LncRNA-PANDAR介导EphA2、TRPM8对OSCC细胞侵袭、迁移及凋亡的作用机制

目的探究LncRNA-PANDAR介导EphA2、TRPM8对OSCC细胞生物活性的作用。方法人OSCC细胞系(SCC6、SCC9、SCC25)和正常人口腔角质形成细胞(HOK)来自上海子实公司,于实验室保存,经检测后PANDAR在SCC25细胞中水平最高,因此后续选择SCC25细胞进行实验。将PANDAR转染SCC25细胞后分为口腔癌组(癌细胞未处理)、对照组(转染不相关序列组)、转染组(转染PANDAR组)。运用RT-PCR、Transwell法、流式细胞仪、免疫印记法检测PANDAR水平、SCC25细胞侵袭、迁移、凋亡及EphA2、TRPM8、FAK蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测LncRNA-PANDAR与EphA2、TRPM8、FAK相关性。结果各口腔鳞癌细胞中PANDAR mRNA表达水平较HOK组细胞低(P<0.05),SCC25组中PANDAR表达水平高于其他口腔鳞癌细胞,组间比较显著差异(P<0.05),因此本文后续实验选用SCC25细胞进行。口腔癌组与对照组PANDAR、EphA2、TRPM8、FAK、侵袭数量、迁移数量、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶结果显示,转染LncRNA-PANDAR后EphA2、TRPM8及FAK野生型活性下降(P<0.05),对突变基因无影响(P>0.05),表明EphA2、TRPM8及FAK是LncRNA-PANDAR的靶基因。结论 LncRNA-PANDAR通过靶向降低EphA2、TRPM8活性从而抑制口腔鳞癌细胞的迁移、侵袭,促进其凋亡。

长链非编码RNAPANDAR在肾癌中的表达分析及临床意义

目的检测长链非编码RNA PANDAR在肾癌及癌旁组织中的表达水平,探讨其在肾癌中的临床意义。方法提取48对组织(肾癌及对应癌旁组织)中的总RNA,经逆转录获得c DNA后通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)方法检测PANDAR表达量,分析正常组织与肾癌组织中的表达差异,探讨其表达水平与患者临床特征之间的联系。结果肾癌组织中PANDAR的表达水平明显低于配对癌旁正常组织(P<0.001),标本中共有38例(79.17%)肾癌标本PANDAR表达下调,癌组织中PANDAR表达与患者TNM分期和AJCC分级相关,与患者年龄、性别及肾癌病理类型无明显相关性(P>0.05),PANDAR低表达组患者生存率低于高表达组患者(P<0.05)。结论 PANDAR在肾癌组织中表达明显下调,且和肾癌TNM、AJCC分级和预后相关,提示其有作为肾癌标志物应用于临床的可能。

长非编码RNA PANDAR在舌鳞状细胞癌中的功能研究

目的探究长非编码RNA(lncRNA)PANDAR在舌鳞状细胞癌中的表达及调控机制。方法利用实时定量荧光PCR(q RT-PCR)检测PANDAR在舌鳞癌临床样本及细胞系的表达水平,通过CCK-8法及流式细胞仪分析检测敲低PANDAR对舌癌细胞增殖和凋亡的影响。qRT-PCR和Western-blot检测敲低PANDAR对凋亡相关基因Bax表达的影响。结果 LncRNA PANDAR在舌鳞癌样本和细胞系内均显著高表达。敲低PANDAR可抑制Cal27和SCC25细胞的增殖并促进其凋亡。此外,敲低PANDAR有利于Bax蛋白的表达。结论 PANDAR在舌鳞癌组织中高表达。PANDAR通过下调促凋亡基因Bax的表达,促进舌鳞癌细胞的增殖并抑制其凋亡。

lncRNA PANDAR对KTC-3细胞生物学行为及RSK4信号通路的影响研究

目的探究lncRNA PANDAR对甲状腺癌细胞(KTC-3细胞)生物学行为及RSK4信号通路的影响。方法在华中科技大学实验室购买KTC-3细胞,随机分为过表达组(O组):将lncRNA PANDAR慢病毒质粒与KTC-3细胞混合培养;阴性对照组(N组):将sh PANDAR慢病毒质粒与KTC-3细胞混合培养;空白对照组(B组):KTC-3细胞与慢病毒包装质粒混合培养。通过克隆实验检测KTC-3细胞增殖,免疫细胞化学法检测RSK4蛋白阳性表达,qRT-PCR法检测lncRNA PANDAR表达量,Transwell检测KTC-3细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中RSK4蛋白含量,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡情况的差异性进行实验探究。结果与B组、N组比较,O组KTC-3细胞内lncRNA PANDAR表达量显著上升(P均<0.05),说明转染成功。与B组、N组相比较,O组KTC-3细胞增殖数量、侵袭能力显著升高(P均<0.05),B组与N组之间KTC-3细胞增殖数量、侵袭能力相差较小(P>0.05)。O组细胞的细胞核出现核固缩的概率显著高于B组、N组(P均<0.05),其中,B组、N组KTC-3细胞凋亡数量相差较小(P>0.05)。O组KTC-3细胞中RSK4蛋白表达、RSK4阳性数最高,与B组、N组相比较,O组KTC-3细胞RSK4蛋白表达、RSK4阳性数显著升高(P均<0.05),B组与N组之间KTC-3细胞中RSK4蛋白、RSK4阳性数含量相差较小(P>0.05)。结论lncRNA PANDAR过表达对KTC-3细胞生物行为有显著影响作用,对于细胞的增殖有正向促进能力,lncRNA PANDAR作用于甲状腺癌细胞生物行为可能与活化RSK4信号通路的表达相关。

高温对A549细胞PANDAR、LncRNA-p21及ST8SIA基因影响

目的探讨高温对人肺腺癌细胞株A549细胞中PANDAR、LncRNA-p21和ST8SIA基因表达的影响。方法取A549细胞随机分为4组。对照组细胞于37℃保温箱中培养,实验组细胞分别于40、42、44℃保温箱中培养,1 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测PANDAR、LncRNA-p21以及ST8SIA基因相对表达水平。结果 40、42、44℃实验组A549细胞的PANDAR基因相对表达水平分别低于对照组(P<0.05);44℃实验组A549细胞的PANDAR基因相对表达水平分别低于40和42℃实验组(P<0.05)。4组A549细胞中LncRNA-p21和ST8SIA基因相对表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高温可降低A549细胞中PANDAR基因的表达。