LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

lncRNA锌指蛋白反义链1对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在肝纤维化(LF)中的作用。方法 四氯化碳(CCl4)诱导小鼠LF模型。苏木精-伊红染色(H-E染色)和天狼猩红染色观察肝脏组织学改变,ELISA检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组织化学(IHC)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(Col1α1)的表达,荧光定量PCR检测肝组织ZFAS1的表达水平,通过siRNA技术在NCTC1469细胞中沉默ZFAS1表达并模拟小鼠肝细胞的纤维化模型,免疫印迹法(Western-blot)检测细胞Col1α1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达变化。结果 与对照组比较,CCl4诱导模型组小鼠肝组织内炎性细胞浸润明显,胶原纤维沉积明显增多,肝星状细胞(HSCs)活化增多(P<0.05),肝组织胶原分泌及其代谢产物HYP表达上调,肝组织内lncRNA ZFAS1表达明显升高(P<0.05)。与AML12细胞比较,NCTC1469细胞高表达内源性lncRNA ZFAS1(P<0.05);在NCTC1469细胞转染3种siZFAS1片段均可有效抑制ZFAS1表达(P<0.05),以siRNA-539下降最明显。采用TGF-β1处理NCTC1469细胞构建LF模型,Western-blot结果显示,与对照组比较,模型组的Col1α1、TGF-β1和MMP-2表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,ZFAS1干扰+模型组的Col1α1、TGF-β1和MMP-2表达明显下降(P<0.05)。结论 干扰lncRNA ZFAS1对LF可能具有治疗作用。

CA724、miR-183、lncRNA ZFAS1在结肠癌患者血清中的表达及意义

目的分析糖蛋白抗原724(CA724)、微小RNA-183(miR183)、长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在结肠癌患者血清中的表达与意义。方法将103例结肠癌患者纳入观察组,同期体检的95例健康体检者纳入对照组。采集2组血液检测对比CA724、miR183、lncRNA ZFAS1差异;同时收集患者的年龄、性别等资料,分析CA724、miR183、lncRNA ZFAS1表达与患者临床病理特征之间的关系。结果观察组血清CA724[(26.79±3.36)U/ml]、miR183相对表达量[(2.57±0.46)]、lncRNA ZFAS1相对表达量[(3.75±0.84)]均高于对照组[(5.20±1.05)U/ml、(1.05±0.21)、(1.23±0.39)],差异有统计学意义(P<0.05)。CA724、miR183、lncRNA ZFAS1表达与结肠癌患者的年龄、性别、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关,与患者的临床分期、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.05)。结论CA724、miR183、lncRNA ZFAS1在结肠癌患者血清内呈高表达,其表达与患者临床分期、淋巴结转移、分化程度联系紧密,可能参与肿瘤的病情发展,临床需予以高度重视。

上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2信号轴促进宫颈癌细胞的机制

目的探讨LncRNA FEZF1-AS1对宫颈癌细胞增殖、侵袭及上皮间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法实时荧光定量PCR分析宫颈癌组织、癌旁正常组织、Hela、H8细胞中LncRNA FEZF1-AS1、miR-363-3p和Sphk2的表达;siRNA FEZF1-AS1转染Hela细胞,MTT、细胞侵袭实验及Western blot检测下调FEZF1-AS1对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miRanda软件分析LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测二者的相关性。下调miR-363-3p表达,分析Hela细胞增殖、侵袭和EMT。同时上调LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p表达,检测LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan分析miR-363-3p和Sphk2之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和Sphk2相关性。siRNA Sphk2转染Hela细胞,检测Hela细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果与H8细胞相比,Hela细胞中LncRNA FEZF1-AS1、Sphk2表达上调(P<0.01),miR-363-3p表达下调(P<0.01)。下调LncRNA FEZF1-AS1表达明显抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT;LncRNA FEZF1-AS1靶向miR-363-3p;下调miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT。miR-363-3p与Sphk2具有靶向关系。下调Sphk2表达抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT。结论上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2轴促进Hela细胞增殖、侵袭及其EMT。

lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(FEZF1-AS1)和胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在肝癌组织中的表达及临床意义。方法:收集行手术治疗的60例原发性肝癌病人的肝癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织、癌旁组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测肝癌组织、癌旁组织中IGF2BP1蛋白表达水平;分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达与肝癌病人生存率的关系;Pearson分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平相关性。结果:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01);肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.602,P<0.01);不同年龄、性别、肿瘤大小、有无肝硬化、乙肝抗原阴阳性水平间lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达差异无统计学意义(P>0.05),临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低中分化程度和有淋巴结转移的病人lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1表达水平较高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNA FEZF1-AS1高表达组病人3年累积生存率显著低于lncRNA FEZF1-AS1低表达组(31.45%vs 61.40%,P<0.01),IGF2BP1阳性表达组病人3年累积生存率显著低于IGF2BP1阴性表达组(31.18%vs 58.25%,P<0.01)。结论:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1高表达,且二者表达与肝癌病人病理特征和预后有关,可能作为肝癌病人潜在的预后标志物。

长链非编码RNA ZFAS1和SNHG5在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响分析

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)锌指蛋白反义链1(zinc?nger antisense 1,ZFAS1和核仁小RNA宿主基因5(small nucleolar RNA host gene 5,SNHG5)在鼻咽癌组织中的表达及对预后的影响。方法选择2013年6月至2015年6月本院收治的109例鼻咽癌患者为研究对象,所有患者均行鼻咽活检且经病理检查证实为鼻咽癌。采用实时定量PCR和荧光定量PCR检测并比较鼻咽癌组织、癌旁组织以及不同临床病理特征、不同预后患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量。结果鼻咽癌组织中ZFAS1的相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.05),而SNHG5的相对表达量显著低于癌旁组织(P <0.05)。不同性别、年龄患者ZFAS1和SNHG5的相对表达量比较均无显著差异(P_均> 0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者ZFAS1的相对表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者ZFAS1的相对表达量显著高于无淋巴结转移患者(P <0.05);TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者SNHG5的相对表达量显著低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P <0.05),有淋巴结转移患者SNHG5的相对表达量显著低于无淋巴结转移患者(P <0.05)。107例患者完成随访,随访率为98.17%。随访3年,死亡19例,存活90例。死亡患者ZFAS1的相对表达量显著高于存活患者(P <0.05),且SNHG5的相对表达量显著低于存活患者(P <0.05)。结论在鼻咽癌组织中,lncRNA ZFAS1表达上调,且预后越差,其表达水平越高;lncRNA SNHG5表达下调,且预后越差,其表达水平越低。lncRNA ZFAS1和SNHG5在评估鼻咽癌预后方面具有重要的研究意义。

长链非编码RNA ZFAS1在胃癌患者血清中的表达及临床意义

目的:建立基于实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测血清长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)zinc finger antisense 1(ZFAS1)的方法,应用该技术检测胃癌(gastric cancer,GC)患者、胃良性病变患者及健康体检者血清ZFAS1相对表达水平,探讨血清ZFAS1对GC辅助诊断的应用价值。方法:随机采集南通大学附属医院经病理确诊的94例GC患者(其中包括初诊患者54例,术后患者35例和复发/转移5例)、20例胃良性病变患者的血清标本,同期匹配47例年龄相仿的健康体检者血清标本进行对比分析。通过qRT-PCR检测血清ZFAS1的相对表达水平,并评价其线性、重复性及特异性;分析血清ZFAS1表达与GC患者临床病理参数的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评价血清ZFAS1、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及糖类抗原19-9(carbohydrate antigen19-9,CA19-9)单独及联合检测对GC的诊断价值。结果:检测血清ZFAS1含量的qRT-PCR方法线性良好,重复性较好,特异性较高,熔解曲线单峰特异。GC初诊患者血清ZFAS1的表达水平显著高于良性病变组、正常对照组(P<0.001);GC患者术后血清ZFAS1显著低于术前(P<0.01);GC初诊患者血清ZFAS1含量与患者肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05);ROC曲线分析显示,ZFAS1、CEA、CA19-9单独作为诊断指标时,ROC曲线下面积分别为0.8164、0.6588、0.5563,三者联合诊断可提高诊断灵敏度。结论:血清ZFAS1在GC辅助诊断及术后病程监测中发挥作用。

