血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平与多囊卵巢综合征不孕症患者胰岛素抵抗及促排卵治疗后妊娠结局的关联性研究

目的探讨lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1与多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者胰岛素抵抗及促排卵治疗后妊娠结局的关联性。方法招募2020年2月至2022年1月于唐山市妇幼保健院进行促排卵治疗的125例PCOS不孕症患者(PCOS不孕症组),另选取同期体检健康的女性125名作为对照组。比较两组血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Pearson相关分析探讨血清lncRNA-XIST、lncRNA-MALAT1水平与HOMA-IR的相关性。采用多因素logistic回归分析探讨影响PCOS不孕症患者促排卵治疗后妊娠结局的因素。结果与对照组比较,PCOS不孕症组血清lncRNA-XIST水平及HOMA-IR较高,lncRNA-MALAT1水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。HOMA-IR与血清lncRNA-XIST水平呈正相关(r=0.689,P<0.001),与血清lncRNA-MALAT1水平呈负相关(r=-0.771,P<0.001)。PCOS不孕症患者经促排卵治疗后累积临床妊娠率为43.20%(54/125)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的促黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH)比值[OR(95%CI)=1.121(1.005~1.278)]和血清lncRNA-XIST水平[OR(95%CI)=1.252(1.014~1.449)]是促进PCOS不孕症患者治疗后未妊娠的独立危险因素(P<0.05),较高的血清抗米勒管激素(AMH)水平[OR(95%CI)=0.518(0.348~0.771)]、lncRNA-MALAT1水平[OR(95%CI)=0.394(0.238~0.652)]是促进PCOS不孕症患者治疗后获得妊娠的保护因素(P<0.05)。结论PCOS不孕症患者血清lncRNA-XIST呈高表达,lncRNA-MALAT1呈低表达,且两个指标水平与胰岛素抵抗、促排卵治疗后妊娠结局密切相关。

沉默lncRNA-MALAT1对胶质瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨沉默长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对胶质瘤血管生成拟态的影响。方法 实时荧光定量(qPCR)法检测人胶质瘤细胞U251、U87和正常人星形胶质细胞NHA中lncRNA-MALAT1的表达量。京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)分析lncRNA-MALAT1的信号通路及生物学功能。qPCR法检测沉默效率,将沉默效率最高的片段序列作为实验组(LV-MALAT1组),携带无意义片段的重组慢病毒感染人胶质瘤细胞U251、U87作为阴性对照组(LV-NC组),未干预的人胶质瘤细胞U251、U87作为空白对照组(BLANK组),并检测分析3组中lncRNA-MALAT1的表达量。细胞三维培养法观察分析U251、U87细胞的体外血管生成拟态(Vasculogenic mimicry, VM)形成能力。CCK-8实验和划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力。Transwell实验观察细胞的迁移和侵袭能力。Western-blot检测VM相关蛋白VE-cadherin、MMP2、VEGF以及PI3K/AKT/FOXO1信号转导通路蛋白及其磷酸化蛋白表达量。结果 与NHA细胞比较,lncRNA-MALAT1在胶质瘤细胞U251、U87中高表达(P<0.000 1);KEGG和GO富集分析结果显示,lncRNA-MALAT1参与肿瘤细胞信号通路PI3K/AKT途径、细胞黏附、迁移及细胞外基质生成等细胞分子生物学过程;体外VM形成能力实验结果显示,与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组VM形成数量和长度明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);Western-blot结果显示,与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组VM相关蛋白VE-cadherin、MMP2、VEGF表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8实验结果显示,在细胞培养48 h后,与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组的细胞增长速率明显降低(P<0.000 1);划痕实验结果显示,与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组在24 h、48 h后划痕愈合面积明显减小(P<0.000 1);Transwell实验结果显示,与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组的细胞迁移和侵袭数量显著减少(P<0.001);与U251及U87细胞LV-NC组比较,LV-MALAT1组的PI3K、Phospho-PI3K、AKT、Phospho-AKT表达量显著下降,FOXO1、Phospho-FOXO1表达量显著升高(P<0.05)。结论 沉默lncRNA-MALAT1既能抑制胶质瘤细胞U251、U87血管生成拟态的能力,又可使其增殖、迁移及侵袭能力明显降低,其机制可能与PI3K/AKT/FOXO1通路表达水平变化相关。

