长链非编码RNA loc285194对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)loc285194在胃癌细胞株中的表达及其对增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法收集4个胃癌细胞株(MGC-803、Hs746T、AGS、BSG823)及1个胃黏膜上皮细胞株GES-1(均购自美国典型菌种保藏中心),利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定lncRNA loc285194在胃癌和胃黏膜上皮细胞株中的表达。MGC-803细胞培养后分成3组,即lncRNA loc285194过表达组(lncRNA loc285194组)、阴性对照组(Vector组)、空白对照组(Blank组),分别经重组慢病毒转染loc255194过表达序列(LV-loc255194)、阴性对照序列(LV-NC),Blank组仅给予空白对照。RT-qPCR测定3组病毒转染效率,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测增殖,流式细胞术检测凋亡,蛋白质印迹法测定p53、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)及β-肌动蛋白(β-actin)的表达。3组间的比较采用方差分析,在有意义的基础上两组间比较采用LSD-T检验。结果胃癌细胞株MGC-803、Hs746T、AGS、BSG823中lncRNA loc285194相对表达量低于胃黏膜上皮细胞株GES-1(F=18.432,P<0.05)。lncRNA loc285194组lncRNA loc285194相对表达量高于Vector组(t=8.487,P<0.01),提示转染成功。细胞铺板后24、48、72、96 h,lncRNA loc285194、Vector组的吸光度(A)450 nm值分别为0.25±0.03比0.26±0.03(t=1.546,P>0.05),0.35±0.04比0.47±0.04(t=2.376,P>0.05),0.61±0.03比1.03±0.05(t=6.126,P<0.05)及0.79±0.08比1.71±0.11(t=8.813,P<0.01)。Blank组与Vector组A450 nm值差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA loc285194组细胞凋亡率高于Vector组[(28.9±2.2)%比(4.7±0.6)%,t=7.265,P<0.01]。Blank组与Vector组细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA loc285194组p53蛋白表达量高于Vector组(3.32±0.04比1.02±0.03,t=6.464,P<0.05)。lncRNA loc285194组cleaved Caspase-3蛋白表达量高于Vector组(2.82±0.04比1.01±0.03,t=5.214,P<0.05)。Blank组与Vector组p53及cleaved Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论lncRNA loc285194可通过上调p53和cleaved Caspase-3蛋白表达抑制癌细胞增殖,并促进细胞凋亡。