缺血缺氧脑瘫大鼠的时效研究

目的:基于缺血缺氧脑瘫大鼠神经功能评分(Zea-Longa评分)、脑组织肉眼观和大脑海马区胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平变化,探讨缺血缺氧模型脑瘫大鼠的有效时长。方法:选取3周龄斯泼累格·多雷(SD)健康大鼠,随机分为正常组和模型组,采用改良的Rice-Vannucci方法建立脑瘫模型,造模后第1、7、14、21天,观察各组大鼠的一般情况并进行神经功能评分,在第7、14、21天分批处死大鼠并取脑组织,观察各组大鼠左侧脑组织,检测海马区Caspase-9、Caspase-3的表达水平。结果:一般情况:造模后第1天,与正常组比较,模型组大鼠左侧瞳孔缩小、姿势异常、自发或夹尾左旋、自主活动减少、兴奋性降低、肌肉颤动、头颤,抽搐,抓取时抵抗反应明显,随着时间延长,以上异常行为逐渐消失,造模后21 d基本消失不见,但左侧瞳孔一直小于对侧;Zea-Longa评分:与正常组比较,模型组造模后7、14 d Zea-Longa评分较高,差异有统计学意义(P<0.05);脑组织肉眼观:与正常组比较,模型组造模后7、14及21 d大鼠左侧脑组织有不同程度的萎缩和坏死;免疫组化结果:与正常组比较,模型组造模后7 d、14 d Caspase-9、Caspase-3的表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:3周龄缺血缺氧脑瘫模型大鼠的有效时长为14~21 d,可干预14 d。

白术内酯Ⅲ减轻脑梗死模型大鼠神经功能损伤

目的探究白术内酯Ⅲ(AMLⅢ)对脑梗死大鼠神经功能损伤的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model,改良Longa线栓法制备大鼠脑梗死模型)、白术内酯Ⅲ低和高剂量组(AMLⅢ-L、AMLⅢ-H)、白术内酯Ⅲ高剂量+EX527(SIRT1抑制剂)组(AMLⅢ-H-EX527)。Zea-Longa评分法评估神经功能,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)水平;试剂盒检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察海马组织病理,TTC染色法检测脑梗死面积,TUNEL染色法检测脑细胞凋亡率;Western blot检测脑组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、SIRT1、Nrf2蛋白表达。结果白术内酯Ⅲ干预后可减轻大鼠海马神经组织损伤,降低神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、凋亡率、脑梗死面积、MDA水平、Bax蛋白表达,提高SOD和CAT活性、SIRT1、Nrf2、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);EX527可减轻白术内酯Ⅲ对脑梗死大鼠神经功能的保护作用。结论白术内酯Ⅲ可减轻脑梗死模型大鼠的神经功能损伤。

Zea-longa评分与改良Garcia评分应用于针刺治疗CIRI大鼠神经功能缺损评估的研究

目的比较Zea-longa评分与改良Garcia评分用于针刺治疗脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的神经功能缺损评估的稳定性、准确性。方法将60只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组20只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,2 h后,将线栓拔出1 cm左右,建立CIRI模型。针刺组针刺“大椎”“百会”“水沟”,每12 h进行1次,共治疗7次。72 h后,分别采用Zea-longa评分与改良Garcia评分进行评价,每组选取10只大鼠行TTC染色,并测定脑梗死面积;分别分析和比较Zea-longa评分和改良Garcia评分与脑梗死面积的相关性。结果CIRI术后,大鼠均表现有一定程度神经功能的缺损症状,脑组织TTC染色可见脑梗死病灶。针刺治疗能显著减少脑梗死面积(P<0.05),并改善神经功能(P<0.05,P<0.01)。相关性分析发现,改良Garcia评分与脑梗死面积的r值为-0.647(P<0.01),而Zea-longa评分与脑梗死面积的r值为0.575(P<0.01);针刺与改良Garcia评分及脑梗死面积三者相关性分析r值为-0.522(P<0.05);而针刺与Zea-longa评分及脑梗死面积r值为0.495(P<0.05)。结论改良Garcia评分与Zea-longa评分均可用于CIRI评价研究及针刺疗效评估。在对CIRI大鼠进行感觉功能相关研究时可优先采用改良Garcia评分,偏向运动功能评估时可考虑与Zea-longa评分联合使用,能够比较全面地反映模型大鼠神经功能损伤的严重程度和治疗后的神经功能的恢复程度。