上皮性卵巢癌组织锌指蛋白反义链1和Notch1表达对患者预后的评估价值

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)、Notch1的表达水平对患者预后的评估价值。方法选取本院2018年1月~2020年1月收治的96例EOC患者为EOC组,将同期卵巢良性肿瘤患者96例作为对照组。使用实时荧光定量PCR法测定所有研究者卵巢组织中ZFAS1、Notch1的表达水平;ROC曲线评估ZFAS1、Notch1诊断EOC的价值,并分析ZFAS1、Notch1表达与EOC患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-Meier法绘制EOC患者生存曲线;使用多因素Cox回归分析EOC患者预后的影响因素。结果EOC组组织中ZFAS1、Notch1表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ZFAS1单独诊断EOC曲线下面积为0.861(95%CI:0.803~0.919),截断值为1.59,灵敏度为77.1%,特异度为69.8%;Notch1单独诊断EOC的曲线下面积为0.913(95%CI:0.870~0.955),截断值为1.54,灵敏度为79.2%,特异度为76.1%;ZFAS1表达与EOC患者的FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移、病理分级有关(P<0.05);Notch1表达与EOC患者的FIGO分期、淋巴结转移、病理分级有关(P<0.05);ZFAS1高表达患者(ZFAS1≥1.59)的3年累积生存率低于低表达患者(ZFAS1<1.59),Notch1高表达患者(Notch1≥1.54)的3年累积生存率低于低表达患者(Notch1<1.54),差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Cox回归模型分析表明,FIGO分期、淋巴结转移、ZFAS1、Notch1是影响EOC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论EOC患者癌组织中ZFAS1、Notch1表达水平升高,且ZFAS1、Notch1高表达的EOC患者生存期短,两者有望成为预测EOC预后的有效生物学标志物。

LncRNA ZFAS1靶向miR-373导致肝癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)锌指结构反义转录本1(ZFAS1)靶向微小RNA(miR)-373导致肝癌细胞顺铂(DDP)耐药的机制。方法HepG2细胞设正常培养组、si-NC组、si-ZFAS1组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中ZFAS1、miR-373表达水平。在si-NC组、si-ZFAS1组基础上分别添加0、50、100、200、300μmol/L DDP处理细胞12 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞侵袭情况,蛋白免疫印迹检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。双荧光素酶验证ZFAS1与miR-373的靶向关系。在si-ZFAS1组基础上添加inhibitor miR-373,检测细胞中MMP2、MMP9蛋白表达水平。结果si-ZFAS1组细胞中ZFAS1表达水平均低于正常培养组和si-NC组,miR-373表达水平均高于正常培养组和si-NC组(P<0.05)。si-NC组和si-ZFAS1组经不同浓度顺铂处理后细胞增殖率、侵袭数量、侵袭蛋白MMP2、MMP9表达水平基本呈降低趋势;si-ZFAS1组上述指标分别低于其对应浓度的si-NC组(P<0.05)。Starbase分析发现,miR-373与ZFAS1存在互补的结合位点并经双荧光素酶验证。si-ZFAS1+inhibitor miR-373组细胞MMP2、MMP9蛋白表达水平高于si-ZFAS1组和si-ZFAS1+inhibitor NC组(P<0.05)。结论ZFAS1可能降低肝癌细胞DDP耐药,其机制可能与调控miR-373有关。

