LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p表达水平与早期神经功能恶化及预后的相关性研究

目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA横纹肌肉瘤相关转录物-2(LncRNA RMST)和miR-582-5p的表达水平与早期神经功能恶化(END)及预后的相关性。方法 选取2021年1月~2022年12月期间承德市中心医院收治的129例AIS患者,并根据患者一周内是否出现END将患者分为END组(n=42)和非END组(n=87),另选取同期在该院体检的健康者59例作为健康组。采用qRT-PCR法检测各组血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平。Pearson法对END患者血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平相关性进行分析;绘制ROC曲线评估血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平以及二者联合对AIS患者预后情况的效能分析。结果 健康组、非END组、END组血清LncRNA RMST水平(1.01±0.28,2.10±0.41,3.99±0.52)逐渐升高,miR-582-5p水平(1.02±0.23,0.86±0.16,0.73±0.15)逐渐降低,差异具有统计学意义(F=672.974,31.907,均P <0.05)。END患者血清LncRNA RMST水平与mi R-582-5p水平存在明显的负相关(r=-0.451,P<0.001)。血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平联合诊断AIS患者预后的AUC(95%CI)为0.961(0.912~0.987),优于单独预测(Z=2.280,4.515,均P <0.05)。结论 血清LncRNA RMST,miR-582-5p水平与END关系密切,有望成为AIS患者预后的预测因子。

结直肠癌组织中lncRNA CCAT2和NDRG1的表达及意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者组织中长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录物2(CCAT2)、N-myc下游调节基因(NDRG)1的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年2月至2020年2月在南通市中医院行CRC根治性手术治疗的96例CRC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测组织中lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达,采用免疫组织化学检测组织中NDRG1蛋白表达,采用Kaplan-Meier曲线分析不同lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA表达组患者的预后差异,采用多因素Cox回归分析CRC预后影响因素。结果与癌旁组织比较,癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达及蛋白阳性率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移比较,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的CRC患者癌组织中lncRNA CCAT2表达较高,NDRG1 mRNA表达较低(P<0.05)。lncRNA CCAT2高表达组3年累积生存率低于lncRNA CCAT2低表达组,而NDRG1 mRNA高表达组3年累积生存率高于NDRG1 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移,lncRNA CCAT2、NDRG1 mRNA是CRC预后影响因素(P<0.05)。结论CRC组织中lncRNA CCAT2表达升高,NDRG1表达降低,二者均参与CRC肿瘤的进展,可作为评估CRC患者生存预后的新指标。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨lncRNA CCAT2对糖尿病心肌病的影响

目的:探讨糖尿病心肌病(DCM)患者长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和转录因子7类似物2(TCF7L2)及下游炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)的相关性。方法:选取2022年6月—2023年7月新疆维吾尔自治区人民医院收治的25例DCM早期患者纳入疾病组,同期25例单纯2型糖尿病患者纳入对照组。采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA CCAT2、TCF7L2、β-catenin基因表达水平,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DCM患者血清中IL-6、IL-1β、TNF表达水平。对RT-qPCR及ELISA结果分别进行Pearson相关性分析。结果:RT-qPCR检测结果显示,疾病组CCAT2、TCF7L2、β-catenin基因相对表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CCAT2、TCF7L2、β-catenin两两之间均呈正相关(P<0.05)。ELISA检测结果显示,疾病组IL-6、IL-1β、TNF水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-6、IL-1β、TNF两两之间均呈正相关(P<0.05)。结论:lncRNA CCAT2与DCM早期的发生有关,可能成为DCM早期诊断的分子标志物。

