肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

PI3K/AKT通路对结肠癌LoVo细胞凋亡的影响及机制研究

探究中药单体甘草酸调控PI3K/AKT对结肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法 取不同浓度甘草酸作用结肠癌Lovo细胞48小时,CCK8比色模式测试甘草酸对Lovo细胞增殖作用。将甘草酸6.25-100 μg·mL–1 加到Lovo细胞中,流式细胞术检测甘草酸对Lovo细胞凋亡的影响。结果 75μg·mL–1的甘草酸可以使50%的Lovo细胞增殖受到抑制,具备浓度依赖性;75μg·mL–1 的甘草酸可以促进Lovo细胞的凋亡,并且调整p-PI3K、p-AKT蛋白的表述水平。结论 甘草酸可以促进结肠癌Lovo细胞的凋亡,其作用与抑制PI3K/AKT介导的信号通路相关。研究PI3K/AKT信号通路发现,此通路参与肿瘤的凋亡,PI3K也许是调控肿瘤凋亡的关键通路。

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549/DDP细胞Snail、E-cadherin表达的影响

目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 ng/L,48 h)、中药组(10%补中益气汤含药血清)、干扰组(Snail干扰)。采用siRNA技术,运用免疫细胞化学法、Western印迹法、实时荧光定量PCR法,检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞Snail、E-cadherin及mRNA水平的影响。结果与空白组比较,TGF-β1组E-cadherin及mRNA表达水平显著下调(P<0.05);与TGF-β1组比较,中药组及干扰组E-cadherin及mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。而Snail蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论Snail作为转录因子,可抑制E-cadherin基因的表达,诱导EMT发生,而补中益气汤含药血清可通过干预Snail蛋白及基因的表达,解除其对E-cadherin的抑制作用,从而逆转A549/DDP细胞EMT。

补中益气汤中的有效成分槲皮素通过GSTP1-JAK-STAT途径增强肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性

【目的】探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理。【方法】(1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系。(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况。细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系。【结果】补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合。通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展。此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达。在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性。【结论】槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性。

白杨素通过下调Annexin A3逆转人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性

目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞生存率;将A549/DDP细胞分为A549/DDP组、白杨素组(50 mol/L)、Annexin A3过表达组(Annexin A3mimic组)、Annexin A3阴性对照组(Annexin A3 NC)、白杨素+Annexin A3mimic组,另取A549细胞正常培养作为空白对照组;CCK-8法检测细胞对DDP的半数生存浓度(IC50)及耐药指数;qRT-PCR和Western blot法检测Annexin A3基因和蛋白表达水平,流式细胞义监测细胞凋亡率,小鼠荷瘤实验检测移植瘤体积。结果不同浓度的白杨素均能时效依赖性和剂量依赖性降低A549、A549/DDP细胞生存率(P<0.05),选取50 mol/L为实验浓度作用细胞48 h;与A549细胞比较,A549/DDP细胞Annexin A mRNA及蛋白表达、对DDP的IC50、耐药指数均升高,凋亡率降低(P<0.05);与A549/DDP组比较,白杨素组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),Annexin A3 mimic组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);Annexin A3基因高表达可减弱A549/DDP细胞对白杨素的敏感性,降低细胞凋亡率(P<0.05);小鼠荷瘤实验证实,与单独的DDP治疗组比较,白杨素与DDP联合治疗可显著降低小鼠A549/DDP移植瘤瘤体体积(P<0.05),Annexin A3基因高表达的小鼠逆转白杨素与DDP联合治疗效果(P<0.05)。结论白杨素可能通过下调Annexin A3表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨LASP1基因表达对人结肠癌(LOVO)细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高(P<0.01)。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P<0.01)。结论LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。

当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制

目的 探讨当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HT-15、顺铂耐药细胞株HT-15/DDP仅使用30μmol/L浓度的顺铂干预设为对照组,使用对应质量浓度1.0、1.5、2.0 mg/mL的当归多糖干预12 h后再加入30μmol/L浓度顺铂设为当归多糖组。通过脂质体细胞转染技术分别将miR-10b-5p inhibitor、TGFBR2 mimics转染至HT-15/DDP细胞中,再加入2.0 mg/mL当归多糖干预48 h,然后将其分为当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力。RT-PCR检测miR-10b-5p、TGFBR2 mRNA表达水平;Western blot检测TGFBR2蛋白表达水平。结果 单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显高于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,可明显增强HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显降低(P<0.01)。单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞凋亡率明显低于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,明显增强了HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。HT-15/DDP细胞miR-10b-5p、TGFBR2表达水平在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.01);不同剂量当归多糖组中HT-15/DDP细胞miR-10b-5p表达水平明显低于对照组,TGFBR2表达水平明显高于对照组(P<0.01),随着当归多糖剂量的增加miR-10b-5p表达水平逐渐降低,TGFBR2表达水平逐渐升高(P<0.01)。使用生物信息学数据库(TargetScan、miRanda)预测miR-10b-5p的靶基因,结果显示,TGFBR2是miR-10b-5p的候选靶基因。miR-10b-5p表达下调后,HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量明显高于对照组HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量(P<0.01)。当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组的HT-15/DDP细胞增殖率、细胞增殖迁移个数明显低于当归多糖组(2.0 mg/mL),HT-15/DDP细胞凋亡率明显高于当归多糖组(2.0 mg/mL)(P<0.05)。结论 当归多糖可通过下调miR-10b-5p表达、上调TGFBR2表达逆转结直肠癌细胞顺铂耐药性,进而抑制肿瘤细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。