栀子提取物对局灶性脑缺血损伤模型大鼠凝血功能及脑血管内皮功能的影响

目的:观察栀子提取物(GE)对局灶性脑缺血损伤模型大鼠凝血功能及脑血管内皮功能的影响。方法:采集新鲜干燥栀子,制备GE。将48只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(model组)、GE高剂量组(GE-H组)、GE低剂量组(GE-L组),每组12只。构建大鼠局灶性脑缺血损伤模型,术后采用Longa神经学评分对符合局灶性脑缺血损伤标准大鼠进行实验。采用Longa神经学评分标准比较用药前后神经功能改善情况;采用断尾法及玻片法检测大鼠凝血时间(CT)和出血时间(BT);凝血酶活性荧光检测凝血酶时间(TT)及凝血酶含量,观察大鼠凝血因子Ⅹa含量,判断大鼠凝血功能变化情况;检测大鼠大脑动脉环(Willis)一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管壁血栓素A_(2)(TXA_(2))、血浆前列环素I_(2)(PGI_(2))、内皮组织纤维溶酶原激活物(t-PAT)及其抑制剂(PAI)活性,判断大鼠脑血管内皮功能变化情况;苏木精-伊红(HE)染色法检测各组大鼠脑部损伤情况。结果:sham组大鼠脑组织正常,与sham组比较,model组CT、BT、TT缩短,t-PAT、PGI_(2)、NO、eNOS降低,凝血酶生成及内源性、外源性凝血因子Ⅹa生成、PAI、TXA_(2)升高(P<0.05),且大鼠脑组织出现局灶性脑缺血损伤。与model组比较,GE-H组和GE-L组CT、BT、TT延长,t-PAT、PGI_(2)、NO、eNOS升高,凝血酶生成及内源性、外源性凝血因子Ⅹa生成、PAI、TXA_(2)降低(P<0.05),脑组织损伤情况较model组明显好转。与sham组比较,model组治疗后Longa神经学评分升高;与model组比较,GE-H组和GE-L组Longa神经学评分降低(P<0.05)。结论:GE作用可延长CT、BT、TT,降低凝血酶和凝血因子含量,增强NO、eNOS活性,提高t-PAT、PGI_(2)表达同时抑制PAI、TXA_(2)表达,可改善局灶性脑缺血损伤凝血功能,恢复脑血管内皮功能。

非糖尿病性脑梗死与急性期高血糖的相关性及机制

目的探讨非糖尿病性脑梗死与急性期高血糖的相关性及机制。方法 24只SD大鼠随机分为正常血糖组（NG）、高血糖1组和2组（HG1和HG2）,脑缺血（middle cerebral artery occlusion,MCAO）期间诱导急性期高血糖。MCAO后24h观察神经功能缺损评分和脑梗死灶以了解非糖尿病性脑梗死与急性期高血糖相关性,并观察缺血同侧齿状回神经干细胞增殖能力。结果 NG组、HG1组和HG2组血糖分别达约4.0-5.0 mmol/L、10.0 mmol/L和20.0 mmol/L目标值。HG2组神经功能缺损评分及脑梗死灶均比NG组、HG1组大,差异具统计学意义（P〈0.05）;HG1组与NG组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。神经干细胞增殖能力改变与神经功能缺损评分及脑梗死灶检测结果一致。结论轻度急性期高血糖（10.0 mmol/L）可能通过保护受损的神经干细胞而不加重梗死性脑损伤,重度急性期高血糖（20.0mmol/L）则可能通过恶化神经干细胞增殖能力加重梗死性脑损伤。

头针治疗急性脑梗死大鼠不同时间窗的疗效观察

目的:头穴电刺激脑梗死大鼠不同时间窗的疗效观察。方法:将健康雌性大鼠分为模型对照组、假手术对照组及头穴电刺激组,每组又分为治疗1天、3天、7天、14天4个亚组,每组15只。头穴电刺激组、模型对照组采用线栓法制备大脑中动脉急性脑梗死大鼠模型,假手术对照组只分离动脉不结扎插线。对3组大鼠Zea Longa评分,造模24 h内对头穴电刺激组大鼠针刺大椎、百会进行电刺激治疗,每日1次,每次30 min,治疗1天、3天、7天、14天,其余两组于每天相同时间将大鼠固定于实验台上,不予处置。在治疗后1天、3天、7天、14天对各组大鼠进行评分,断头取脑,用PT-PCR方法检测Caspase-3mRNA的表达变化。采用SPSS统计软件进行统计分析。结果:头穴电刺激治疗14天组和治疗7天组Zea Longa评分疗效显著(P<0.05);头穴电刺激组中治疗14天组Caspase-3 mRNA的表达量明显低于治疗1天、3天(P<0.05)。结论:对急性脑缺血性脑梗死大鼠行头穴电刺激治疗,可促进其肢体功能的恢复,14天疗程对大鼠肢体功能的恢复疗效最佳。