血清LncRNA-MALAT1、Ang-2与重症急性胰腺炎患者并发急性胃肠损伤的相关性研究

目的探讨血清长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA-MALAT1)、血管生成素-2(Ang-2)与重症急性胰腺炎(SAP)患者并发急性胃肠损伤(AGI)的相关性。方法选取2021年1月—2023年1月苏州大学附属苏州市第九人民医院重症医学科收治的轻症急性胰腺炎(AP)患者78例为轻症AP组、中度AP患者78例为中度AP组、SAP患者145例为SAP组,根据是否并发AGI将SAP患者分为AGI亚组83例和非AGI亚组62例。采用实时荧光定量PCR检测血清LncRNA-MALAT1水平,酶联免疫吸附法检测血清Ang-2水平;多因素Logistic回归分析SAP患者并发AGI的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平对SAP患者并发AGI的预测价值。结果轻症AP组、中度AP组、SAP组血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平依次升高(F/P=659.197/<0.001、682.682/<0.001);145例SAP患者AGI发生率为57.24%(83/145),AGI亚组SAP患者多器官功能障碍综合征(MODS)比例、急性生理和慢性健康评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分、ICU停留时间及血清D-乳酸、LncRNA-MALAT1、Ang-2水平高于非AGI亚组(χ^(2)/t/P=19.273/<0.001、5.052/<0.001、5.308/<0.001、4.085/<0.001、6.864/<0.001、6.824/<0.001);多因素Logistic回归结果示,MODS、APACHEⅡ评分高、D-乳酸高、LncRNA-MALAT1高、Ang-2高为SAP患者并发AGI的独立危险因素[OR(95%CI)=4.496(1.335~15.138)、1.331(1.142~1.551)、1.070(1.020~1.123)、1.101(1.055~1.148)、1.571(1.239~1.994)];血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平及二者联合预测SAP患者并发AGI的AUC分别为0.790、0.785、0.895,二者联合的AUC大于血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平单独预测(Z/P=3.143/0.002、3.650/<0.001)。结论血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平升高与SAP患者并发AGI独立相关,血清LncRNA-MALAT1联合Ang-2水平预测SAP患者并发AGI的价值较高。

下肢动脉硬化闭塞症患者支架植入术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST与1年内支架内再狭窄相关性研究

目的探讨下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者支架植入术后血清长链非编码RNA(LncRNA)-肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、LncRNA-X失活特异性转录本(XIST)与1年内支架内再狭窄(ISR)的相关性。方法回顾性选取2018年1月—2022年12月在内蒙古医科大学附属肿瘤医院血管外科行支架植入术的LEASO患者147例作为研究对象,根据1年内是否发生ISR分为ISR组41例和无ISR组106例,采用实时荧光定量PCR检测术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平;通过Pearson法分析LEASO患者血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平与管腔直径缩小率的相关性;多因素Logistic回归分析LEASO患者支架植入术后1年内ISR的影响因素;ROC曲线分析血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平对LEASO患者支架植入术后1年内ISR的预测价值。结果随访1年,147例LEASO患者支架植入术后ISR发生率为27.89%(41/147);与无ISR组比较,ISR组血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平升高(t/P=5.949/<0.001、5.927/<0.001);Pearson相关性分析显示,LEASO患者血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平与管腔直径缩小率呈正相关(r/P=0.596/<0.001、0.588/<0.001);多因素Logistic回归显示,糖尿病和C反应蛋白、LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST升高为LEASO患者支架植入术后1年内ISR的独立危险因素[OR(95%CI)=3.185(1.155~8.781)、1.187(1.003~1.404)、1.433(1.199~1.713)、1.575(1.242~1.998)];ROC曲线显示,血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平联合预测LEASO患者支架植入术后1年内ISR的曲线下面积为0.906,大于血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平单独预测的0.799、0.786(Z/P=3.176/0.002、3.513/<0.001)。结论LEASO患者支架植入术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平升高是1年内ISR的独立危险因素,血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平联合对LEASO患者支架植入术后1年内ISR有较高的预测价值。

LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制研究

目的 探讨LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制。方法 购置SD大鼠40只,随机取大鼠10只为对照组,剩余大鼠30只采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成心肌梗死模型,于第14日取材组织并完成HE染色;观察组随机分为模型组、空载组和MALAT1沉默组,利用慢病毒转染干扰LncRNA-MALAT1序列(LV-shMALAT1)及其空载(LV-Control)观察治疗大鼠的干预效果。采用实时荧光PCR法和Western Blot检测LncRNA MALAT1、miR-125b-5p和PDCD4表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)。结果 观察组EF及左室短轴缩短率低于对照组(P<0.05);MALAT1沉默组EF及左室短轴缩短率高于模型组及空载组(P<0.05);HE染色结果显示,模型组和空载组心肌纤维断裂,细胞核紊乱、肥大、间隙增宽、染色加深;MALAT1沉默组心肌纤维断裂有所改善,细胞排列相对整齐;MALAT1沉默组LncRNA MALAT1 mRNA、miR-125b-5p及蛋白表达低于模型组与空载组(P<0.05);PDCD4mRNA及蛋白表达高于模型组与空载组(P<0.05);模型组与空载组炎性因子TNF-α和IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05);MALAT1沉默组炎性因子TNF-α和IL-1β水平低于模型组与空载组(P<0.05)。结论 心力衰竭大鼠中LncRNA-MALAT1表达显著下调,能竞争性结合miR-125b-5p,使其解除对PDCD4的抑制,促进PDCD4表达,从而抑制炎性反应。

LncRNA-MALAT1分子海绵在肝纤维化中的作用研究进展

肝纤维化是遭受外界各种病因刺激肝脏中纤维形成和降解失调的一种慢性损伤性疾病,其形成主要是由于过多的细胞外基质大量积累,引起炎性反应的损伤再修复过程,其所导致的肝硬化,甚至肝癌会严重影响人类的健康。在肝脏中,生产细胞外基质的细胞,包括有:活化的肝星状细胞(HSCs)、门脉成纤维细胞、骨髓来源的肌成纤维细胞前体以及上皮间质转化后的肝细胞等。当静止的HSCs受到致病因素刺激时,可转变成活化状态(成纤维细胞),进而分泌大量细胞外基质,以及促炎因子,金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制剂等,从而触发纤维化的发生。长链非编码RNA(LncRNA)是一类转录长度>200nt,缺乏有效的开放性阅读框且不编码蛋白质的RNA分子[1]。转移性肺腺癌转录因子1(MALAT1),在非小细胞肺癌中最早被发现,它定位于人染色体11q13,长度是8708nt,它在LncRNA被最先发现是因为与肺癌相关[2]。另外,LncRNA在细胞中被用作分子海绵有调控肝纤维化的作用[3]。并且,LncRNA-MALAT1分子海绵在介导肝纤维化信号通路中起着不同的作用。由此之上产生的细胞信号通路途径对肝纤维化的靶向治疗可提出新的思路。通过对LncRNA-MALAT1的生物学特点以及与肝纤维化关系的阐述,分析其在肝纤维化发生发展、诊治中的重要意义,提出LncRNA-MALAT1分子海绵可作为肝纤维化检验和治疗的潜在新靶点。

