炎调方调控LncRNA-Miat对急性脓毒症患者免疫功能及肠道微生态的保护作用

目的 探讨炎调方调控长链非编码RNA-心肌梗死相关转录本(LncRNA-Miat)对急性脓毒症患者肠道微生态、免疫功能的保护作用。方法 选取2020年1月至2022年10月收治的急性脓毒症患者108例,根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组54例。对照组采取常规对症治疗,观察组采用常规对症治疗+炎调方,2组均连续治疗10 d。观察组6例因意识改变或昏迷无法口服中药退出研究,为保持例数一致,对照组剔除6例,观察组和对照组各有48例进入研究。统计2组中医疗效、中医证候积分、LncRNA-Miat、磷脂酶张力蛋白同源物(PTEN)表达水平、免疫功能[核因子κB(NF-κB)mRNA、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、白介素-1β(IL-1β)、IL-18]、肠道微生态(乳酸杆菌、肠杆菌、葡萄球菌)、28 d病死率。结果 观察组总有效率为83.33%(40/48)高于对照组62.50%(30/48),观察组发热、口渴饮冷、汗出、气喘、乏力评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组PTEN、LncRNA-Miat、NF-κB、NLRP3 mRNA、IL-1β、IL-18、葡萄球菌、肠杆菌低于对照组,乳酸杆菌高于对照组(P<0.05);与对照组相比,观察组APACHEⅡ、SOFA较低(P<0.05);2组28 d病死率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 联合炎调方治疗急性脓毒症患者,可有效调控LncRNA-Miat表达,改善患者肠道微生物平衡,提高机体免疫,缓解临床病症,促进病情好转。

LncRNA-MIAT通过抑制miR-519d-3p激活EZH2促进甲状腺癌的恶性行为

目的:探讨长链非编码RNA MIAT(LncRNA-MIAT)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调控作用与分子机制。方法:用癌症基因组图谱(TCGA)和甲状腺癌(THCA)mRNA-seq数据分析LncRNA-MIAT和组蛋白甲基化转移酶2(EZH2)在甲状腺癌中的表达。用人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1和人甲状腺癌细胞系FTC-133作为靶细胞。qPCR法检测LncRNA-MIAT、miR-519d-3p、EZH2 mRNA的表达水平差异。RNA荧光原位杂交(FISH)检测LncRNA-MIAT在FTC-133细胞中的定位,Western blot检测EZH2蛋白的表达。荧光素酶报告基因检测LncRNA-MIAT和miR-519d-3p以及miR-519d-3p与EZH2的直接作用。将FTC-133细胞分为6组[空白对照组(control组)、空载体组(Empty vector组)、过表达LncRNA-MIAT组(LncRNA-MIAT组)、miR-519d-3p的抑制剂组(miR-519d-3p inhibitor组)、EZH2的抑制剂EPZ-6438处理组(EPZ-6438组)、miR-519d-3p抑制剂联合过表达LncRNA-MIAT组(LncRNA-MIAT+miR-519d-3p inhibitor组)]。用Edu试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖。用流式细胞术检测细胞凋亡。用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测细胞的行为。结果:LncRNA-MIAT和EZH2在甲状腺癌组织和细胞中的表达均上调,二者具有正相关性(r=0.466,P<0.05),miR-519d-3p在FTC-133细胞中表达下调(P<0.05)。经过双荧光素酶报告基因实验检测发现miR-519d-3p的靶基因是EZH2,且LncRNA-MIAT靶向抑制miR-519d-3p激活EZH2。与Empty vector组相比,LncRNA-MIAT组和miR-519d-3p inhibitor组的Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数均显著上调(P<0.05),细胞凋亡率均减少(P<0.05)。EZH2的抑制剂EPZ-6438则减少Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。分别与LncRNA-MIAT组或miR-519d-3p inhibitor组比,LncRNA-MIAT+miR-519d-3p inhibitor组的Edu阳性细胞百分比、细胞克隆数、细胞侵袭和迁移数均显著上调(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:甲状腺癌细胞中LncRNA-MIAT通过抑制miR-519d-3p激活EZH2促进甲状腺癌的恶性行为。