lncRNA ZFAS1通过miR-588/HMGA2轴促进肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(lncRNA ZFAS1)调控miR-588/高迁移率蛋白A2(HMGA2)轴对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法:qPCR、WB法检测80例肝癌组织及对应癌旁组织(2018年1月至2019年12月在武汉第三医院首义院区手术切除标本)及人正常肝LO2细胞和肝癌HepG2、Huh7、HCCLM3细胞中ZFAS1、miR-588及HMGA2表达水平;采用Kaplan-Meier进行患者生存曲线分析。将HepG2细胞分为空白组、si-NC组、si-ZFAS1组、si-ZFAS1+inhibitor NC组、si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组;qPCR检测各组HepG2细胞中ZFAS1、miR-588表达水平,WB法检测各组HepG2细胞中HMGA2蛋白表达;CCK-8法、Transwell和划痕实验分别检测各组HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验分别验证ZFAS1和miR-588、miR-588和HMGA2的靶向关系。用HepG2细胞移植瘤裸鼠模型检测敲减ZFAS1或/和miR-588对移植瘤生长的影响。结果:在肝癌组织和肝癌细胞中,ZFAS1、HMGA2呈高表达,miR-588呈低表达(均P<0.05);ZFAS1低表达患者2年生存率高于高表达组(P<0.05);与空白组比较,si-ZFAS1组ZFAS1、HMGA2表达水平显著降低,miR-588表达水平显著升高(均P<0.05)。与si-ZFAS1组比较,si-ZFAS1+miR-588 inhibitor组中ZFAS1表达水平无显著变化(P>0.05),HMGA2表达水平显著升高、miR-588表达水平显著降低(P<0.05);敲减ZFAS1可抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并抑制裸鼠体内移植瘤的生长(均P<0.05);ZFAS1靶向miR-588并抑制后者的表达,miR-588靶向HMGA2并抑制后者的表达;同时抑制ZFAS1和miR-588表达可逆转敲减ZFAS1对HepG2细胞增殖、侵袭与迁移能力及体内移植瘤生长的抑制作用(均P<0.05)。结论:敲减ZFAS1可通过促进miR-588表达来下调HMGA2表达,进而抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭与迁移能力。

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。

上皮性卵巢癌组织lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达与患者术后5年内生存的关系

目的 探究上皮性卵巢癌(EOC)组织长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(lncRNA ZFAS1)、Notch1信使RNA(mRNA)表达水平与患者术后5年内生存的关系。方法 选取2015年3月至2018年7月在邯郸市人民医院接受手术治疗的96例EOC患者(EOC组),术中收集EOC组织和癌旁正常卵巢组织。实时荧光定量PCR法测定组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平,对EOC患者术后随访5年,记录生存情况。比较癌旁正常卵巢组织和EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平;比较生存组和死亡组临床病理特征及EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平;分析EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平的相关性及其与临床病理特征和患者术后5年生存的关系、影响EOC患者术后5年内生存的危险因素、EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平对EOC患者术后5年内生存的预测效能。结果 与癌旁正常卵巢组织比较,EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平升高(P<0.05);EOC组织中lncRNA ZFAS1和Notch1 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05),两者表达水平与年龄、是否绝经、病理类型、肿瘤大小无关(P>0.05),与FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05);lncRNA ZFAS1高表达组、Notch1 mRNA高表达组5年总生存率分别低于lncRNA ZFAS1低表达组、Notch1 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组年龄、是否绝经、病理类型、肿瘤大小差异无统计学意义(P>0.05),FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度差异有统计学意义(P<0.05);与生存组比较,死亡组EOC组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA表达水平升高(P<0.05);FIGO分期Ⅲ~IV期、有淋巴结转移、肿瘤低分化、lncRNA ZFAS1高表达、Notch1 mRNA高表达均是影响EOC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05);lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA、二者联合预测EOC患者术后5年内生存的曲线下面积(AUC)分别为0.861、0.913、0.965;二者联合预测的AUC显著大于两项指标单独预测(P<0.05)。结论 EOC患者癌组织中lncRNA ZFAS1、Notch1 mRNA呈高表达,二者表达与EOC患者术后5年内生存相关,对术后5年内生存有较高预测效能。