lncRNA-MALAT1表达与TSCC临床病理特征及预后的关系研究

目的探讨长链非编码核糖核酸-转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA-MALAT1)在舌鳞状细胞癌(TSCC)组织中的表达特征,分析其与临床病理参数以及预后的关系。方法将2018年1月至2020年1月该院收治的80例TSCC患者纳入研究,检测癌组织以及癌旁组织中lncRNA-MALAT1的表达情况,收集患者临床和随访资料。分析lncRNA-MALAT1表达情况与TSCC临床病理特征以及预后的关系。结果TSCC组织中的lncRNA-MALAT1表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。低中度分化、TNMⅢ期、淋巴结转移、浸润深度≥2/3的TSCC患者癌组织中lncRNA-MALAT1表达水平分别高于高度分化、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度<2/3的TSCC患者(P<0.05)。随访41(30~54)月,随访期间死亡48例。lncRNA-MALAT1高表达TSCC患者总生存率和无进展生存率均低于lncRNA-MALAT1低表达TSCC患者(P<0.05)。多因素COX风险比例回归结果显示TNMⅢ期、淋巴结转移、lncRNA-MALAT1高表达是TSCC患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论TSCC组织lncRNA-MALAT1表达显著上调,且与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度和低生存率有关。

二甲双胍在结肠癌中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应

目的探讨二甲双胍(MET)对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。方法采用CCK-8、流式细胞术及Transwell检测MET对结肠癌细胞SW480和SW620增殖、凋亡及侵袭的影响,qRT-PCR检测5种lncRNA在结肠癌细胞中的表达,Western blotting检测MET和/或MALAT1基因敲减在体外对PI3K/AKT和ERK通路活性的影响。结果MET在体外对SW480和SW620细胞具有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05)。MET可促进SW480和SW620细胞凋亡(P<0.05)。在5种lncRNA中,lncRNA-MALAT1在SW480和SW620细胞中的表达水平最高(P<0.01)。siRNA可抑制lncRNA-MALAT1表达,并进一步增强MET介导的抗结肠癌作用(P<0.05)。MET可下调结肠癌细胞中lncRNA-MALAT1的表达(P<0.05),并通过PI3K/AKT和ERK信号通路与lncRNAMALAT1敲减协同抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡(P<0.01)。结论MET在结肠癌细胞中通过抑制lncRNA-MALAT1的表达发挥抗肿瘤效应。

非小细胞肺癌患者血浆中lncRNA-MALAT1和lncRNA-ATB的表达及诊断价值

目的:评价血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,lncRNA-MALAT1)及转化生长因子β激活的长链非编码RNA(lncRNA activated by TGF-β,lncRNA-ATB)诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床价值。方法:收集60例NSCLC患者和60例良性肺病患者的血浆标本,采用荧光定量PCR技术测定lncRNA-MALAT1及lncRNA-ATB的相对表达水平,分析其与NSCLC患者临床病理特征的关系。分别构建血浆lncRNA-MALAT1及lncRNA-ATB诊断NSCLC的ROC曲线,评估其诊断效果,并与血清癌胚抗原及细胞角蛋白十九片段(Cyfra21-1)进行比较。结果:与良性肺病患者相比,NSCLC患者血浆lncRNA-MALAT1表达明显下调,lncRNA-ATB表达明显上调(P<0.05)。血浆lncRNA-MALAT1及lncRNA-ATB表达水平与NSCLC患者性别、年龄、吸烟指数、组织病理类型及TNM分期等无显著相关(P均>0.05)。血浆lncRNA-MALAT1和lncRNA-ATB诊断NSCLC的ROC曲线下面积均明显高于血清癌胚抗原及Cyfra21-1;二者诊断NSCLC的准确性高于血清癌胚抗原及Cyfra21-1,二者联合检测准确性较单独检测高。结论:血浆lncRNA-MALAT1及lncRNA-ATB可作为诊断NSCLC的生物标志物。