臭椿酮对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的增敏作用

目的探讨臭椿酮(AIL)对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的增敏作用。方法采用MTT检测AIL对A549和A549/DDP细胞活力的影响;Chou-Talalay中效法分析臭椿酮与顺铂的联合用药指数(CI);流式细胞术检测细胞周期及凋亡,Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平。结果AIL(0.6μmol/L)与DDP(50μg/mL)联合用药有协同作用;细胞周期阻滞在G1期,同时细胞凋亡率升高;Caspase-3和Bcl-2蛋白表达下降,Cleaved Caspase3、Bax、CDK4和CyclinD1的蛋白表达升高。结论AIL可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,协同DDP抑制A549/DDP细胞的生长,促进其凋亡。

白藜芦醇通过铁死亡途径逆转食管癌细胞Eca109/DDP化疗耐药

背景白藜芦醇不仅具有抗肿瘤作用,其还能增强多种化疗药物的化疗敏感性,但其对食管癌耐药细胞的顺铂敏感性的作用尚不清楚.目的探讨白藜芦醇逆转食管癌细胞Eca109/DDP的耐药效应并从铁死亡的角度分析其潜在的作用机制.方法采用MTT法确定白藜芦醇和顺铂的最佳作用时间和浓度;检测细胞增殖、细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及铁离子的水平;Western blot检测铁死亡相关调控因子酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl coenzyme A synthetase long chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)的蛋白表达情况.结果MTT检测结果显示,相较于单用顺铂,联用白藜芦醇对Eca109/DDP细胞的生长抑制作用较为显著(P<0.05).此外,白藜芦醇和顺铂联用可显著降低Eca109/DDP细胞克隆形成数(P<0.05),增加细胞内铁离子、MDA和ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05).铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和铁离子螯合剂(deferoxamine,DFO)可部分逆转白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用(P<0.05).Western blot的结果显示相较于其他组,白藜芦醇和顺铂联用组的FTH和GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05),而ACSL4和P53的蛋白表达显著增加(P<0.05).结论白藜芦醇可通过铁死亡抑制Eca109/DDP细胞的增殖并逆转顺铂耐药.

淫羊藿苷通过IL-6/STAT3通路逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用机制研究

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(IL-6)和信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路的调节。方法 第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率的影响。采用不同浓度DDP及50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,MTT法检测ICA对A549/DDP细胞化疗敏感性的影响。采用4μg/mL DDP和50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell试验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP) mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果 细胞增殖率随ICA浓度的增加而降低(P<0.05)。与单独使用不同浓度DDP处理A549/DDP细胞比较,50和100μmol/L ICA处理提高细胞对DDP的敏感性,降低DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)(P<0.05)。50和100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,细胞侵袭能力减弱、LRP和MRP mRNA相对表达量以及IL-6、STAT3和Bcl-2蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达量升高。结论 ICA可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转耐药性,其可能是通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥作用。

丹参酚酸B通过抑制ROS对大肠癌LOVO细胞侵袭与迁移的作用

目的:验证丹参酚酸B(SalB)通过上调细胞内活性氧(ROS)含量抑制LOVO细胞侵袭与迁移以及SalB对LOVO细胞侵袭和迁移的量效相关性调控。方法:体外培养人大肠癌LOVO细胞,并将其分成6组,Control组、SalB-L组、SalB-M组、SalB-H组、H_(2)O_(2)组和SalB-M+NAC组,进行分组干预。显微镜下观察LOVO细胞形态,采用流式细胞术测定细胞内ROS浓度,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力。结果:显微镜下可见,SalB干预后LOVO细胞生长抑制、细胞伪足变短或消失;低浓度SalB对LOVO细胞内ROS含量无影响(P>0.05),中、高浓度SalB浓度依赖性促进细胞内ROS生成(P<0.01),中浓度SalB诱导产生的ROS可被ROS清除剂NAC完全清除(P<0.01);低浓度SalB对LOVO细胞侵袭、迁移能力无影响(P>0.05),中、高浓度SalB可浓度依赖性抑制LOVO细胞侵袭、迁移(P<0.01),中浓度SalB对细胞侵袭、迁移的抑制作用可被NAC完全逆转(P<0.01)。结论:SalB可通过上调细胞内ROS浓度量效相关性抑制大肠癌LOVO细胞侵袭和迁移。

