2Gy多分割不同顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞生物效应的研究

目的探讨总剂量为2 Gy时部分分割和顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应的差异。方法采用克隆形成法和四唑盐(MTT)比色法,检测2 Gy剂量照射后鼻咽癌CNE-2细胞的细胞生存率和具有代谢活性细胞比例。结果在多个等分割照射中,较小分割(≤0.5 Gy)多次照射的细胞存活率均明显低于单次照射组(2 Gy),差异有统计学意义(P<0.05),而较大分割(1 Gy)照射与单次照射组细胞生存率差异无统计学意义;在2个部分分割和3个部分分割照射中,随着S分割剂量的增大,各S-L和S-S-L照射组细胞生存率呈逐渐下降趋势,至S分割为0.4 Gy(S-L)或者0.5Gy(S-S-L)组时细胞生存率最低;大部分S-L照射组细胞生存率明显低于L-S照射组,大部分S-S-L照射组细胞生存率和相对细胞生存率明显低于L-S-S照射组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论总剂量为2 Gy照射时,分割剂量大小和照射顺序是影响鼻咽癌CNE-2细胞放射治疗生物效应的重要因素。

洛铂抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖及其机制的初探

目的:观察洛铂(LBP)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其中机制.方法:将不同浓度的洛铂加入对数生长期的CNE-2细胞,采用倒置显微镜观察各细胞生长状态;四甲基氮唑蓝(MTT)法观察其对细胞的增殖抑制;共聚焦显微镜观察洛铂促凋亡作用;Western blot方法分析CNE-2细胞内Bcl-2蛋白表达变化.结果:共聚焦显微镜下观察洛铂作用CNE-2细胞后出现明显的凋亡学形态特征.MTT法显示洛铂能抑制细胞增殖,并呈浓度及时间依赖关系.Western blot结果显示洛铂能使CNE-2细胞Bcl-2蛋白表达水平下降.结论:洛铂能明显抑制CNE-2细胞增殖,诱导凋亡,可能与调节Bcl-2蛋白表达水平相关.

鼻咽清颗粒抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外增殖及对放疗敏感性的影响

目的:体外考察鼻咽清颗粒对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制和放射增敏作用。方法:以体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞为研究对象,MTT法考察鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的增殖抑制作用,克隆形成实验检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞的放射增敏效应,流式细胞仪检测鼻咽清颗粒对CNE-2细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:鼻咽淸颗粒浓缩液能抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈时间-剂量依赖性;24,48和72 h的IC_50分别70.79,60.13,51.63 mg·ml-1(按主药材质量计);集落形成实验表明鼻咽清颗粒的浓缩液联合放射能明显降低CNE-2细胞集落形成,随着主药浓度的增加,CNE-2细胞集落形成减少,阴性对照组、单纯放射组、10 mg·ml-1和20 mg·ml-1(按主药材的重量计)鼻咽清浓缩液的集落形成数差异具有统计学意义(P<0.05);随着培养基中鼻咽清主药含量的增加,G2/M期所占的百分比提高,凋亡细胞所占的比例也相应增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:鼻咽清颗粒可抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖,将CNE-2细胞阻滞于G2/M期,诱导鼻咽癌细胞凋亡,具有放疗增敏作用。

赫赛汀对鼻咽癌细胞株体内外生长的影响

目的探讨赫赛汀(Herceptin)对鼻咽癌细胞株体内外生长的影响。方法采用免疫组化技术检测鼻咽癌组织HER-2/neu基因表达;采用3H-TdR细胞掺入法测定Herceptin对鼻咽癌细胞株体外生长的影响;用荷瘤裸鼠模型观察Herceptin对鼻咽癌细胞株体内生长的影响。结果HER-2/neu基因在鼻咽癌组织中有过表达;Herceptin可抑制HER-2/neu基因过表达的鼻咽癌细胞株CNE-2Z3H-TdR掺入和影响荷瘤裸鼠肿瘤的生长。结论Herceptin可抑制CNE-2Z细胞株体外3H-TdR掺入,并影响CNE-2Z细胞株体内的生长。