黄芩苷通过调控LncRNA-MALAT1/miR-361-3p/TGF-β轴治疗低氧性肺动脉高压

目的:探讨黄芩苷(Baicalin)对低氧性肺动脉高压的治疗作用及其潜在机制。方法:选取18只C57BL/6雄性小鼠随机分为常氧组、低氧组及低氧+黄芩苷组,每组各6只。21 d后采用导管法检测小鼠右心室收缩压(RVSP)及平均颈动脉压力(mCAP),行苏木素-伊红(HE)染色观察肺动脉血管重塑程度,采用免疫组化染色检测TGF-β通路蛋白表达。常氧/低氧条件下培养小鼠肺动脉平滑肌细胞(MPASMCs)48 h,采用CCK-8法测MPASMCs细胞活力,Transwell和Wound healing检测MPASMCs细胞迁移能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测TGF-β通路蛋白表达差异,生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测验证LncRNA-MALAT1/miR-361-3p/TGF-β轴的调控关系。结果:与低氧组比,黄芩苷干预组MPASMCs的增殖和迁移能力显著下降(P<0.05),小鼠的RVSP明显下降(P<0.05),肺血管重塑改善。与常氧组比,低氧组中TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β、p-smad2、p-smad3表达显著升高,而黄芩苷干预后TGF-β信号通路显著抑制(P<0.05)。结论:黄芩苷可能通过调控LncRNA-MALAT1/miR-361-3p轴调控TGF-β表达,改善低氧MPASMCs异常增殖、低氧性肺动脉高压小鼠肺血管结构重塑,进而降低肺动脉压力。

血清LncRNA-MALAT1水平与心肌梗死患者疾病严重程度和预后的关系

目的 分析急性心肌梗死(AMI)患者血清肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA-MALAT1)水平与疾病严重程度和预后的关系。方法 回顾性选取2019年3月至2021年3月在温州市中西医结合医院接受经皮冠状动脉介入(PCI)术治疗的120例心肌梗死患者为观察对象均随访6个月。根据术后6个月患者的冠脉病变情况分为Gensini评分≥60分组(n=52)和Gensini评分<60分组(n=68)。收集患者临床资料,采用实时荧光定量PCR法测定血清LncRNA-MALAT1水平,记录术后主要心血管不良事件(MACE)的发生情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1水平对AMI患者MACE的预测价值。结果 两组患者高密度脂蛋白、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肌酸激酶(CK-MB)差异均有统计学意义(均P<0.05)。120例AMI患者经6个月随访后有36例患者出现MACE,MACE组患者血清高密度脂蛋白和LncRNAMALAT1水平高于非MACE组(均P <0.05)。ROC曲线分析显示,高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1及联合检测预测AMI患者预后AUC分别为0.641,0.692,0.726。结论 血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1水平参与AMI病情发展过程,且两者联合检测可预测AMI患者的短期预后。

下调lncRNA-MALAT1表达对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的 探讨小图lncRNA-MALAT1表达对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的影响。方法 取SPF级7 d龄SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、lncRNA对照组、silncMALAT1组,每组10只。Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型,造模后2 h,侧脑室分别注射生理盐水、生理盐水、空载体重组腺病毒液、silncMALAT1各5μl。造模后7 d,Morris水迷宫试验评估空间学习和记忆能力,TUNEL染色检测海马组织神经元凋亡,PCR和免疫印迹法检测海马组织BDNF/TrkB信号通路mRNA和蛋白表达变化。结果 模型组造模失败2只,lncRNA组失败2只,silncMALAT1组失败1只,造模成功率为83.33%。下调lncRNAMALAT1表达,明显增加新生大鼠学习和记忆能力(P<0.05),明显减少海马组织神经元凋亡率(P<0.05),明显下调BDNF/TrkB mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 下调lncRNA-MALAT1表达可减轻新生大鼠HIBD,其机制可能与抑制BDNF/TrkB信号通路、减轻海马组织神经元凋亡有关。