头针对急性脑梗死大鼠不同时间窗Bax与Bcl-2影响的研究

目的:观察头针电刺激对不同时间点脑梗死大鼠Bax与Bcl-2 mRNA的变化,探讨其对脑梗死可能作用机制。方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。将180只健康Wistar雌性大鼠,随机分为3组,头针电刺激组、模型对照组和假手术组。各组又依据脑梗死后治疗时间点不同分为4个亚组,即1天组、3天组、7天组与14天组。3组大鼠造模结束24 h起,给予头针电刺激组大鼠针刺百会穴与大椎穴,并进行电刺激治疗,1次/日,30 min/次,余2组在每天相应时间固定大鼠于针刺台,不予任何处置。疗程治疗结束后,断头取脑。运用RT-PCR检测梗死脑组织Bax与Bcl-2 mRNA。3组大鼠在造模结束清醒后、每日治疗前后均要进行神经功能缺损程度评分,采用Zea-longa 5级评分标准。结果:头针电刺激组中7天与14天的亚组大鼠Zea-longa 5级评分明显低于同组1天与3天的亚组(P<0.05),14天的Zea-longa 5级评分与模型组比较,具有显著性差异(P<0.05);头针电刺激组经RTPCR检测后,Bax mRNA的表达逐渐降低,Bcl-2逐渐增加,且14天的亚组与模型组14天比较,有显著性差异(P<0.05),与假手术组14天比较则无显著性差异(P>0.05)。结论:头针电刺激能明显降低脑梗死大鼠的神经功能缺损程度评分,改善大鼠运动功能;头针电刺激能降低Bax mRNA的表达,提高Bcl-2 mRNA的表达,从而抑制缺血区细胞凋亡,保护脑组织,促进肢体康复的功效,其中以头针电刺激14天疗效最佳。

黑木耳多糖对急性脑缺血/再灌注损伤影响的研究

目的:观察黑木耳多糖(APP)对急性脑缺血大鼠的保护作用并探讨其相关机制。方法:成年雄性SD大鼠给予不同浓度的AAP灌胃20d,每天1次,腹腔注射银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGb671)作为阳性对照,20d后实施右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)建立局灶性脑缺血模型。MCAO60min后复灌,复灌24h后进行Longa神经功能损伤评分,并用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死面积。复灌48h后用TUNEL免疫组化检测神经元凋亡,测定脑组织线粒体内活性氧簇(ROS)的生成量判断氧化应激水平。结果:黑木耳多糖能降低神经功能损伤评分,减小脑梗死面积,减少神经元凋亡,并且能够使缺血复灌脑组织线粒体ROS生成显著减少。高剂量AAP组的凋亡神经元数量、ROS生成量和阳性对照组相比有显著性差异。结论:黑木耳多糖能够对抗大鼠的局灶性脑缺血损伤,其保护作用和减轻氧化应激水平有关,并优于银杏叶提取物。

NLRP3炎性小体表达下调对卒中后抑郁大鼠的作用

目的研究NLRP3炎性小体对卒中后抑郁大鼠抑郁行为及神经功能的影响,以期发现卒中后抑郁的可能治疗靶点。方法 144只SD大鼠进行大脑中动脉闭塞术建立缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),然后随机分为4组:假手术组(n=12)、PSD(post-stroke depression,卒中后抑郁)组(n=12)、PSD+control siRNA组(n=12)、PSD+NLRP3 siRNA组(n=12)。PSD组大鼠进行左侧大脑中动脉闭塞术后,再进行慢性轻度不可预见性应激(chronic mild unpredictable stress,CUMS)联合单居21 d,假手术组操作与PSD组相同,但颈内动脉不放置线栓,也不进行慢性轻度不可预见性应激联合单居处理。CUMS第21天,将NLRP3 siRNA或等体积control siRNA、无菌生理盐水微量注射至SD大鼠侧脑室以下调NLRP3炎性小体的表达,检测PSD后第1、7、14天各组大鼠的抑郁行为评分(蔗糖水偏好试验、悬尾试验)和神经功能(足错误试验、Longa评分),并用ELISA检测脑组织中IL-1β、IL-18的含量。结果与PSD+control NLRP3组相比,PSD+NLRP3 siRNA组大鼠在PSD后第1、7、14天脑组织中IL-1β、IL-18表达降低(P<0.05),糖水偏好比例增高、悬尾时静止不动时间减少,足错误次数增加,Longa评分降低(P<0.05)。结论抑制NLRP3炎性小体可减轻PSD大鼠的抑郁行为,促进神经功能恢复。