lncRNA SOX2OT在胃癌中的表达及其与预后的关系

目的:通过检测长链非编码RNA SOX2重叠转录本(lncRNA SOX2OT)在胃癌组织中的表达,分析lncRNA SOX2OT与胃癌患者预后的关系。方法:以本院诊治的105例胃癌患者为研究对象,术中收集癌组织及癌旁正常胃黏膜,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中lncRNA SOX2OT表达水平。记录患者临床资料并随访3年,分析lncRNA SOX2OT表达水平与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法及Log rank检验分析胃癌组织lncRNA SOX2OT表达与患者生存率的关系。采用Cox回归模型分析胃癌患者预后的危险因素。结果:胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达水平高于癌旁组织(3.49±0.57 vs.1.16±0.32,P<0.05)。lncRNA SOX2OT表达与年龄、性别、饮酒、肿瘤位置、吸烟无关(P>0.05),与TNM分期、肿瘤直径、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)。生存分析显示,lncRNA SOX2OT低表达组3年生存率比高表达组高(75.51%vs.55.35%,Log rankχ^(2)=4.451,P=0.031)。Cox多因素分析证实,低分化胃癌、Ⅲ~Ⅳ期、lncRNA SOX2OT高表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达上调,可能参与胃癌进展,是影响胃癌预后的危险因素。

肝细胞癌组织中lncRNA-SOX2OT、miR-122-5p表达及与病理参数和预后的关系

目的 分析肝细胞癌(HCC)组织中长链非编码RNA-SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA-SOX2OT)、微小RNA-122-5p(miR-122-5p)的表达及与病理参数和预后的关系。方法 选取2017年9月—2018年12月南京中医药大学附属南京医院/南京市第二医院肿瘤和血管疾病介入一科收治HCC患者112例,采用RT-qPCR检测HCC组织与癌旁组织中lncRNA-SOX2OT、miR-122-5p表达。Pearson相关性分析HCC组织中lncRNA-SOX2OT与miR-122-5p表达的相关性,并分析二者在不同临床/病理参数中的差异,Kaplan-Meier生存曲线分析不同lncRNA-SOX2OT、miR-122-5p表达患者预后情况。结果 HCC组织中lncRNA-SOX2OT表达高于癌旁组织,miR-122-5p表达低于癌旁组织(t=21.258、20.475,P均<0.001)。HCC组织中lncRNA-SOX2OT与miR-122-5p表达呈负相关(r=-0.771,P<0.001)。在Child-Pugh分级B~C级、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期晚期、有淋巴结转移者HCC组织中lncRNA-SOX2OT表达高于Child-Pugh分级A级、BCLC分期极早期~中期、无淋巴结转移者(t/P=2.482/0.015、2.728/0.007、3.408/0.001),而miR-122-5p表达则低于Child-Pugh分级A级、BCLC分期极早期~中期、无淋巴结转移者[t(U)/P=2.514/0.013、2.621/0.009、3.078/0.002]。随访3年,112例HCC患者总生存率为67.86%(76/112)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,lncRNA-SOX2OT高表达组总生存率低于lncRNA-SOX2OT低表达组(χ^(2)=11.176,P<0.001),miR-122-5p高表达组总生存率高于miR-122-5p低表达组(χ^(2)=10.744,P<0.001)。结论 HCC组织中lncRNA-SOX2OT高表达、miR-122-5p低表达,二者与Child-Pugh分级、BCLC分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为HCC预后评估指标。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

LncRNA HAND2-AS1在宫颈癌患者血清中的表达及临床意义

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)心脏和神经嵴衍生物表达转录本2反义序列1(HAND2-AS1)在宫颈癌患者血清中的表达及其临床意义。方法选取2019年1月至2020年6月焦作市妇幼保健院收治的50例宫颈癌患者作为宫颈癌组,并根据中位lncRNA HAND-AS1表达值分为lncRNA HAND-AS1高表达组和lncRNA HAND-AS1低表达组,每组25例;选取同期确诊的50例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组和50例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术和电化学发光法检测各组研究对象血清lncRNA HAND2-AS1表达水平,以及癌抗原125(CA125)和鳞状细胞癌相关抗原(SCC)水平,分析其与患者临床特征和预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA HAND2-AS1、CA125、SCC联合检测对宫颈癌的临床诊断效能。结果宫颈癌组患者血清LncRNA HAND2-AS1表达水平均明显低于CIN组和健康对照组,其表达水平与宫颈癌患者肿瘤长径、宫颈浸润深度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移明显相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1单独诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.861(95%可信区间0.792~0.930),HAND2-AS1、CA125、SCC联合诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.912(95%可信区间0.908~0.952),诊断效能明显高于单指标检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND-AS1高表达组患者3年生存率明显高于lncRNA HAND-AS1低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA HAND2-AS1、CA125、SCC、FIGO分期、淋巴结转移与宫颈癌患者预后相关,差异均有统计学意义(P<0.05);FIGO分期、SCC是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA HAND2-AS1在宫颈癌患者血清中低表达,并与患者肿瘤长径、宫颈浸润深度、FIGO分期、淋巴结转移均明显相关;检测血清lncRNA HAND2-AS1对宫颈癌的诊断及预后评估具有一定价值。