急性髓系白血病脓毒症患者外周血lncRNA-MALAT1表达情况及其临床意义

目的:分析急性髓系白血病(AML)脓毒症患者外周血lncRNA-MALAT1的表达并探讨其临床意义。方法:选择2018年3月至2019年3月进入龙泉驿区第一人民医院肿瘤血液科治疗的确诊为AML的患者95例,其中包括43例脓毒症感染者和52例未感染者,取外周血作为研究样本,以50例健康人血液样本作为对照。采用RT-qPCR技术对健康组、未感染组、脓毒症组样本中的lncRNA-MALAT1进行定量,分析lncRNA-MALAT1表达水平与AML脓毒症患者临床特征和预后的关系。结果:与健康组和未感染组相比,脓毒症组患者外周血中lncRNA-MALAT1的表达显著上调(P<0.05),健康组和未感染组之间lncRNA-MALAT1的表达水平比较无显著差异(P>0.05);在脓毒症组患者中,lncRNA-MALAT1的表达与患者NCCN风险分级、白细胞数、血红蛋白等临床特征相关;lncRNA-MALAT1高表达组的总生存率显著低于低表达组(χ^(2)=23.157,P=0.002);COX回归分析表明,lncRNA-MALAT1可以作为AML脓毒症患者独立的预后因素。结论:lncRNA-MALAT1在AML脓毒症患者中的表达上调,与患者临床特征和生存率密切相关,是AML脓毒症独立的预后因素,有望成为AML脓毒症患者新的诊断标志物和治疗靶点。

LncRNA-MALAT1通过miR-142-3p/TEAD1分子轴调控结直肠癌细胞增殖与凋亡

目的探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1(LncRNA-MALAT1)对结直肠癌细胞增殖与凋亡的影响及相关作用机制。方法通过Real-time PCR与Western blot实验检测结直肠癌细胞株与人正常结肠上皮细胞中LncRNA-MALAT1、miR-142-3p基因以及TEA结构域转录因子1(TEAD1)蛋白的表达;使用si-MALAT1转染HCT116细胞,在此基础上共转染miR-142-3p inhibitor,利用Real-time PCR与Western blot检测细胞中LncRNAMALAT1与miR-142-3p基因以及TEAD1、Bax、Bcl-2与Cyclin D1蛋白的表达,通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,通过流式细胞术检测细胞的凋亡水平,通过双荧光素酶实验检测LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1的结合。结果与人正常结肠上皮细胞相比,结直肠癌细胞株中LncRNA-MALAT1基因与TEAD1蛋白呈高表达,miR-142-3p基因呈低表达(P<0.05);沉默LncRNA-MALAT1能够促进miR-142-3p基因与Bax蛋白表达,抑制LncRNA-MALAT1基因以及Bcl-2、Cyclin D1与TEAD1蛋白表达,抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡;在此基础上沉默miR-142-3p能够对上述调控作用实现部分逆转;双荧光素酶实验结果显示,LncRNA-MALAT1与miR-142-3p以及miR-142-3p与TEAD1能够结合。结论 LncRNA-MALAT1能够结合miR-142-3p,促进miR-142-3p靶基因TEAD1表达,进而促进结直肠癌细胞增殖,抑制其细胞凋亡,促进结直肠癌的病理进程。