小檗碱介导LncRNA-MIAT调控自噬抑制心肌细胞肥大的机制研究

目的探讨LncRNA-MIAT(LncRNA-myocardial infarctionrction–associated transcript)与自噬的关系,进而探讨小檗碱抑制心肌细胞肥大的机制。方法使用不同浓度的血管紧张素Ⅱ干预H9C2心肌细胞,探索诱导心肌细胞肥大模型的最佳浓度;用浓度梯度的小檗碱处理心肌细胞肥大模型,镜下观察用免疫荧光染色的心肌细胞细胞核与表面积变化,用qPCR技术检测LncRNA-MIAT的表达,用siRNA技术对LncRNA-MIAT进行干扰,用Western blot检测自噬通路相关蛋白p-AMPK/AMPK、LC3II/GAPDH、P62/GAPDH表达。结果以10-6 mol·L^-1浓度的血管紧张素Ⅱ诱导细胞肥大能力最强,小檗碱抑制心肌细胞肥大的能力具有浓度依赖性的特点,以50μmol·L^-1浓度效果最佳;LncRNA-MIAT在心肌肥大细胞中显著上调(P<0.01),小檗碱处理后LncRNA-MIAT表达显著下调(P<0.01);干扰LncRNA-MIAT后,与对照组相比,p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/GAPDH比值增大(均P<0.01),P62/GAPDH比值缩小(P<0.01),且心肌细胞细胞核及表面积进一步缩小。结论小檗碱通过下调LncRNA-MIAT的表达,使AMPK、LC3Ⅱ的活性上调、P62活性下调促进自噬,进而抑制心肌细胞肥大。

lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用及其机制

目的:探讨lncRNA-MIAT对肿瘤相关巨噬细胞M2型极化的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:体外培养THP-1细胞,将过表达(LV-MIAT)与下调lncRNA-MIAT表达(LVshMIAT)的慢病毒颗粒及空载体(LV-Vector)转染入THP-1细胞中,将THP-1细胞诱导活化为巨噬细胞,并采用Transwell共培养体系将活化后的巨噬细胞与骨肉瘤(OS)MG63细胞共培养,将上述共培养体系分为MG63+LV-Vector组(阳性对照组)、MG63+LV-shMIAT组、MG63+LVMIAT组和IL-4+LV-Vector组。检测各组THP-1细胞中lncRNA-MIAT表达水平,流式细胞术检测各组细胞中M2型巨噬细胞百分率,ELISA法检测各组THP-1细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素4(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平,检测各组HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、Notch1和δ样蛋白4(DLL4)表达水平。取各培养体系中的巨噬细胞与人脐静脉内皮血管细胞(HUVEC)共培养,EDU染色法检测各组HUVEC增殖活力,成管实验检测HUVEC血管形成数。Western blotting法检测各组THP1中Janus激酶1(JAK1)、信号传导及转录激活蛋白6(STAT6)和磷酸化STAT6(p-STAT6)蛋白表达水平,并计算p-STAT6/STAT6比值。构建OS荷瘤小鼠模型,并将36只荷瘤小鼠分为LV-Vector组、LV-shMIAT组和LV-MIAT组(n=12)。检测干扰lncRNA-MIAT表达后各组小鼠肿瘤体积和质量及肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率。结果:采用慢病毒感染成功建立稳定过表达或下调lncRNA-MIAT的THP-1细胞。与LVVector组比较,LV-shMIAT组细胞中lncRNA-MIAT表达水平明显降低(P<0.05),LV-MIAT组细胞中lncRNA-MIAT表达水平明显升高(P<0.05)。与MG63+LV-Vector组比较,MG63+LVshMIAT组THP-1细胞中VEGF、IL-10和TGF-β1水平明显降低(P<0.05),HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平明显降低(P<0.05),MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组THP-1细胞中VEGF、IL-10和TGF-β1水平明显升高(P<0.05或P<0.01),HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平明显升高(P<0.05),M2型巨噬细胞百分率、THP-1细胞中p-STAT6/STAT6比值和JAK1蛋白表达水平升高(P<0.05);与MG63+sh-MIAT组比较,MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组THP-1细胞中VEGF水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β1水平明显升高(P<0.05),HUVEC中VEGFR2、Notch1和DLL4蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与MG63+LV-Vector组比较,MG63+LV-shMIAT组HUVEC的增殖活力与血管形成数均明显降低(P<0.05),MG63+LV-MIAT组和IL-4+LV-Vector组HUVEC的增殖活力与血管形成数均明显升高(P<0.05)。裸鼠体内成瘤实验,与LV-Vector组比较,LV-MIAT组小鼠移植瘤体积和质量明显升高(P<0.05),肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率明显升高(P<0.05);LVshMIAT组小鼠移植瘤体积和质量、肿瘤组织中CD163和CD31阳性表达率均明显降低(P<0.05)。与LV-shMIAT组比较,LV-MIAT组小鼠移植瘤体积和质量明显升高(P<0.05),肿瘤组织中CD163与CD31阳性表达率明显升高(P<0.05)。结论:lncRNA MIAT可能通过促进巨噬细胞的M2极化和上调肿瘤组织血管生成,参与调控OS进展。

LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中的表达及与预后的相关性

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(LncRNA MIAT)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)蛋白在甲状腺癌组织内的表达水平及与预后的关系。方法选取63例甲状腺癌患者,收集其癌组织、癌旁正常组织,测定LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达水平,并进行对比分析;同时分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者临床病理特征的关系;另随访3年,分析LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者预后的关系。结果癌组织LncRNA MIAT相对表达量与LASP1蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,有统计学差异(P<0.05)。LncRNA MIAT、LASP1蛋白表达与甲状腺癌患者的淋巴结转移、临床分期有关,有统计学差异(P<0.05);LncRNA MIAT高表达、LASP1蛋白阳性表达患者的3年生存率低于LncRNA MIAT低表达、LASP1蛋白阴性表达患者,有统计学差异(P<0.05)。结论LncRNA MIAT、LASP1蛋白在甲状腺癌组织中表现为高水平,其表达水平与患者临床分期、淋巴结转移有关,且表达水平越高,患者预后越差。

LncRNA MIAT靶向miR-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIAT靶向微小RNA(miR)-206促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。方法 将食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞分为ctrl组(正常培养的ESCC细胞)、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组和si-MIAT+miR-206 inhibitor组。实时qRT-PCR检测各组细胞MIAT、miR-206表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;蛋白质印迹技术检测PCNA、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证MIAT和miR-206的关系。结果 与ctrl组、si-NC组比较,si-MIAT组ESCC细胞中miR-206表达、细胞凋亡率升高,MIAT、OD_(450)值(24、48、72 h)、划痕愈合率、PCNA和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);干扰LncRNA MIAT表达能降低ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,提高细胞凋亡能力,MIAT靶向调控miR-206表达。结论 干扰LncRNA MIAT表达能够阻滞ESCC细胞增殖、迁移、侵袭,并促进ESCC细胞凋亡。

基于IncRNA-MIAT/miR-324-3p/Notch通路探究大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制

目的 探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录(lncRNA-MIAT)在大鼠脑缺血再灌注损伤(I/R)模型的表达及其对低氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡及氧化应激的影响。方法 SD大鼠10只,随机分为I/R模型组及假手术组,采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立脑损伤I/R模型。建立大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的细胞系(PC12细胞)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,检测相关指标。采用RT-PCR法检测LncRNA MIAT和miR-324-3p在SD大鼠脑组织和PC12细胞中的表达量。采用黄嘌呤氧化酶法(WST-8V)、硫代巴比妥酸法(TBA test)及5,5’—二硫代双(2—硝基苯甲酸)法(DTNB)分别检测PC12细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量;酶联免疫吸附法(ELISE)检测PC12细胞的肿瘤坏死因子—α (TNF-α)、白介素—6 (IL-6)及白介素—1β (IL-1β)等炎性因子的含量;流式细胞法检测PC12细胞的凋亡率,蛋白印迹法(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白Bax(Bcl-2家族促凋亡蛋白)、Bcl-xl(Bcl-2家族抗凋亡蛋白)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤—2),Notch信号通路相关蛋白Notch1 (Notch家族1型跨膜糖蛋白)、Hes1 (多毛增强子1)、Hes5表达量。结果 I/R组大鼠、OGD/R组PC12细胞中LncRNA MIAT水平分别显著低于假手术组、对照组(P<0.05),miR-324-3p水平呈相反变化趋势。过表达LncRNA MIAT显著上调OGD/R组LncRNA MIAT、Bcl-xl、Bcl-2表达量,抑制Bax表达量(P<0.05)。过表达LncRNA MIAT能显著降低Vetor组MDA含量,提高SOD和GSH含量(P<0.05)。ELISA结果显示,过表达LncRNA MIAT组TNF-α、IL-6及IL-1 β含量显著低于Vector组,同时显著高于过表达LncRNA MIAT+过表达miR-324-3p组(P<0.05)。Western-blot检测结果显示,过表达LncRNA MIAT组Notch1、Hes1、Hes5表达量显著低于模型组和过表达LncRNA MIAT+过表达miR-324-3p组(P<0.05)。结论 LncRNA-MIAT的过度表达可抑制OGD/R模型中PC12细胞Notch1、Hes1和Hes5(Notch通路相关蛋白)的表达,降低PC12细胞的氧化损伤和凋亡率,其机制可能与LncRNA-MIAT调节miR-324-3p的表达有关。