MicroRNA-34a对人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及分子机制研究

目的:探讨MicroRNA-34a(miR-34a)对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及其可能的分子机制。方法:体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞系,利用mi R-34a重组质粒及Scrambled mi RNA重组质粒分别构建miR-34a及阴性对照mi RNA稳定转染细胞株,q RT-PCR检测细胞内mi R-34a表达。选取6周龄雄性BLAB/c裸鼠15只,随机分为3组:mi R-34a组(5只),Scrambled mi RNA组(5只)及空白对照组(5只)。于裸鼠背部近右后肢皮下注射重组CNE-2细胞悬液,建立移植瘤模型,每7 d测定实验组与对照组肿瘤体积变化,饲养35 d后处死,完整取出肿瘤,测定肿瘤重量及终体积。提取肿瘤组织RNA及蛋白,采用qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-34a的表达;分别采用q RT-PCR及免疫组化法检测细胞周期调控基因CDK6及抗凋亡基因Bcl-2 m RNA及蛋白的表达。结果:mi R-34a稳定转染CNE-2细胞后可显著提高细胞内mi R-34a表达量(P<0.05)。15只裸鼠均成功构建皮下移植瘤模型,饲养21 d后,与Scrambled mi RNA组及空白对照组相比,mi R-34a组肿瘤体积显著减小(P<0.05)。饲养35 d后,mi R-34a组、Scrambled mi RNA组及空白对照组肿瘤平均重量分别为(0.81±0.13)g、(1.47±0.21)g、(1.58±0.37)g,肿瘤平均终体积分别为(351.37±98.19)mm3、(798.75±91.04)mm3、(849.62±101.32)mm3,mi R-34a组肿瘤平均重量及肿瘤平均终体积均显著小于其余两组(P<0.05)。mi R-34a组中mi R-34a的表达量显著高于其余两组(P<0.05);mi R-34a组中CDK6及Bcl-2 m RNA及蛋白表达量显著低于其余两组(P<0.05)。结论:miR-34a可能通过下调CNE-2细胞内CDK6及Bcl-2的表达水平从而抑制CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,发挥其抗肿瘤作用。

盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:体外实验研究盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响。方法:通过CCK-8法检测盐霉素作用后鼻咽癌CNE-2细胞的增殖情况。利用克隆集落形成实验观察鼻咽癌细胞成活情况,单击多靶模型拟合剂量存活曲线,计算放射增敏指数(SER);Chou-Talalay数学模型绘制联合指数(CI)曲线,判断盐霉素和放射的作用关系。利用γ-H2AX焦点形成检测DNA分子损伤情况。结果:盐霉素能够抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且具有明显的时间和剂量依赖性;盐霉素作用鼻咽癌细胞的IC50值在24 h时为17.81μmol/L,48 h时为3.98μmol/L。根据单击多靶模型拟合细胞的存活曲线,可知在鼻咽癌细胞CNE-2中盐霉素浓度为0.1μmol/L和0.5μmol/L时SER分别为1.19和1.21,均大于1.0,表明盐霉素对鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用。制作联合指数(CI)曲线,可知在盐霉素浓度为0.1μmol/L时,放射剂量为2 Gy时,CI值≈1,盐霉素和放射对CNE-2的作用接近相加作用,放射剂量为4、6、8 Gy时,CI值均<1,二者为协同作用;在盐霉素浓度为0.5μmol/L时,放射剂量为2、4、6、8 Gy时,CI值均<1,二者均为协同作用。相对于照射组,盐霉素+照射组能增加DNA损伤数目。结论:盐霉素能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,为一种潜在的放射增敏药物。

检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制

目的 探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分4个组,对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CvclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M 期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.

玉屏风颗粒抑制鼻咽癌作用实验研究

目的探讨玉屏风颗粒对鼻咽癌的治疗作用。方法采用人鼻咽癌CNE-2细胞模型和裸鼠体内异种移植瘤模型,研究玉屏风颗粒对CNE-2细胞存活率和荷鼻咽癌裸鼠肿瘤体积、体重及生存期的影响。结果玉屏风颗粒对CNE-2细胞有明显的抑制作用。与对照组相比,玉屏风颗粒组[4 g·(kg·d)^-1]能显著增加荷鼻咽癌裸鼠体重,并抑制肿瘤的生长;顺铂组(每周6 mg·kg^-1)及玉屏风颗粒+顺铂组[4 g·(kg·d)^-1+每周6 mg·kg^-1]则显著降低荷鼻咽癌裸鼠体重,并抑制肿瘤的生长。玉屏风颗粒单独使用和与顺铂联用均能显著延长裸鼠的生存期。结论玉屏风颗粒具有抑制鼻咽癌作用,能显著延长荷鼻咽癌裸鼠生存期,提高生存质量,未发现明显毒副作用。

检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制

目的 检测细胞周期分布的改变以探讨温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.方法 实验分对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组.采用流式细胞仪分析G2/M期分布比例及凋亡百分比,Western-Blotting检测CyclinB1的表达,改良的荧光染色法观察核碎片形态.结果 联合处理组G2/M期分布比例较高,CyclinB1表达较高,并产生更多的核碎片,放射诱导的凋亡百分比并不增加.结论 G2/M期分布比例增高,CyclinB1表达增加是温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射增敏作用的机制.

