECs细胞记为Con组。将si-NC、si-SNHG15、miR-NC、miR-370-3p分别转染至ox-LDL组,记为ox-LDL+si-NC、ox-LDL+si-SNHG15、ox-LDL+miR-NC和ox-LDL+miR-370-3p组;将si-SNHG15分别与anti-miR-NC、anti-miR-370-3p共转染至ox-LDL组,记为ox-LDL+si-SNHG15+anti-miR-NC和ox-LDL+si-SNHG15+anti-miR-370-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA SNHG15和miR-370-3p的表达量;流式细胞术和蛋白质印迹(Western blot)法分别检测细胞凋亡和蛋白表达;酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG15和miR-370-3p的靶向关系。结果与Con组比较,经ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤中,lncRNA SNHG15和miR-370-3p的表达水平分别显著升高和降低(P<0.05)。抑制lncRNA SNHG15和过表达miR-370-3p均显著抑制细胞凋亡以及炎性细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达(P<0.05)。lncRNA SNHG15靶向调控miR-370-3p表达,下调miR-370-3p逆转了抑制lncRNA SNHG15对ox-LDL引发凋亡以及炎性细胞因子的影响(P<0.05)。结论抑制lncRNA SNHG15通过靶向上调miR-370-3p缓解ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤。

LncRNA SNHG15对子宫内膜癌细胞增殖及去集蛋白-金属蛋白酶17表达的影响

目的:探讨lncRNA SNHG15对子宫内膜癌细胞(EC)增殖及去集蛋白-金属蛋白酶17(ADAM17)表达的影响。方法:选择2018年12月—2019年12月南阳市中心医院手术子宫内膜癌组织及癌旁组织,通过PCR检测lncRNA SNHG15水平;Ishikawa细胞分为EC组(无转染),NC组(转染si-NC),实验组(转染lncRNA SNHG15-siRNA),通过CCK-8、Transwell小室、流式细胞仪检测Ishikawa细胞增殖、侵袭及凋亡,免疫印迹检测ADAM17蛋白相关表达量。结果:LncRNA SNHG15在内膜癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织;EC组及NC组Ishikawa细胞活力OD值差异无统计学意义。24、48、72 h时,实验组与EC组相比,Ishikawa细胞活力OD值明显降低,表明敲低lncRNA SNHG15能够抑制EC活力;EC组、NC组细胞侵袭数显著高于实验组;EC组、NC组细胞凋亡率显著低于实验组;EC组、NC组ADAMl7蛋白表达水平显著高于实验组。结论:敲低lncRNA SNHG15能够抑制EC增殖及侵袭,凋亡加剧,其机制可能与降低ADAM17水平相关。

lncRNA SNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞线粒体途径凋亡的影响

目的:探讨lncRNA SNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其凋亡机制。方法:用实时荧光定量PCR(qPCR)检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、BT-549和MCF-7中SNHG15表达水平。将MDA-MB-231细胞分为对照(Ctrl)组、si-NC组、si-SNHG15组、si-SNHG15+anti-NC组及si-SNHG15+anti-miR-153组,用MTT法及流式细胞术分别检测细胞的增殖活力和凋亡率。用双荧光素酶报告基因实验验证SNHG15和miR-153的靶向关系。用线粒体膜电位荧光探针(JC-1)染色法检测细胞线粒体膜电位,用Western blotting检测线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3、cleaved caspase3(c-caspase3)和Cyt-C的表达水平。结果:SNHG15在3种乳腺癌细胞中的表达水平均明显高于人正常乳腺上皮细胞MCF10A(均P<0.01)。SNHG15与miR-153存在靶向关系。沉默SNHG15后,与对照组比较,si-SNHG15组MDA-MB-231细胞增殖活力明显降低、凋亡率升高、线粒体膜电位降低(均P<0.01);细胞中Bcl-2和caspase3表达降低,Bax、c-caspase3和Cyt-C表达升高(均P<0.01)。si-SNHG15与anti-miR-153共同转染MDA-MB-231细胞后,可减弱si-SNHG15对细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位及Bcl-2、Bax、caspase3、c-caspase3和Cyt-C表达的影响(均P<0.01)。结论:lncRNA SNHG15可靶向调控miR-153诱导MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能与调控细胞线粒体途径凋亡有关。