lncRNA Miat通过miR-182/Nogo-A调控氧化应激所致心肌细胞凋亡的机制

目的 探究lncRNA Miat/miR-182/Nogo-A轴在心肌细胞因氧化应激发生凋亡或损伤过程中的调控机制。方法 运用H_(2)O_(2)处理模拟心肌细胞氧化应激损伤,CCK-8实验检测细胞活力;si-Miat与miR-182共转染、miR-182 mimic与上调Nogo-A共转染;qRT-PCR检测Miat、miR-182、Nogo-A mRNA的表达;Western blot检测Bax、Caspase-3、BCL-2、Nogo-A的表达;Hoechst凋亡染色检测凋亡率;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182可能存在靶向结合关系,生物信息网站Targescan预测miR-182与Nogo-A之间的结合关系。结果 lncRNA Miat在H_(2)O_(2)处理后表达升高;抑制lncRNA Miat可减轻H_(2)O_(2)处理导致的细胞凋亡;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;下调lncRNA Miat可以减轻下调miR-182在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的抑制作用;生物预测软件RNAhybrid预测Miat与miR-182存在靶向结合位点;上调miR-182可使Nogo-A表达下降进而抑制氧化应激导致的心肌细胞凋亡;上调miR-182可以减轻上调Nogo-A在氧化应激过程中对心肌细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA Miat可以通过miR-182/Nogo-A轴促进心肌细胞氧化应激所致的凋亡。Miat可作为氧化应激过程中心肌细胞凋亡或损伤的标志物。

长链非编码RNA MIAT在子宫颈癌中的表达水平及临床意义研究

目的观察长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(long non coding RNA myocardial infarction associated transcript,lnc RNA MIAT)在子宫颈癌(cervical cancer,CC)中的表达情况,旨在为CC患者的早期诊断及预后评估提供可靠的实验指标。方法收集2018年1月—2020年12月于枣庄市立医院住院的子宫颈癌患者30例,并对患者进行分期,通过qRT-PCR方法,检测血清、子宫颈癌组织及癌旁正常组织中lnc RNA MIAT的表达水平,并每隔6个月监测患者血清中lnc RNA MIAT的表达水平,分析血清学lnc RNA MIAT的表达水平与子宫颈癌患者临床病理学指标及子宫颈癌生存率的相关性。结果(1)Ⅲ~Ⅳ期子宫颈癌患者血清中及癌组织中lncRNA MIAT的表达水平高于Ⅰ~Ⅱ期,差异有统计学意义(t=18.567,21.333,P<0.05)。(2)子宫颈癌患者病理特征如肿瘤直径>4cm,有淋巴结转移、Ⅲ及Ⅳ期、有复发/死亡者中,lncRNAMIAT表达水平显著高于其他项,差异有统计学意义(P<0.05),且lncRNA MIAT表达水平与子宫颈癌患者临床分期指标呈正相关,(r=0.665)。(3)lncRNAMIAT高表达组患者术后2年生存率低于低表达组(χ^(2)=3.871,P=0.037),每隔6个月表达水平与术后复发率呈正相关(r=0.834),与预后呈负相关(r=-0.789)。结论子宫颈癌中lncRNA MIAT的表达水平增高,且与子宫颈癌患者的临床分期存在相关性。术后患者血清中lncRNA MIAT的表达水平与预后呈负相关,对患者的预后评估具有潜在价值。

lncRNA MIAT通过miR-203调控NPAS4促进胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的机制研究