长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1靶向抑制miR-628-5p在高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤中的作用

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向抑制miR-628-5p在高糖诱导的视网膜色素上皮细胞损伤中的作用。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测糖尿病视网膜病变(DR)、2型糖尿病(T2DM)、葡萄膜炎患者血清和房水KCNQ1OT1表达水平。用不同浓度葡萄糖处理人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19),并检测KCNQ1OT1表达情况,选择最佳作用浓度。将ARPE-19细胞分为对照组(CON组)、高糖组(HG组)、HG+抑制物对照(si-NC)组、HG+KCNQ1OT1抑制物(si-KCNQ1OT1)组、HG+模拟物对照(miR-NC)组、HG+miR-628-5p组、HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组、HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-628-5p组。RT-qPCR检测各组细胞KCNQ1OT1、miR-628-5p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测各组细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot检测各组细胞活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1、miR-628-5p靶向关系。结果血清和房水中KCNQ1OT1表达水平:DR患者>T2DM患者>葡萄膜炎患者(均为P<0.05)。ARPE-19细胞中KCNQ1OT1表达水平:0 mmol·L^(-1)葡萄糖组<5 mmol·L^(-1)葡萄糖组<15 mmol·L^(-1)葡萄糖组<30 mmol·L^(-1)葡萄糖组(均为P<0.05),故选择30 mmol·L^(-1)葡萄糖进行实验。与CON组比较,HG组细胞KCNQ1OT1表达水平、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著升高,SOD活性、miR-628-5p显著降低(均为P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-KCNQ1OT1组细胞KCNQ1OT1表达水平、细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著降低,SOD活性显著升高(均为P<0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-628-5P组细胞miR-628-5p、SOD活性均显著升高,细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著降低(均为P<0.05)。与HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组比较,HG+si-KCNQ1OT1+anti-miR-628-5p组细胞miR-628-5p、SOD活性均显著降低,细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达、MDA含量均显著升高(均为P<0.05)。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向抑制miR-628-5p可以减轻高糖诱导的ARPE-19细胞凋亡和氧化损伤。

血清LncRNA-MALAT1、Ang-2与重症急性胰腺炎患者并发急性胃肠损伤的相关性研究

目的探讨血清长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA-MALAT1)、血管生成素-2(Ang-2)与重症急性胰腺炎(SAP)患者并发急性胃肠损伤(AGI)的相关性。方法选取2021年1月—2023年1月苏州大学附属苏州市第九人民医院重症医学科收治的轻症急性胰腺炎(AP)患者78例为轻症AP组、中度AP患者78例为中度AP组、SAP患者145例为SAP组,根据是否并发AGI将SAP患者分为AGI亚组83例和非AGI亚组62例。采用实时荧光定量PCR检测血清LncRNA-MALAT1水平,酶联免疫吸附法检测血清Ang-2水平;多因素Logistic回归分析SAP患者并发AGI的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平对SAP患者并发AGI的预测价值。结果轻症AP组、中度AP组、SAP组血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平依次升高(F/P=659.197/<0.001、682.682/<0.001);145例SAP患者AGI发生率为57.24%(83/145),AGI亚组SAP患者多器官功能障碍综合征(MODS)比例、急性生理和慢性健康评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分、ICU停留时间及血清D-乳酸、LncRNA-MALAT1、Ang-2水平高于非AGI亚组(χ^(2)/t/P=19.273/<0.001、5.052/<0.001、5.308/<0.001、4.085/<0.001、6.864/<0.001、6.824/<0.001);多因素Logistic回归结果示,MODS、APACHEⅡ评分高、D-乳酸高、LncRNA-MALAT1高、Ang-2高为SAP患者并发AGI的独立危险因素[OR(95%CI)=4.496(1.335~15.138)、1.331(1.142~1.551)、1.070(1.020~1.123)、1.101(1.055~1.148)、1.571(1.239~1.994)];血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平及二者联合预测SAP患者并发AGI的AUC分别为0.790、0.785、0.895,二者联合的AUC大于血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平单独预测(Z/P=3.143/0.002、3.650/<0.001)。结论血清LncRNA-MALAT1、Ang-2水平升高与SAP患者并发AGI独立相关,血清LncRNA-MALAT1联合Ang-2水平预测SAP患者并发AGI的价值较高。

