芝麻素通过lncRNA WEE2-AS1/miR-515-5p通路影响高糖诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的:探讨芝麻素对高糖诱导的血管内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能作用机制。方法:高糖诱导HUVEC建立细胞损伤模型,用不同浓度的芝麻素处理细胞;qRT-PCR法检测LncRNA WEE2-AS1与miR-515-5p的表达量;sh-NC、sh-WEE2-AS1转染至HUVEC后加入30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+sh-NC组、HG+sh-WEE2-AS1组);构建WEE2-AS1稳定过表达HUVEC细胞,用30 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+WEE2-AS1-LV组),用40μmol/L芝麻素与30 mmol/L葡萄糖共同处理细胞(HG+SES+WEE2-AS1-LV组);MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的水平;双荧光素酶报告基因实验检测WEE2-AS1与miR-515-5p的靶向关系;Western blotting法检测cleaved-caspase3蛋白表达量。结果:芝麻素可降低高糖诱导的HUVEC中WEE2-AS1的表达量(P<0.05),可降低凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平(P<0.05),并可降低LDH的活性和MDA的水平,还可促进miR-515-5p的表达以及增强细胞活力和SOD的活性(P<0.05),呈剂量依赖性;与HG+sh-NC组比较,HG+sh-WEE2-AS1组miR-515-5p的表达量升高,细胞活力和SOD的活性升高,凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平降低,LDH的活性和MDA的水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);WEE2-AS1可靶向调控miR-515-5p;与HG+SES组比较,HG+SES+WEE2-AS1-LV组miR-515-5p的表达量降低,细胞活力和SOD的活性降低,凋亡率和cleaved-caspase3蛋白水平升高,LDH的活性和MDA的水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:芝麻素可通过调控WEE2-AS1/miR-515-5p而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、氧化应激进而减轻高糖诱导的血管内皮细胞损伤。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

莪术醇通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达抑制前列腺癌细胞增殖及转移

目的:探讨莪术醇对前列腺癌细胞增殖及转移的影响及其可能作用机制。方法:不同浓度的莪术醇处理人前列腺癌细胞LNCap,采用脂质体转染法将si-NC、si-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞,将pcDNA、pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞后加入100μg/ml莪术醇处理;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;qRT-PCR检测lncRNA NR2F1-AS1、miR-145-5p表达量;双荧光素酶报告实验验证lncRNA NR2F1-AS1与miR-145-5p的靶向关系。结果:莪术醇可降低细胞存活率,并可降低lncRNA NR2F1-AS1表达量,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),而miR-145-5p表达量升高(P<0.05);lncRNA NR2F1-AS1可靶向调控miR-145-5p的表达(P<0.05);转染si-lncRNA NR2F1-AS1后细胞存活率降低(P<0.05),miR-145-5p表达量升高(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);转染pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1可降低莪术醇对LNCap细胞增殖及转移的作用。结论:莪术醇可通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达,抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

LncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p调控胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA ZFPM2反义RNA1(ZFPM2-AS1)对miR-515-5p的靶向调控作用以及对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic和3种胆管癌细胞(RBE、HuCCT1、TFK1)中ZFPM2-AS1和miR-515-5p的表达。将ZFPM2-AS小干扰RNA(si-ZFPM2-AS1)、miR-515-5p模拟物(miR-515-5p mimics)分别转染胆管癌细胞RBE,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、Transwell实验检测干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9蛋白的表达变化。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证ZFPM2-AS1对miR-515-5p的调控作用。将si-ZFPM2-AS1与miR-515-5p抑制物(anti-miR-515-5p)共转染RBE细胞,采用上述方法检测RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。Western blot检测干扰ZFPM2-AS1表达对β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达的影响。结果与HIBEpic细胞比较,3种胆管癌细胞ZFPM2-AS1的表达显著升高,miR-515-5p的表达显著降低(P<0.05)。干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p并负调控其表达。干扰ZFPM2-AS1可抑制β-catenin蛋白表达(P<0.05)。抑制miR-515-5p表达可减弱干扰ZFPM2-AS1对RBE细胞增殖、迁移、侵袭以及β-catenin蛋白的影响(P<0.05)。结论干扰ZFPM2-AS1通过靶向miR-515-5p可抑制胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

lncRNA SBF2-AS1通过调控miR-140-5p/VEGFA分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的:探讨1ncRNASBF2-AS1通过调控miR-140-5p/.血管内皮生长因子A(VEGFA)分子轴对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNA SBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS 1+miR-140-5p mimic组5组。采用qPCR检测1ncRNA SBF2-AS1在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让1ncRNASBF2-AS1、miR-140-5p与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表达水平,Transwell实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果:1ncRNA SBF2-AS 1在宫颈癌组织及细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01),1ncRNA SBF2-AS 1靶向结合miR-140-5p,且VEGFA是miR-140-5p的靶基因(P<0.05)。敲降lncRNA SBF2-AS1抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,1ncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa细胞侵袭、迁移及EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:1ncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。

LncRNA SATB2-AS1调控miR-373-5p/BTG3轴对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究长链非编码RNA SATB2-AS1作为内源性竞争RNA调控miR-373-5p/BTG3轴在宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞增殖、凋亡中的作用。方法qRT-PCR技术检测CC患者癌旁组织、癌组织中LncRNA SATB2-AS1、miR-373-5p和BTG3的表达水平。预测并验证LncRNA SATB2/miR-373-5p/BTG3之间的相互作用关系。干预细胞中SATB2-AS1和miR-373-5p的表达并将CC细胞分组,MTT检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果qRT-PCR显示对比癌旁组织和正常宫颈细胞,SATB2-AS1和BTG3在癌组织和CC细胞中表达明显下降,miR-373-5p在癌组织和CC细胞中表达显著上升(均P<0.05)。SATB2-AS1和miR-373-5p的靶向关系被验证。与NC组比较,过表达SATB2-AS1能抑制癌细胞增殖,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。而过表达miR-373-5p则能促进癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,但该作用被SATB2-AS1部分挽救。结论上调LncRNA SATB2-AS1的表达水平可通过调控miR-373-5p/BTG3轴参与CC的进展,抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

去氧鬼臼毒素对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨去氧鬼臼毒素(DPPT)是否通过调控长链非编码RNA ZFPM2-AS1(LncRNA ZFPM2-AS1)/微小RNA-515-5p(miR-515-5p)分子轴而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法体外培养人结肠癌LoVo细胞,随机分为Control组、DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ZFPM2-AS1、miR-515-5p的表达水平;LoVo细胞中转染pcDNA-ZFPM2-AS1,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证ZFPM2-AS1、miR-515-5p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P21的表达量。结果与Control组比较,DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组细胞存活率降低(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数减少(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),P21蛋白水平升高(P<0.05),ZFPM2-AS1表达水平降低(P<0.05),miR-515-5p表达水平升高(P<0.05),且DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组上述指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ZFPM2-AS1可靶向结合miR-515-5p;与DPPT-H+pcDNA组比较,DPPT-H+pcDNA-ZFPM2-AS1组细胞存活率升高(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数增多(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),P21蛋白水平降低(P<0.05)。结论DPPT可能通过下调ZFPM2-AS1的表达及上调miR-515-5p的表达从而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。