目的 本研究通过体外培养胃癌细胞HGC-27,探究lncRNA MIAT能否通过靶向miR-203调控神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)促进胃癌细胞增殖、侵袭、迁移。方法 体外培养HGC-27与GES-1细胞,qRT-PCR法检测各细胞中lncRNA MIAT、miR-203、NAPS4 mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MIAT与miR-203、miR-203与NPAS4之间的靶向关系。将对数生长期HGC-27细胞分组并进行转染:对照组、si-NC组(转染si-NC)、si-MIAT组(转染si-MIAT)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-203组(转染miR-203)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-203组(转染anti-miR-203)、si-MIAT+anti-miR-NC组(转染si-MIAT+anti-miR-NC)、si-MIAT+anti-miR-203组(转染si-MIAT+anti-miR-203)、pc-NC组(转染pc-NC)、pc-NAPS4组(转染pc-NAPS4)、pc-NAPS4+miR-NC组(转染pc-NAPS4+miR-NC)、pc-NAPS4+miR-203组(转染pc-NAPS4+miR-203),qRT-PCR法检测lncRNA MIAT、miR-203、NPAS4 mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力;Western blot法检测MMP-3、MMP-9、CyclinD1、NPAS4蛋白表达。结果 与GES-1细胞比较,胃癌细胞HGC-27中lncRNA MIAT、NAPS4 mRNA表达显著升高,miR-203表达显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,lncRNA MIAT能够靶向miR-203调控NAPS4(P<0.05)。沉默lncRNA MIAT可显著降低细胞活力以及迁移与侵袭能力,下调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达,降低NAPS4 mRNA和蛋白表达(P<0.05);过表达miR-203可显著降低NAPS4 mRNA和蛋白表达,降低细胞活力以及迁移与侵袭能力,下调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达(P<0.05);而抑制miR-203表达则与miR-203过表达作用相反,且抑制miR-203表达可显著逆转沉默lncRNA MIAT对细胞活力以及迁移与侵袭能力的抑制作用(P<0.05);过表达NAPS4可显著促进HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭,上调MMP-3、MMP-9、CyclinD1蛋白表达(P<0.05),同时其对细胞恶性行为的促进作用可被miR-203过表达削弱(P<0.05)。结论 沉默lncRNA MIAT可通过靶向miR-203调控NAPS4表达,减弱胃癌细胞增殖、侵袭、迁移等细胞生物学行为过程。

长链非编码RNA MIAT在肾透明细胞癌中的表达情况和预后意义

目的探讨长链非编码RNA MIAT在肾透明细胞癌中的表达情况及与患者临床指标的相关性,分析其作为肾透明细胞癌分子标记物的可能性。方法通过荧光定量PCR方法检测MIAT在40例肾透明细胞癌组织和40例癌旁正常组织中的表达情况,同时结合TCGA数据库分析MIAT表达水平与肾透明细胞癌患者临床指标和预后的关系。结果 MIAT在肾透明细胞癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,在肾癌细胞系中的表达明显高于正常肾小管上皮细胞,差异均具有统计学意义(P<0.05)。TCGA数据库资料分析表明,MIAT表达水平与肾癌患者T分期(P<0.001)、M分期呈正相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,高表达MIAT的肾癌患者总体生存时间明显低于低表达MIAT的肾癌患者(Log-rank P<0.05)。结论 MIAT在肾透明细胞癌组织和肾癌细胞系中高表达,有可能成为肾透明细胞癌的分子标记物。

lncRNA MIAT在巨噬细胞炎症反应中的作用

目的:探索长链非编码RNA心肌梗死转录本(lncRNA MIAT)在巨噬细胞炎症反应中的作用及其可能参与的炎症通路。方法:脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞J774A.1制备炎症反应细胞模型(LPS组),以等体积PBS刺激的J774A.1细胞为PBS对照组(PBS组),实时定量PCR(RT-qPCR)及ELISA法检测两组IL-1β、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平,RT-qPCR检测lncRNA MIAT在两组的表达量及亚细胞定位;shRNA敲低lncRNA MIAT,分为shMIAT敲低(KD)组、shNC阴性对照(NC)组,RT-qPCR检测lncRNA MIAT敲低效率及两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量;Western blot检测KD、NC组的NF-κB、ERK5等多种转录因子磷酸化水平;在LPS刺激J774A.1细胞分别加入ERK5特异性抑制剂(ERK5-IN-2)、ERK5-IN-2溶解液二甲基亚砜(DMSO),分为抑制剂组、DMSO对照组,Western blot检测ERK5磷酸化水平,RT-qPCR检测两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量。结果:LPS组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于PBS组(P<0.05);lncRNA MIAT在LPS组相对表达量显著高于PBS组,且主要表达于细胞核;lncRNA MIAT在KD组显著低于NC组,其在J774A.1细胞的敲低效率为43%。KD组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量显著高于NC组;KD组ERK5磷酸化程度显著高于NC组,而NF-κB、STAT3、ERK1/2磷酸化水平差异无统计学意义;抑制剂组EKR5磷酸化显著低于DMSO对照组,且抑制剂组的IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平显著低于DMSO对照组。结论:lncRNA MIAT可能通过抑制ERK5磷酸化减少IL-1β、TNF-α合成,从而抑制巨噬细胞炎症反应。