敲减FEZF1-AS1通过阻断JAK2/STAT3通路抑制食管鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义核糖核酸1(FEZF1-AS1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭、迁移以及与Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系。方法用实时定量PCR检测ESCC的癌组织和ESCC细胞系中FEZF1-AS1的表达;构建敲减FEZF1-AS1的慢病毒表达载体,敲减KYSE150、KYSE510细胞的FEZF1-AS1后,流式细胞术检测细胞周期的变化,集落形成实验检测细胞增殖能力,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,TranswellTM迁移和划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测JAK2和磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果在ESCC的癌组织FEZF1-AS1高表达;与正常食管鳞状上皮细胞相比,KYSE150、KYSE510细胞FEZF1-AS1表达高;敲减FEZF1-AS1表达后,ESCC癌细胞的细胞周期和增殖无明显变化,但明显抑制细胞的侵袭和迁移,且JAK2蛋白水平降低,p-STAT3蛋白水平增加。结论敲减FEZF1-AS1阻断JAK2/STAT3通路抑制ESCC细胞的侵袭和迁移。

长链非编码RNA锌指蛋白反义链1靶向微小RNA-512-3p抑制肾癌细胞侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(lncRNAZFAS)靶向调控微小RNA-512-3p(miR-512-3p)表达及对透明细胞肾细胞癌(ccRCC)侵袭和迁移的影响。方法收集2019年2月至2020年4月我院泌尿外科接受肾癌根治术的ccRCC患者30例,获取肾癌及癌旁组织标本。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测30个ccRCC癌肿组织和30个邻近非肿瘤正常组织中lncRNAZFAS和miR-512-3p和可能靶向miRNAs的表达水平。分别通过细胞计数盒(CCK-8)测定、细胞克隆试验、Transwell迁移和侵袭测定测定敲低lncRNAZFAS1对细胞增殖、细胞克隆、迁移和侵袭的影响。lncRNAZFAS1和miR-512-3p的相关性通过生物信息学软件RAIDv2.0和AnnoLnc预测进行分析。lncRNAZFAS1和miR-512-3p之间的相互作用通过荧光素酶报告基因检测验证。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果RT-qPCR结果显示lncRNAZFAS1在ccRCC癌肿组织表达显著高于邻近非肿瘤组织(1.96±0.17比1.00±0.01,t=2.691,P<0.01),miR-512-3p在ccRCC癌肿组织表达显著低于邻近非肿瘤组织(0.67±0.06比1.00±0.01,t=1.319,P<0.05)。CCK-8结果显示,si-lncRNAZFAS1组细胞活性均低于空白组及si-NC组(0.43±0.09比0.96±0.08比0.98±0.05,F=3.759,P<0.05);细胞克隆试验结果显示,si-lncRNAZFAS1组肾癌细胞的克隆形成数显著低于空白组及si-NC组(52.4±8.2比100.2±5.4比99.6±4.3,F=7.924,P<0.05);Transwell侵袭和迁移结果显示,si-lncRNAZFAS1组穿越细胞数低于空白组及si-NC组(132.2±11.4比179.6±16.8比175.2±19.8,F=3.817,P<0.05),差异有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验证实miR-512-3p被确定为ZFAS1的靶标。结论lncRNAZFAS1靶向miR-512-3p抑制ccRCC的生长和转移,lncRNA ZFAS1可能成为ccRCC的新治疗靶点。

H446和H1688细胞系中ZFAS1的表达研究

目的通过比较ZFAS1在H446,H1688两种小细胞肺癌细胞系和A549非小细胞肺癌细胞系中的表达情况,初步探讨ZFAS1与小细胞肺癌发病的关系,为小细胞肺癌的诊断和治疗提供新的思路。方法以小细胞肺癌细胞系H446和H1688为实验组,非小细胞肺癌细胞系A549为对照组。选择最适宜条件,培养H446,H1688和A549细胞系,应用实时荧光定量PCR方法分别检测H446,H1688和A549细胞系中ZFAS1和β-actin的表达情况。结果ZFAS1的相对表达量,在H446和H1688细胞系中,明显高于A549细胞系,具有统计学意义;此外,H446细胞系中ZFAS1的相对表达量,显著高于H1688细胞系,也具有统计学意义。结论实时荧光定量PCR检测发现,ZFAS1在H446和H1688两种小细胞肺癌细胞系中的表达存在差异,提示不同来源的小细胞肺癌细胞系,其生物学特征不完全一致。更为重要的是,ZFAS1的相对表达量,在小细胞肺癌细胞系中也存在高表达现象,提示ZFAS1可能同样参与了小细胞肺癌的侵袭和转移,为探讨ZFAS1在小细胞肺癌发病过程中的作用提供了参考依据。