急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值

目的探究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke)患者长链非编码核糖核酸性别决定相关基因簇2重叠转录本(long non-coding RNA sex determination related gene cluster 2 overlapping transcript,lncRNA SOX2OT)、微小RNA(microRNA,miR)-331水平对不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。方法选取2020年3月~2021年11月张家口市第二医院神经内科收治的120例急性缺血性脑卒中患者为研究组,另选取同期该院健康体检人员120例作为对照组。根据颈动脉超声检查情况将患者分为无斑块组24例、稳定斑块组40例和不稳定斑块组56例;依据患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分将患者分为轻度神经功能缺损组51例、中度神经功能缺损组47例和重度神经功能缺损组22例;实时荧光定量PCR法检测研究组和对照组血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平;Pearson法分析急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平的相关性;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清lncRNA SOX2OT,miR-331水平对急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清lncRNA SOX2OT水平明显升高(1.86±0.47 vs 1.00±0.03),miR-331水平明显降低(0.51±0.14 vs 1.02±0.04),差异有统计学意义(t=20.004,38.370,均P<0.001);无斑块组、稳定斑块组和不稳定斑块组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.27±0.31,1.78±0.45,2.18±0.56),miR-331水平依次降低(0.74±0.19,0.56±0.16,0.37±0.10),差异均有统计学意义(F=30.671,60.656,均P<0.001);轻度神经功能缺损组、中度神经功能缺损组和重度神经功能缺损组血清lncRNA SOX2OT水平依次升高(1.58±0.41,1.94±0.48,2.35±0.60),miR-331水平依次降低(0.67±0.18,0.46±0.12,0.27±0.07),差异均有统计学意义(F=21.100,65.923,均P<0.001);急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT与miR-331水平呈负相关(r=-0.467,P<0.001);血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.819,0.766和0.921,血清lncRNA SOX2OT和miR-331水平单独及二者联合诊断急性缺血性脑卒中患者重度神经功能缺损的AUC分别为0.716,0.801和0.904,二者联合优于血清lncRNA SOX2OT和miR-331单独诊断(Z=2.211,3.179,2.673,2.081,均P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清lncRNA SOX2OT水平呈高表达,miR-331水平呈低表达,二者可作为评估急性缺血性脑卒中患者不稳定斑块形成和重度神经功能缺损的生物学指标。

长链非编码RNA结肠癌相关转录本2在胃癌血清中的表达及临床意义

目的:检测长链非编码RNA结肠癌相关转录本2(CCAT2)在胃癌患者和正常对照组血清中的差异表达,探讨其对胃癌临床诊断的效能及意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测胃癌和正常对照组血清CCAT2的表达,分析其与胃癌临床病理特征的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线和危险分数分析法评估CCAT2对胃癌的诊断效能,并与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)以及甲胎蛋白(AFP)的诊断效能进行比较。结果:胃癌患者血清中CCAT2的表达量明显高于正常对照组;其表达水平与年龄、性别、肿瘤临床分期、淋巴结转移以及肿瘤远处转移等均不相关,但与肿瘤细胞的分化程度呈负相关。CCAT2诊断胃癌的曲线下面积为0.619,敏感度和特异度分别为78.63%和53.00%,阳性预测值和阴性预测值分别为66.18%和67.95%。与CA19-9、CEA以及CA72-4相比,诊断的敏感度显著增高。结论:CCAT2在胃癌血清中高表达,有可能成为胃癌临床诊断的潜在生物标志物。