卵巢癌中lncRNAMIAT/miR-139-5p轴表达的临床意义及生物学功能研究

目的研究卵巢癌中lncRNAMIAT/miR-139-5p轴表达的临床意义及生物学功能。方法选取2017年1月至2019年12月在广安市人民医院行卵巢切除手术的160例患者的卵巢组织作为临床样本,其中100例卵巢癌组织和60例卵巢良性肿瘤组织,并培养正常卵巢上皮细胞株HOSE及卵巢癌细胞株SK-OV3、A2780、OVCR3,检测临床样本卵巢组织及细胞株中lncRNAMIAT、miR-139-5p的表达水平。将SKOV3细胞进行随机分组,分别转染lncRNAMIAT-siRNA、阴性对照(NC)-siRNA、miR-139-5p抑制物、miR-NC抑制物,通过检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭,研究lncRNAMIAT与miR-139-5p的靶向结合。结果卵巢癌组织中lncRNAMIAT的表达水平高于卵巢良性肿瘤组织,miR-139-5p的表达水平低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);SKOV3、A2780、OVCR3细胞中lncRNAMIAT的表达水平高于HOSE细胞,miR-139-5p的表达水平低于HOSE细胞(P<0.05);转染siRNA沉默lncRNAMIAT后,SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭均受到抑制,细胞中miR-139-5p的表达水平增加(P<0.05);过表达miR-139-5p后,细胞中lncRNAMIAT报告基因的荧光活力降低(P<0.05);沉默lncRNAMIAT的同时沉默miR-139-5p,SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭均明显增强(P<0.05)。结论lncRNAMIAT/miR-139-5p轴表达的变化与卵巢癌的发病有关,lncRNAMIAT通过靶向miR-139-5p促进癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

长链非编码RNA-心肌梗死相关转录本对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的调控作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)-心肌梗死相关转录本(myocardial infarction-associated transcript,MIAT)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的调控作用。方法体外培养人晶状体上皮细胞株HLE-B3,分为空白对照组、H_(2)O_(2)组、阴性对照组(转染空质粒)、si-MIAT组(慢病毒感染siMIAT质粒)、si-MIAT+miR-22 inhibitor组(慢病毒感染siMIAT质粒+脂质体转染miR-22 inhibitor),除空白对照组外,各组细胞均用100μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)培养12 h。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定各组细胞中lncRNA-MIAT的相对表达水平。采用CCK-8法检测细胞存活率和凋亡率。流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平。双荧光素酶和RNA结合蛋白免疫共沉淀实验分析lncRNA-MIAT和miR-22以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的靶向关系。Western blot检测各组细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK蛋白表达。结果与空白对照组相比,H_(2)O_(2)组可诱导HLE-B3细胞lncRNA-MIAT表达上调,miR-22表达降低(均为P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-MIAT组细胞miR-22相对表达量升高,而与si-MIAT组相比,si-MIAT+miR-22 inhibitor组细胞miR-22相对表达量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,si-MIAT+H_(2)O_(2)组细胞存活率升高,细胞凋亡率和MDA、ROS含量降低,BAX蛋白、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、p-JNK/JNK比值均降低(均为P<0.05)。经双荧光素酶报告基因分析,lncRNA-MIAT靶向结合miR-22,且p38是miR-22的下游靶基因。与si-MIAT+H_(2)O_(2)组相比,si-MIAT+miR-22 inhibitor+H_(2)O_(2)组细胞存活率降低,细胞凋亡率和MDA、ROS含量增加,BAX蛋白、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值、p-JNK/JNK比值均增加(均为P<0.05)。结论lncRNA-MIAT具有海绵吸附miR-22的作用,敲低lncRNA-MIAT可通过上调miR-22表达进而抑制p38 MAPK/JNK通路活化,抑制H_(2)O_(2)诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激反应。