lncRNA-MALAT1通过靶向下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(lncRNA-MALAT1)是否可通过靶向下调微小RNA-570-3p(miR-570-3p)促进胃癌细胞增殖。方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901分为3组:空白对照组、si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组,其中空白对照组为单纯的SGC7901细胞株,si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组分别转染lncRNA-MALAT1 siRNA及其阴性对照。MTS法检测各组细胞的增殖情况。RT-qPCR检测单纯的SGC7901细胞株培养不同时点的miR-570-3p及不同组别lncRNA-MALAT1和miR-570-3p的表达情况。通过生物信息学软件RegRNA预测获取lncRNA-MALAT1与miR-570-3p潜在的互补结合位点。将MALAT1及其突变体克隆到萤光素酶载体psiCHECK-2中,构建MALAT1野生型和突变型质粒,并采用酶切和测序方法鉴定psi CHECK-2-MALAT1载体是否构建成功。将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照、miR-570-3p抑制剂阴性对照在293T细胞中共转染,收集细胞后通过双萤光素酶报告系统检测不同组别的萤光素酶活性,从而对lncRNA-MALAT1与miR-570-3p的靶向调节关系进行验证。结果:与空白对照组和si-MALAT1NC组相比较,si-MALAT1组在不同时点(24、48和72 h)的A490值显著降低(P <0. 01)。在单纯的SGC7901细胞株中,随着时间的推移,miR-570-3p的表达量逐渐下降(P <0. 05)。si-MALAT1组lncRNA-MALAT1的表达水平显著降低,而miR-570-3p表达显著升高(P <0. 01)。双萤光素酶报告基因检测显示,与miR-570-3p模拟物阴性对照组相比,miR-570-3p模拟物组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低(P <0. 01),而miR-570-3p抑制剂组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性较miR-570-3p模拟物组明显增高(P <0. 01); miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照及miR-570-3p抑制剂阴性对照对MALAT1突变型的表达均无明显影响。结论:lncRNA MALAT1能够通过靶向结合并下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖。

LncRNA-MALAT1在缺氧诱导胃癌侵袭转移中的作用

目的:探讨LncRNA-MALAT1对缺氧诱导胃癌侵袭转移的影响。方法:RT-PCR检测胃癌组织标本和胃癌细胞株中MALAT1的表达;通过基因重组方法构建MALAT1的siRNA载体,并感染人SGC7901及MKN45胃癌细胞,RT-PCR验证siRNA干扰有效;Transwell实验研究其对胃癌细胞SGC7901及MKN45侵袭转移能力的影响。结果:MALAT1在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达高于癌旁组织和胃正常上皮细胞;缺氧能够促进SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力,而下调MALAT1能够明显抑制缺氧条件下SGC7901及MKN45细胞的侵袭转移能力。结论:MALAT1在促进胃癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用,为胃癌靶向治疗提供理论依据。

lncRNA-MALAT1基于p-PI3K/p-AKT通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探究血浆长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,lncRNA-MALAT1)基于磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)/磷酸化-苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated threonine-protein kinase,p-AKT)通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法将培养的U87脑胶质瘤细胞分为脑胶质瘤组、空白组和转染组。采用PCR法检测lncRNA-MALAT1表达量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT检测细胞增殖率,Transwell检测细胞侵袭,Western blot法检测p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白水平。结果与脑胶质瘤组相比,空白组、转染组lncRNA-MALAT1表达量较低;与空白组相比,转染组lncRNA-MALAT1表达量较低。与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞凋亡率较高;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞增殖率较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组细胞侵袭个数较少;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组p-PI3K/p-AKT通路相关蛋白表达量较低;与空白组、脑胶质瘤组相比,转染组MMP2、MMP9蛋白表达量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA-MALAT1可有效降低p-PI3K/p-AKT信号通路相关蛋白的表达,继而有效抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,促进胶质瘤细胞的凋亡,降低MMP2、MMP9蛋白的表达量。