干扰长链非编码RNA CCAT2对膀胱癌细胞J82线粒体功能和肿瘤干细胞样特性的影响

目的探讨干扰长链非编码RNA CCAT2(lncRNA CCAT2)对膀胱癌细胞J82线粒体功能、肿瘤干细胞样特性的影响。方法通过构建lncRNA CCAT2短发卡RNA(shRNA)干扰CCAT2表达,RT-PCR验证并选择其中CCAT2表达量最低的J82细胞系用于后续实验。克隆形成检测细胞增殖、流式细胞仪检测线粒体膜电位变化情况,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白水平,显微下观察肿瘤细胞成球情况,流式细胞仪检测各组细胞CD133的表达,Western blot检测OCT4、SOX2、CD44水平。结果三种CCAT2-shRNA J82细胞系中的CCAT2表达量均低于shRNA-NC(P<0.05);CCAT2-shRNA组克隆形成率、c-Myc水平、肿瘤成球直径及成球率、CD133阳性细胞数、OCT4、SOX2、CD44水平低于shRNA-NC组(P<0.05),绿色荧光强度、Bax/Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9水平均高于shRNA-NC组(P<0.05)。结论下调lncRNA CCAT2表达量可以抑制J82细胞生长,可能与影响细胞线粒体功能以及肿瘤干细胞样特性有关。

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的:探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)通过微小RNA(miR)-34c/特异AT序列结合蛋白2(SATB2)轴对脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法:人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S(ARS)染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果:与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高(P<0.05),miR-34c表达水平明显降低(P<0.05)。与Lenti-NC组和sh-NC组比较,Lenti-MALAT1组ADSCs中LncRNA MALAT1表达水平,Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),sh-MALAT1组上述指标明显降低(P<0.01)。与miR-NC+Lenti-NC组比较,miR-34c+Lenti-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显降低(P<0.01),ALP和ARS水平明显降低(P<0.01),miR-34c+Lenti-MALAT1组ADSCs中上述各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高(P<0.01),Lenti-SATB2+miR-34c组上述各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。

老年脓毒症相关性脑病患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达及对临床预后评价

目的分析老年脓毒症相关性脑病(SAE)患者血清外泌体长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(LncNEAT1)、长链非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(LncSOX2OT)的表达及对临床预后意义。方法选择2020年2月—2022年2月就诊于成都中医药大学附属第五人民医院重症医学科的老年SAE患者96例为SAE组,根据28 d内生存状态再分为生存亚组(n=50)和死亡亚组(n=46),以同期诊治的无SAE的脓毒症患者60例为非SAE组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清外泌体中LncNEAT1、LncSOX2OT的表达水平。多因素Logistic回归分析老年SAE患者预后的影响因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT对老年SAE患者预后的诊断价值。结果SAE组血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT的相对表达高于非SAE组(t/P=16.726/<0.001、21.803/<0.001)。死亡亚组SAE患者C反应蛋白、降钙素原、神经元特异性烯醇化酶、APACHEⅡ评分、SOFA评分、LncNEAT1、LncSOX2OT均高于生存亚组(t/P=14.197/<0.001,4.535/<0.001,19.253/<0.001,8.442/<0.001,5.670/<0.001,9.861/<0.001,6.931/<0.001)。SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈正相关(r/P=0.812/<0.001,0.761/<0.001,0.833/<0.001,0.598/<0.001)。降钙素原高、C反应蛋白高、神经元特异性烯醇化酶高、APACHEⅡ评分高、SOFA评分高、LncNEAT1高及LncSOX2OT高是影响SAE患者28 d生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.459(1.195~1.782)、1.464(1.164~1.841)、1.334(1.086~1.639)、1.644(1.223~2.210)、1.779(1.295~2.444)、1.347(1.050~1.728)、1.578(1.122~2.219)]。血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT二者联合预测SAE患者28 d生存预后诊断的AUC为0.914,高于单项指标的0.846、0.834(Z/P=3.864/<0.001、3.915/<0.001)。结论老年SAE患者血清外泌体LncNEAT1、LncSOX2OT表达升高,是影响老年SAE患者预后的独立危险因素,并对老年SAE患者生存预后具有较高的评估价值。