敲低长链非编码RNA MIAT对视网膜母细胞瘤肿瘤成球、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探究敲低长链非编码RNA MIAT(lncRNA MIAT)对视网膜母细胞瘤(RB)SO-RB50细胞系成球、侵袭能力及裸鼠移植瘤生长的影响。方法选择襄阳市中心医院2015年3月至2017年3月38例RB患者,并收集RB组织38例。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析lncRNA MIAT高表达和低表达患者生存率。将SO-RB50细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、sh-MIAT组,构建sh-MIAT及shRNA-NC载体并转染对应细胞组。RT-PCR检测MIAT、E-cadherin和N-cadherin的表达。通过细胞成球、克隆形成试验、Transwell分别检测细胞成球、增殖、侵袭能力。Western blot检测VEGF、MMP-16、E-cadherin、N-cadherin的表达情况。构建裸鼠移植瘤模型,比较肿瘤生长情况,并通过免疫组化检测VEGF的表达情况。结果lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者。与对照组相比,shRNA-NC组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量、VEGF、MMP-16、N-cadherin和E-cadherin表达量均无明显差异。与对照组相比,sh-MIAT组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量和VEGF、MMP-16、N-cadherin表达量均较小/少/低,而E-cadherin表达量较高,裸鼠模型的肿瘤质量较低,且VEGF阳性细胞数较少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者,且敲低lncRNA MIAT可抑制SO-RB50细胞成球、增殖、侵袭和裸鼠移植瘤的生长。

慢性心力衰竭患者外周血lncRNA MIAT和miR-214水平变化及与预后关系

目的观察慢性心力衰竭(CHF)患者外周血长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录物(MIAT)和miR-214表达情况及与预后关系。方法收集2018年1月至2021年3月舞阳县人民医院的50例CHF患者(观察组)和同期体检的30例健康受试者(对照组)的血浆标本。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血浆中lncRNA MIAT和miR-214的相对表达水平,采用彩色多普勒超声检测两组左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF)。根据随访结果将观察组进一步分为终点事件组和无终点事件组,分析外周血lncRNA MIAT和miR-214水平变化与预后关系。结果观察组BNP、lncRNA MIAT、LVEDD水平明显高于对照组,miR-214、LVEF明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。终点事件组年龄、脑钠肽(BNP)、lncRNA MIAT水平明显高于无终点事件组,miR-214水平明显低于无终点事件组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,CHF患者的lncRNA MIAT水平与LVEDD、BNP水平呈正相关(P<0.05),与LVEF、miR-214呈负相关(P<0.05);miR-214水平与LVEDD、BNP水平呈负相关(P<0.05),与LVEF呈正相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,lncRNA MIAT+miR-214预测CHF患者预后的曲线下面积(AUC)为0.890,高于BNP、miR-214单独预测的AUC,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA MIAT可以靶向miR-214调控CHF的发生和发展,对CHF患者预后预测具有一定的价值,可能成为预测CHF患者预后的标志物。

长链非编码RNA MIAT在幽门螺杆菌感染胃溃疡中的表达和作用机制

目的探讨长链非编码RNA MIAT在幽门螺杆菌感染的胃溃疡中的表达意义和作用机制。方法选取120例幽门螺杆菌感染的胃溃疡患者及100例经胃镜检查胃黏膜正常的患者,检测胃溃疡和正常胃黏膜组织以及血浆中MIAT的表达。构建幽门螺杆菌感染的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤模型,观察MIAT过表达后,幽门螺杆菌感染的胃黏膜细胞增殖、凋亡和炎症因子变化。结果胃溃疡组溃疡组织和血浆的MIAT表达水平均低于正常组,幽门螺杆菌阳性的胃溃疡患者的溃疡组织和血浆中的MIAT表达水平均低于幽门螺杆菌阴性的胃溃疡患者,差异均有统计学意义(P<0.001)。幽门螺杆菌感染后GES-1细胞的MIAT表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.001)。与未转染MIAT的GES-1细胞和未转染MIAT的HP感染的GES-1细胞比较,转染MIAT后,HP感染的GES-1细胞的增殖增加,凋亡率和炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长链非编码RNA MIAT在幽门螺杆菌感染的胃溃疡中存在低表达现象,MIAT的过表达可促进幽门螺杆菌感染后的胃黏膜上皮细胞增殖,降低凋亡率和炎症反应。