沙格列汀对高糖诱导内皮细胞中LncRNA-MALAT1表达的影响

目的沙格列汀通过选择性抑制高效二肽基肽酶4来调节血糖,但机制尚不清楚。文中探讨沙格列汀对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)长链非编码RNAs(LncRNA)分子MALAT1及其下游分子转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法首先,通过不同浓度梯度葡萄糖(5.5、10、20、30 mmol/L D-葡萄糖)和不同梯度浓度沙格列汀(0、0.01、0.1、1、10μmol/L)刺激HUVECs细胞,用qRT-PCR法检测LncRNA-MALAT1及TGF-β1的表达,筛选出最适高糖浓度和最佳药物浓度;然后将实验细胞分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、沙格列汀组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+1μmol/L沙格列汀)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)和高糖联合沙格列汀组(30mmol/L D-葡萄糖+1μmol/L沙格列汀),用qRT-PCR法检测MALAT1和TGF-β1的表达,然后用Western blot法检测TGF-β1的蛋白表达水平以及用ELISA法检测细胞上清液TGF-β1的含量。结果与对照组LncRNA-MALAT1(1.00±0.00)和TGF-β1(1.00±0.00)比较,高糖组(8.65±0.70,1.36±0.07)的表达显著增加(P<0.01);与高糖组相比,高糖联合沙格列汀组LncRNA-MALAT1(2.17±0.24)和TGF-β1(1.15±0.02)的表达明显抑制(P<0.05)。结论高糖可诱导内皮细胞lncRNAMALAT1分子及其下游分子TGF-β1的过度表达,从而引起内皮细胞损伤,而沙格列汀可明显抑制这种作用。

二甲双胍通过lncRNA-MALAT1对人血管平滑肌细胞活力、迁移及凋亡的影响

目的:探讨二甲双胍通过长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(lncRNA-MALAT1)对人血管平滑肌细胞(VSMC)活力、迁移及凋亡的影响。方法:RT-qPCR检测38例无冠心病的对照人群与35例冠心病患者血液中lncRNA-MALAT1的表达。用二甲双胍给药后检测lncRNA-MALAT1的表达;用二甲双胍给药或MALAT1小干扰RNA(si-MALAT1)转染VSMC后,用CCK-8法检测细胞活力,细胞划痕法测定细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞凋亡水平, RT-qPCR检测lncRNA-MALAT1表达及抑癌因子p53 mRNA表达水平, Western blot检测p53蛋白表达水平。结果:与对照人群相比,冠心病患者血液中lncRNA-MALAT1表达显著升高(P<0.05)。二甲双胍给药后,lncRNA-MALAT1表达呈时间依赖性降低;与阴性对照组比较,二甲双胍给药组VSMC活力和迁移能力均显著下降,而凋亡率显著升高,p53 mRNA及蛋白表达水平亦显著升高(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组VSMC活力和迁移能力下降(P<0.05),凋亡率升高不显著,p53 mRNA水平及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:二甲双胍可能通过lncRNA-MALAT1抑制VSMC的活力和迁移能力,促进细胞凋亡,其机制可能部分与激活p53表达有关。

lncRNA-MALAT1/miRNA-145在舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转录子1(MALAT1)在舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)中的作用。方法 SPF级大鼠36只,体重180~200 g,随机分为三组:假手术组(Sham组),缺血-再灌注损伤组(IR组),缺血-再灌注损伤+舒芬太尼组(SUF组),每组12只。IR组和SUF组建立大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型,SUF组于再灌注前10 min尾静脉注射舒芬太尼1μg/kg,Sham组和IR组注射等体积生理盐水。再灌注后2 h检测大鼠血清中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,同时检测大鼠心肌梗死面积;检测心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3和Caspase-3含量;检测大鼠心肌组织中lncRNA-MALAT1和miRNA-145的相对表达量。结果与Sham组比较,IR组和SUF组CK-MB和cTnT浓度明显升高,LDH活性明显增强,心肌梗死面积明显增大,心肌组织中Bax/Bcl-2比值明显降低,Cleaved-caspase-3蛋白含量明显升高,lncRNA-MALAT1相对表达量明显升高,而miRNA-145相对表达量明显降低(P<0.05)。与IR组比较,SUF组CK-MB和cTnT浓度明显降低,LDH活性明显减弱,心肌梗死面积明显减小,Bax/Bcl-2比值明显升高,Cleaved-caspase-3蛋白含量明显降低,lncRNA-MALAT1相对表达量明显降低,miRNA-145相对表达量明显增加(P<0.05)。结论舒芬太尼预处理能减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤程度,其机制可能与抑制lncRNA-MALAT1、升高miRNA-145表达有关。