溃疡性结肠炎患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平及与预后相关性研究

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本2(long non-coding RNA myocardial infarction-related transcript 2,LncRNA Mirt2)、长链非编码RNA干扰素γ-反义RNA1(long non-coding RNA interferonγ-antisense RNA 1,LncRNA IFNG-AS1)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清中表达情况及与UC患者预后相关性。方法选择2018年12月~2021年1月南京市浦口区中医院(南京市中医院浦口分院)收治的193例UC患者作为观察对象,其中缓解期85例,活动期108例。根据患者预后情况分为复发组(n=78)和未复发组(n=115),另选取同期190例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平,Pearson法分析UC患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平相关性及LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1与C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相关性;ROC曲线分析血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1对复发UC的诊断价值。结果与对照组比较,缓解期组与活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.92±0.10,0.71±0.08vs 1.07±0.12)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(1.63±0.25,2.27±0.42 vs 1.01±0.14)表达水平及CRP(13.42±4.71mg/L,25.38±6.29 mg/L vs 4.32±1.27 mg/L),IL-6(8.31±2.35pg/ml,16.55±4.52 pg/mlvs 2.87±0.78 pg/ml),TNF-α(15.38±4.29 pg/ml,28.94±6.37 pg/ml vs 8.42±1.63 pg/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=10.064~44.632,均P<0.001);与缓解期组相比,活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平及CRP,IL-6,TNF-α水平升高,差异具有统计学意义(t=12.420~16.844,均P<0.001);与轻度组比较,中、重度组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.69±0.08,0.58±0.05 vs 0.81±0.06)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(2.25±0.48,2.83±0.25 vs 1.90±0.31)表达水平升高,差异有统计意义(t=3.890~17.225,均P<0.001);与中度组比较,重度组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,差异具有统计学意义(t=6.184,5.957,均P<0.001)。相关性分析显示,UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈负相关(r=-0.623,-0.605,-0.571,均P<0.001),LncRNA IFNG-AS1表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈正相关(r=0.457,0.531,0.497,均P<0.001)。与未复发组比较,复发组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.70±0.08 vs 0.87±0.11)表达水平显著降低,LncRNA IFNG-AS1(2.38±0.41 vs 1.72±0.28)表达水平显著升高(t=11.706,13.294,均P<0.001);血清LncRNA Mirt2,LncRNA IFNG-AS1联合诊断复发UC的曲线下面积为0.931(95%CI:0.886~0.963),敏感度和特异度分别为87.18%,86.96%;阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为81.93%,90.91%和87.05%。结论UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低、LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,与炎症水平和患者预后有关,可作为反映UC患者病情与预后的标志物。

lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响。方法标本取自2016年1月至2018年12月南通市中医院收治的55例结肠癌门诊患者。通过体外实验研究,采集结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116和正常结肠上皮细胞系NCM460,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定lncRNA-CCAT2的表达情况。取lncRNA-CCAT2在结肠癌中相对表达量最高的细胞系,将其分为空白对照组(磷酸盐吐温缓冲液)、阴性对照组(经Lipofectamine TM 2000转染NC-siRNA序列)、CCAT2-siRNA组(经Lipofectamine TM 2000转染CCAT2-siRNA序列)。采用MTT实验检测三组细胞增殖能力,用流式细胞术检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞凋亡能力。通过蛋白印迹法检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、裂解型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及p53蛋白的表达水平。结果相比正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116中lncRNA-CCAT2相对表达量均明显上调(P<0.05),其中SW620的表达量最高。经MTT实验显示,转染后0、1、2 d,CCAT2-siRNA组与阴性对照组、空白对照组于490 nm波长处的吸光度值(OD 490 nm)比较,均无显著差异(P>0.05);转染后3、4 d,CCAT2-siRNA组OD 490 nm较阴性对照组、空白对照组明显下降(P<0.01);阴性对照组与空白对照组不同时间点OD 490 nm值的比较,均无显著差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示,相比阴性对照组,CCAT2-siRNA组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。CCAT2-siRNA组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,裂解型PARP和p53蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.01)。结论lncRNA-CCAT2高表达于结肠癌细胞系,而通过敲低lncRNA-CCAT2的表达可起到阻滞结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且其作用机制与Bcl-2蛋白表达降低、裂解型PARP和p53蛋白表达升高可能存在密切关系。