高压氧联合电针对脑出血大鼠认知功能及行为学的影响

目的研究高压氧联合电针疗法对脑出血大鼠认知功能及行为学的影响。方法采用胶原酶Ⅶ尾状核注射方法,将36只成年SD大鼠制备成脑出血大鼠模型,并将模型大鼠随机分为对照组、高压氧组、联合组,各12只。高压氧组、联合组于术后10 d开始行高压氧或高压氧联合电针干预,1次/d,共20 d。分别在术前及干预结束后,采用Longa评分评价大鼠的行为学功能,采用Morris水迷宫测验大鼠认知功能。结果干预20 d后,对照组Longa评分无显著变化;高压氧组和联合组Longa评分均显著降低,且低于对照组,而联合组又显著低于高压氧组(P﹤0.05)。干预20 d后,对照组逃避潜伏期、穿越次数无显著变化;高压氧组和联合组逃避潜伏期明显缩短,穿越次数显著增加,且与对照组有显著差异(P﹤0.05),而联合组的改善幅度显著大于高压氧组(P﹤0.05)。结论高压氧联合电针疗法对脑出血所致大鼠认知及行为学功能障碍的改善作用较单纯高压氧治疗更加显著。

头针透刺法对急性脑梗死大鼠CD40与CD40L信号通路的影响

目的观察头针透刺法对脑梗死大鼠血清及脑组织CD40与CD40L含量的影响。方法将60只健康雄性Wistar大鼠随机分为头针透刺组、假手术组和模型对照组。各组根据治疗时间不同分为两个亚组,7 d组与14 d组,每个亚组10只大鼠。采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。3组大鼠在造模成功24 h起,给予头针透刺组大鼠百会穴透前顶穴、病灶侧率谷穴透悬厘穴。余两组在每日相同时间固定大鼠于针刺台,不予任何处理。于7 d、14 d治疗后,检测外周血中sCD40L水平,CD40与CD40L在脑组织的表达。3组大鼠在造模结束清醒后、每日治疗前后均进行神经功能评分(Zea-Longa)5级评分。结果治疗后大鼠神经功能改善明显优于模型组(P<0.05),头针透刺组14 d亚组大鼠Zea-Longa评分明显低于同组7 d亚组(P<0.05);头针透刺组外周血sCD40L水平和脑组织中CD40与CD40L表达较模型对照组均明显降低(P<0.05),且头针透刺组14 d亚组血清sCD40L水平和脑组织CD40与CD40L表达低于7 d亚组(P<0.05)。结论头针透刺法能显著降低脑梗死大鼠Zea-Longa评分,改善大鼠运动功能;其治疗效果可能与CD40/CD40L信号通路下调介导的炎症凋亡分子生物学因素有关,其中以头针透刺14 d疗效较好。

二氢杨梅素下调大鼠缺血性脑卒中脑组织炎症小体Nod样受体蛋白3的表达

目的 研究二氢杨梅素(DHM)在大鼠缺血性脑卒中治疗方面的作用,并探讨其对炎症小体Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法 取70只SD大鼠,利用线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用Longa评分、TTC染色、Nissl染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,探讨DHM对MCAO大鼠缺血/再灌注损伤的治疗效果及机制。结果 DHM治疗后MCAO大鼠自主运动能力明显改善,脑组织梗死体积明显减小,脑组织结构和神经元形态较为改善,且DHM治疗后的NLRP3和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达显著降低。结论 DHM能下调炎症小体的表达,进而降低MCAO脑卒中大鼠的脑梗死体积并改善神经行为学表现。

基于Catwalk步态分析系统评价三化汤对大脑中动脉闭塞大鼠的影响

目的:基于Catwalk步态分析系统,评价三化汤对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠运动功能缺损的改善效果。方法:将36只成年雄性Wistar大鼠随机分为模型组、三化汤低剂量组、三化汤中剂量组、三化汤高剂量组、尼莫地平组、假手术组,每组6只,前5组采用Zea Longa线栓法构建MCAO大鼠模型,假手术组大鼠接受同样的手术,只是将栓线向前推进到颈内动脉约5 mm处。4个药物组分别给予对应药物灌胃,假手术组与模型组灌胃等体积生理盐水,每日灌胃1次,共7 d。造模前后分别进行Zea Longa神经功能缺损评分,灌胃结束后进行Catwalk步态数据采集。结果:造模后第1天,与假手术组比较,5个造模组Zea Longa神经功能缺损评分均显著升高(P<0.01);造模第7天,三化汤高剂量组Zea Longa神经功能缺损评分低于模型组(P<0.01)。治疗后,三化汤低、中、高剂量组和尼莫地平组平均运动速度、持续时间、站立时间、摆动时间、摆动速度、站立行走模式、步幅、爪间宽度均显著改善,且三化汤各剂量组效果优于尼莫地平组(P<0.05、P<0.01)。结论:三化汤可以增强MCAO大鼠的运动能力,改善神经功能缺损症状,效果优于尼莫地平。