绿茶水提取物诱导体外培养的大肠癌LOVO细胞的凋亡

目的：探讨绿茶水提取物对体外培养的大肠癌ＬｏＶｏ细胞的抑制和诱导细胞发生凋亡的作用。方法：用ＭＴＴ法、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜和流式细胞仪的方法，观察绿茶水提取物处理ＬｏＶｏ细胞后其生化和形态学等指标的改变。结果：ＭＴＴ法证实绿茶水提取物对ＬｏＶｏ细胞有抑制作用，抑制率与绿茶水提取物的浓度呈正相关；透射电镜可见ＬｏＶｏ细胞在形态学上出现典型的细胞核固缩、碎裂等凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳呈典型的“梯状（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）”带。流式细胞仪检测结果示：在绿茶水提取物处理ＬｏＶｏ细胞后０～１２ｈＧ１期前无亚二倍体峰出现，而在３６ｈＧ１期前出现一亚二倍体峰，即凋亡峰。结论：绿茶水提取物对大肠癌ＬｏＶｏ细胞有抑制和杀灭作用，而这种作用的机制之一是通过诱导大肠癌细胞发生凋亡，即诱导大肠癌细胞发生凋亡是绿茶杀灭肿瘤细胞的重要机制之一。

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。

大蒜素对结肠癌LoVo细胞增殖的影响

目的:观察大蒜素对结肠癌细胞LoVo生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的LoVo细胞,倒置显微镜下观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对LoVo细胞增殖抑制能力,An-nexinV-FITC标记流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞的凋亡抑制率,流式细胞术检测大蒜素对LoVo细胞周期影响。结果:大蒜素可抑制人结肠癌LoVo细胞增殖,具有明显量效和时间依赖性,24、48和72h大蒜素抑制LoVo细胞的IC50分别为32.23、10.74和6.58μg/ml;大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,作用24h其诱导凋亡率随着药物浓度的递增具有增高趋势,作用48h其诱导凋亡作用峰值浓度为8μg/ml,后再继续增加浓度凋亡率反而下降;大蒜素作用LoVo细胞24h后,大蒜素浓度低于4μg/ml时,LoVo细胞周期被阻滞于G2/M;而高于4μg/ml时,细胞周期被阻滞于G2/M和G1期。结论:大蒜素能够诱导LoVo细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。

大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应

目的探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应。方法体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达。结果AQP2表达于LoVo细胞的细胞膜,且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性。进一步的Western blotting证实,不同质量浓度大黄素含药培养液均可抑制AQP2蛋白的表达,药物质量浓度愈大,AQP2蛋白的表达愈低,其中大黄素20 mg/L组及40 mg/L组AQP2蛋白表达显著性降低;大黄素作用3、6 h组,AQP2蛋白表达上升,但与对照组比较,无显著差异;作用12、24、48 h组,AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势。半定量RT-PCR结果显示,随着大黄素质量浓度的增加,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势;在时间-效应方面,随着用药时间的延长,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势。结论大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译,这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大黄的泻下作用有关。

大黄酸对LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应

目的:探讨大黄酸对体外培养LoVo细胞水通道蛋白4(AQP4)的调节效应。方法:体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸含药培养液处理24 h及大黄酸含药培养液(20 mg/L)处理不同时间,其中不同浓度分为大黄酸高(40 mg/L)、中(20 mg/L)、低(10 mg/L)剂量组和正常对照组;不同作用时间分为3、6、12、24、48 h组和正常对照组。采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP4蛋白表达定位,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达。结果:AQP4主要表达于LoVo细胞的细胞膜上,在细胞浆也有少量表达。随着大黄酸用药剂量增加,AQP4表达持续下降;大黄酸低剂量组与正常对照组比较,AQP4表达下降但无显著性差异;大黄酸中、高剂量组,AQP4表达则呈显著性下降。在时间效应方面,大黄酸3、6 h组AQP4表达无显著性下降,但在12、24、48 h组则显著下降;同时研究发现,AQP4表达下降的程度与大黄酸剂量及大黄酸作用时间均存在相关性。结论:大黄酸可抑制LoVo细胞AQP4基因转录与翻译,提示大黄酸对AQP4表达的调节可能与大黄的泻下作用有关。

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01),呈浓度依赖性。②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P<0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果。③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少。④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响。结论常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力。

榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/(GSSG+GSH)比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果:不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/(GSSG+GSH)比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论:榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。

enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制作用

目的研究enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的增殖抑制活性。方法应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株的细胞毒活性。结果enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin对HL60细胞株和LOVO细胞株都有一定程度的抑制作用,其抑制活性呈现剂量-效应关系,其中以serrin B和nodosin效果较为显著。结论enmein、serrin B、nodosin和lasiodonin是中药溪黄草拮抗白血病和结肠癌的有效成分,溪黄草具有一定的防治白血病和结肠癌的作用。