LncRNA HAGLR激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体对胫骨骨折愈合的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)HAGLR对胫骨骨折(TF)小鼠的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达和骨折愈合的影响并探讨机制。方法体外对成骨细胞MC3T3-E1沉默HAGLR,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,qPCR法检测骨碱性磷酸酶(BALP)和骨钙素的表达。Western blot法检测RUNX2、磷酸化RUNX2(p-RUNX2)以及NLRP3、半胱天冬酶1(Caspase1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。通过小鼠TF手术建立TF小鼠模型,在模型小鼠体内过表达HAGLR,并在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2或加入炎症小体抑制剂MCC950。qPCR法检测HAGLR和RUNX2的表达,Western blot法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达。microCT测量小鼠骨痂体积(MBV),称量小鼠的全长胫骨湿重。结果沉默HAGLR导致MC3T3-E1细胞活力降低且凋亡率增加(P<0.05),且RUNX2、p-RUNX2、BALP和骨钙素表达量均降低(P<0.05),NLRP3、Caspase1、ASC、IL-1β的表达量都增加(P<0.05)。与健康组织比较,TF小鼠体内HAGLR和RUNX2表达量降低(P<0.05)。过表达HAGLR促进TF小鼠体内的HAGLR和RUNX2表达,并增加MBV和全长胫骨湿重以及IGF-1的表达量(P<0.05)。在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2导致TF小鼠的MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达量都降低(P<0.05)。而在过表达HAGLR的基础上加入NLRP3炎症小体抑制剂MCC950导致MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达又增加(P<0.05)。结论LncRNA HAGLR通过激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体促进TF的愈合。

人lncRNA-GACAT2过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2(GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响,阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列,克隆至pc3.1(+)真核表达载体,采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞,采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞,分为空载体组(转染pc3.1空载体)和pc3.1-GACAT2组(转染pc3.1-GACAT2重组质粒)。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平,CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果:成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较,pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.05或P<0.01),细胞克隆形成数明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞成球数明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:过表达人lncRNA GACAT2基因能抑制肺癌A549和H1299细胞的增殖能力和细胞干性。

lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤(LP)细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法培养人喉乳头状瘤细胞Hs840.T,将正常人口腔上皮细胞(HOECs)作为对照。将Hs840.T分为lncRNA NEAT1过表达载体(pcDNA-NEAT1)组、pcDNA-NEAT1阴性对照(pcDNA-NC)组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体(siNEAT1)组、siNEAT1的阴性对照(siNC)组、miR-let-7a的模拟物(mimic)组、mimic阴性对照(mimic-NC)组、miR-let-7a抑制剂(inhibitor)组、inhibitor阴性对照(inhibitor-NC)组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体(siBZW2)组、siBZW2的阴性对照(siBZW2-NC)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC)组。qRT-PCR检测各组中lncRNA NEAT1及其预测靶分子miR-let-7a的表达。Western blot和qRT-PCR检测BZW2的表达。双荧光素酶报告基因实验检测Hs840.T中lncRNA NEAT1和miR-let-7a以及miR-let-7a和BZW2的靶向关系。MTT实验测定Hs840.T的增殖能力。Annexin V-FITC/PI双染法检测Hs840.T的凋亡逃逸能力。结果Hs840.T中的lncRNA NEAT1和BZW2表达高于HOECs(P<0.05),而miR-let-7a表达低于HOECs(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,Hs840.T中lncRNA NEAT1吸附抑制miR-let-7a并上调BZW2的表达(P<0.05),且BZW2是miR-let-7a的靶基因。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-NEAT1组Hs840.T的增殖率增加(P<0.05),早期、晚期凋亡率均降低(P<0.05);与siNC组相比,siNEAT1组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增加(P<0.05)。另外,与pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC组相比,pcDNA-NEAT1+siBZW2组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进LP细胞的增殖和凋亡逃逸。