洛铂对鼻咽癌细胞CNE2体外放射增敏作用的研究

目的 研究洛铂联合外照射对人鼻咽癌细胞系CNE2的杀伤和放射增敏作用及其机制。方法 以对数生长期的人鼻咽癌细胞系CNE2为研究对象，MTT法检测单纯洛铂和洛铂联合照射对CNE2细胞的增殖抑制作用；克隆形成试验分析洛铂对CNE2细胞的放射增敏作用；流式细胞仪检测单纯洛铂组和洛铂联合照射组细胞凋亡及细胞周期分布；蛋白免疫印迹检测Bcl-2、 Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 洛铂对CNE2有增殖抑制作用，且细胞毒性呈剂量依赖性，IC50为1.610 μmol/L，洛铂联合照射60Co γ射线4 Gy对CNE2细胞IC50为0.077 μmol/L。洛铂联合照射组放射增敏比大于3。24 h内随洛铂浓度增加，鼻咽癌细胞进入G2/M期比例增多。而洛铂联合照射将鼻咽癌细胞更多地阻滞于G2/M期，当洛铂浓度增大到6 μmol/L，洛铂联合照射组主要将细胞阻滞于S期。洛铂5 μmol/L作用24 h可引起15.6%的细胞凋亡，4 Gy照射可引起11.3%细胞凋亡，洛铂联合照射组可引起61.8%的细胞凋亡。蛋白免疫印迹结果显示，洛铂联合照射组抑制凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降，促进凋亡诱导蛋白Bax以及活化的Caspase-3表达水平升高。结论 洛铂对人鼻咽癌CNE2细胞有放射增敏作用，作用机制可能与抑制Bcl-2表达，促进Bax表达，激活Bcl-2（Bax）-Caspase信号通路有关。

miR-421下调FOXO4增强鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)在头颈部肿瘤中位居首位,对人们的身体健康构成严重威胁。放射治疗是目前治疗鼻咽癌的有效手段,但是鼻咽癌组织存在对放射射线不敏感的细胞,这对放疗敏感性提出了更高要求。为探究miR-421下调FOXO4对鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性的作用,本研究先对miR-421靶基因进行预测,然后考察不同放疗剂量对miR-421和FOXO4 mRNA表达水平的影响,直接证明miR-421及FOXO4与鼻咽癌细胞放疗敏感性有关,最后通过存活曲线、流式细胞仪检测、MTT法,探究了miR-421上调、FOXO4沉默对鼻咽癌细胞CNE-2放疗敏感性的影响。结果发现,FOXO4为miR-421的潜在靶基因,鼻咽癌细胞CNE-2经放射处理后,miR-421的表达水平明显下降,FOXO4的表达水平显著升高;miR-421上调和FOXO4沉默均增强了鼻咽癌细胞放疗的敏感性,降低了癌细胞存活率和克隆形成率,提高了的癌细胞凋亡率。可得知,miR-421通过负调控FOXO4靶基因增强鼻咽癌细胞CNE-2放疗的敏感性,这为进一步深入研究miR-421对其靶基因FOXO4的作用机制打下基础。

shRNA靶向干扰SMG-1表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨shRNA靶向干扰生殖器形成抑制基因-1(SMG-1)表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响。方法选择24只雌性BALB/c-nu小鼠,分为A组(未放射)与B组(放射),每组根据接种细胞(野生型CNE-2细胞、转染SMG-1无效干扰序列的CNE-2MG细胞、稳定转染shRNA-SMG-1有效干扰序列的CNE-2SH细胞)的不同,再次分为3组,划分情况:A组下有N-CNE-2组、N-CNE-2MG组、N-CNE-2SH组,B组下有Y-CNE-2组、Y-CNE-2MG组、Y-CNE-2SH组。比较不同组别间瘤体体积与重量,通过苏木素-伊红(HE)染色比较瘤体组织学特点,TUNEL法原位检测瘤体中凋亡细胞并进行比较,通过MMT法、流式细胞仪检测细胞放射后的细胞存活率。结果N-CNE-2SH组瘤体体积小于N-CNE-2组(t=15.633,P<0.05)、N-CNE-2MG组(t=11.938,P<0.01),体积抑瘤率38.60%;放射后,Y-CNE-2SH组瘤体体积小于Y-CNE-2组(t=16.621,P<0.05)、Y-CNE-2MG组(t=17.921,P<0.05),体积抑瘤率64.88%。相较于N-CNE-2组、N-CNE-2MG组,N-CNE-2SH组的瘤体重量减小、癌细胞凋亡细胞数增多(P<0.05),重量抑瘤率50.70%;相较于Y-CNE-2组、Y-CNE-2MG组、N-CNE-2SH组,Y-CNE-2SH组的瘤体重量减小、癌细胞凋亡细胞数增加(P<0.05),重量抑瘤率70.65%。Y-CNE-2SH组瘤体组织切片内癌细胞核发生固缩、破裂、溶解,大片液化坏死区出现。结论shRNA靶向干扰SMG-1表达可增强鼻咽癌细胞放射敏感性。