长链非编码RNA锌指蛋白667反义RNA1通过下调微小RNA-296表达抑制胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白667反义RNA1(ZNF667-AS1)下调微小RNA(miRNA,miR)-296对胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移的影响。方法:双荧光素酶鉴定ZNF667-AS1与miR-296的靶向关系。实验分为对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1+阴性对照组、sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组。空载体质粒组转染pEGFPN1空载体,sh-ZNF667-AS1组转染pEGFPN1-sh-ZNF667-AS1,质粒转染成功后,在sh-ZNF667-AS1组基础上,sh-ZNF667-AS1+阴性对照组转染miR-296 mimic NC,sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组转染miR-296 mimic。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZNF667-AS1、miR-296水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭和迁移;蛋白质免疫印迹实验检测细胞中迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白水平。多组间比较行单因素方差分析,进一步两两比较行SNK-q法。结果:生物信息学软件(Starbase)分析显示ZNF667-AS1序列上存在miR-296潜在结合位点,且经荧光素酶实验验证,miR-296与ZNF667-AS1呈正相关(P<0.05)。0 h各组细胞吸光度(A450)值差异无统计学意义(F=1.071,P>0.05),12、24、36、48 h各组细胞A450值比较,差异有统计学意义(F=17.238、93.997、48.271、60.646,P<0.05)。细胞处理48 h,对照组、空载体质粒组、sh-ZNF667-AS1组、sh-ZNF667-AS1+阴性对照组、sh-ZNF667-AS1+miR-296 mimic组中ZNF667-AS1水平分别为1.01±0.12、0.98±0.14、0.44±0.09、0.46±0.07、0.76±0.12;miR-296水平分别为1.01±0.14、1.02±0.13、0.39±0.06、0.42±0.05、0.72±0.09;侵袭细胞数量分别为(83.25±6.05)、(84.37±8.76)、(39.49±4.15)、(42.15±7.42)、(63.18±7.13)个;迁移细胞数量分别为(126.60±8.79)、(124.49±9.12)、(76.16±6.48)、(79.44±12.15)、(118.18±6.86)个,且差异有统计学意义(F=36.498、55.130、58.771、47.314,P<0.05)。结论:降低ZNF667-AS1表达可下调miR-296表达抑制胶质瘤细胞U87MG侵袭、转移,而过表达miR-296可逆转上述过程。

长链非编码RNAFEZ家族锌指1反义RNA1在人胃癌组织的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA FEZ家族锌指1反义RNA1（FEZF1-AS1）在人胃癌组织中表达及临床意义。方法收集39例胃癌及其配对正常胃黏膜组织，采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测组织中FEZF1-AS1表达水平，分析其表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、血管浸润、神经浸润、肝转移数目及肝转移发生时间等临床病理因素关系，并作统计学处理。结果在39例胃癌组织中FEZF1-AS1阳性率为93.08% （36/39），而正常胃组织FEZF1-AS1阳性率为2.56% （1/39），χ2=62.986，P=0.040，差异有统计学意义。FEZF1-AS1表达量与患者性别（χ2=1.224，P=0.345）、年龄（χ2=2.377，P=0.395）、肿瘤位置（χ2=3.029，P=0.405）、组织分化程度（χ2=0.883，P=0.557）、神经浸润（χ2=0.522，P=0.470）无明显相关相关，但与原发灶直径（χ2=4.672，P=0.031）、肿瘤浸润深度（χ2=9.120，P=0.010）、淋巴结转移（χ2=8.176，P=0.014）、血管浸润（χ2=14.857，P=0.004）、肝转移数目（χ2=12.594，P=0.006）、术后肝转移发生时间早晚（χ2=7.419，P=0.038）均显著相关。结论FEZF1-AS1可能是胃癌异时性肝转移重要靶点之一。