葛根素通过lncRNA TUG1或MIAT1抑制心肌肥厚进程的研究

目的:探讨葛根素治疗心肌肥厚的机制。方法:利用Ang II法建立心肌细胞肥厚模型,加入不同浓度葛根素处理24 h。采用细胞免疫荧光检测心肌细胞大小;Western blot法检测ANP(心房利钠肽)、BNP(B型钠尿肽)和β-MHC(β肌球蛋白重链)蛋白表达;荧光定量PCR检测lncRNA(CHRF、NEAT1、GAS5、MIAT、TUG1和SNHG1)表达水平。结果:和正常对照组相比,Ang II组心肌细胞显著增大(P <0.01),低、中、高3个浓度的葛根素均可以显著抑制心肌细胞增大的进程(P <0.05或0.01);Ang II组心肌细胞ANP、BNP和β-MHC的蛋白表达均显著升高(P <0.01),低、中、高3个浓度的葛根素均可以显著抑制其表达水平(P <0.05或0.01),并呈剂量依赖;Ang II组心肌细胞CHRF、NEAT1、GAS5、MIAT表达水平升高,而TUG1、SNHG1表达显著降低(P <0.01),低、中、高3个浓度的葛根素均可以显著促进TUG1的表达增加,抑制MIAT的表达(P <0.05或0.01)。结论:葛根素可能通过TUG1或者MIAT抑制心肌肥厚的进程。

LncRNA MIAT表达与ACS患者炎症因子及血管内皮功能的相关性研究

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(LncRNA MIAT)与急性冠脉综合征(ACS)患者炎症因子和血管内皮功能的相关性。方法选取ACS患者(ACS组)及健康者(对照组)各100例,检测心肌酶谱、肌钙蛋白I、血脂、血糖、肾功能等生化指标;心电图、心脏彩超、冠脉造影等辅助检查。抽取外周血液分离、纯化外周血清,酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)等炎症因子,提取外周血清RNA,Realtime-PCR检测LncRNA MIATO ELISA法检测血管内皮NO及人内皮素-1(ET-1)水平并使用测定仪检测肱动脉血管内皮功能。采用Logistic回归分析急性冠脉综合征与循环LncRNA MIAT表达水平的关系。采用Pearson相关系数分析ACS患者炎症因子和内皮功能损伤与循环LncRNA MIAT水平相关性。结果与健康组比较,ACS患者组生化指标谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-ME)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTNl)、LDL-C水平显著升高(P<0.05),ET-1浓度显著升高(P<0.05),NO水平和血管内皮功能数值显著降低(P<0.05);与健康对照组比较,ACS组外周血清中LncRNA MIAT表达水平显著增高(P<0.05),促炎因子TNF-α、IL-1、IL-6、M-CSF浓度显著增高(P<0.05);Logistic回归分析结果显示LncRNA MIAT表达水平可能是ACS相关危险因素,同时Pearson相关系数结果表明ACS患者炎症因子IL-6、TNF-α、血管内皮ET-1表达水平与LncRNA MIAT呈显著正相关(P<0.05),内皮功能数值和血管内皮NO浓度与LncRNA MIAT呈显著负相关(P<0.05)。结论LncRNA MIAT表达水平是ACS相关危险因素,可能参与血管内皮损伤过程和炎症反应,并起到促炎作用。

MIAT过表达载体的构建及其对血肿瘤屏障通透性的影响

目的构建长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(MIAT)过表达载体pcDNA3.1-MIAT,并研究其对血肿瘤屏障通透性影响。方法从与脑胶质细胞U87共培养的人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3(GECs)提取总RNA,用反转录聚合酶链式反应技术扩增出MIAT基因片段,通过无缝连接技术克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染重组质粒pcDNA3.1-MIAT到GECs中,real-time PCR检测转染效率,应用跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗漏实验分析血肿瘤屏障通透性的变化。结果成功扩增出MIAT基因,成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,Blast序列分析与GenBank中NR00349一致。转染pcDNA3.1-MIAT后,96h转染效率最高,过表达MIAT组跨内皮阻抗值最低,辣根过氧化物酶流量最高,血肿瘤屏障通透性最高。结论成功构建pcDNA3.1-MIAT表达载体,过表达MIAT使血肿瘤屏障通透性升高。