中国人群LncRNA-SNHG15基因与恶性肿瘤相关性的Meta分析

目的探讨中国人群中LncRNA-SNHG15基因与恶性肿瘤相关性,并评估该基因的临床应用价值。方法检索PubMed、Cochrane Library、Springer Link、中国知网、万方等数据库中LncRNA-SNHG15与肿瘤诊断、预后等相关的文献,根据排除与纳入标准,提取符合要求文献的数据;采用Stata 12.0软件进行统计学分析,设立风险比(HR),分析LncRNA-SNHG15与多种癌症的相关性及相关程度。结果最终有7篇文献纳入统计,涉及乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肝癌和非小细胞肺癌等6种肿瘤类型共540例患者,对提取的数据进行分析显示,肿瘤患者体内LncRNA-SNHG15表达增高且伴有淋巴结转移(HR=1.80,95%CI=1.47~2.22,P<0.01);LncRNA-SNHG15表达增高患者生存率下降,预后不良(HR=1.89,95%CI=1.09~2.69,P<0.01);LncRNA-SNHG15表达持续增高患者,病情进行性恶化(HR=1.76,95%CI=1.46~2.12,P<0.01)。结论LncRNA-SNHG15在乳腺癌、甲状腺癌、胃癌、肝癌和非小细胞肺癌中国人群患者体内表达水平增高,有必要进一步研究明确其与中国人群肿瘤发生、发展的相关性和临床应用价值。

缺氧神经细胞中“SNHG15-miR-24-神经蛋白聚糖”调控轴的作用

目的:研究缺氧神经细胞中“SNHG15-miR-24-神经蛋白聚糖(Neurocan)”调控轴中的作用及相关性。方法:低氧培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分别在干预24 h、48 h、72 h收集细胞,通过CCK8法检测SNHG15对SH-SY5Y细胞增殖的影响,qPCR检测LncRNA SNHG15及miRNA-24表达,WB检测Neurocan的蛋白水平。结果:低氧培养时可促进SNHG15表达上调(t=-22.106,P=0.001),并下调miRNA-24表达(t=10.922,P=0.008),过表达miR-24能够下调Neurocan的表达,能够促进低氧培养下SH-SY5Y的增殖(P<0.05)。结论:“SNHG15-miR-24-神经蛋白聚糖”调控轴可用于急性脑梗塞的早期预警及病情评估,为临床提供参考依据。

长链非编码SNHG15靶向miR-141对甲状腺癌细胞侵袭及凋亡的影响研究

目的探讨长链非编码(lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(SNHG15)靶向调节微小RNA-141(miR-141)对甲状腺癌细胞侵袭、凋亡影响及机制。方法本研究起止时间为2018年10月至2019年5月,参照Lipofectamine 2000说明将SNHG15小干扰RNA(siRNA)、siRNA阴性对照(siRNA control)、miR-141抑制剂(miR-141 inhibitor)或抑制剂阴性对照(inhibitor control)转染至甲状腺癌FRO细胞,细胞随机分组空白对照(si-control)组、转染阴性对照(si-NC)组、转染SNHG15 siRNA(si-SNHG15)组、转染SNHG15 siRNA和inhibitor control(si-SNHG15+anti-control)组和转染SNHG15 siRNA和miR-141 inhibitor(si-SNHG15+anti-miR-141)组,,转染48 h,q RT-PCR检测SNHG15和miR-141 mRNA表达;Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞侵袭能力及凋亡率;双荧光素酶报告系统检测SNHG15和miR-141的靶向关系。Western blotting检测上皮钙黏素(E-cadherin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与si-control组比较,si-SNHG15组中SNHG15 mRNA表达[(1.000)比(0.263±0.032)]明显降低,细胞侵袭能力[(168.6±7.1)个比(78.2±3.3)个]明显降低,凋亡率[(4.31±0.42)%比(33.11±1.69)%]明显升高,E-cadherin[(0.105±0.011)比(0.602±0.058)]和Bax表达[(0.049±0.008)比(0.263±0.028)]明显升高,Bcl-2表达[(0.587±0.063)比(0.131±0.015)]明显降低(P<0.05)。SNHG15与miR-141存在靶向关系。与si-SNHG15+anti-control组比较,si-SNHG15+anti-miR-141组细胞侵袭能力[(79.9±4.2)个比(130.3±5.2)个]明显升高,凋亡率[(34.08±1.63)%比(15.66±0.87)%]降低,E-cadherin[(0.641±0.062)比(0.309±0.032)]和Bax表达[(0.282±0.030)比(0.144±0.015)]明显降低,Bcl-2表达[(0.138±0.017)比(0.478±0.052)]明显升高(P<0.05)。结论lncRNA SNHG15可靶向调节miR-141影响甲状腺癌细胞侵袭和凋亡,机制与调节E-cadherin、Bcl-2和Bax表达有关。