龙眼拟茎点霉(Phomopsis longanae Chi)的生物学特性研究

龙眼拟茎点霉（Phomopsis longanae Chi）是导致采后龙眼果实腐烂的主要病原菌,研究了温度、湿度、pH值、光照、营养、越冬越夏等条件对龙眼拟茎点霉菌丝生长、产孢和孢子萌发的影响。结果表明：龙眼拟茎点霉生长适温为25℃,最适pH6~7;产生子座的最适温度为22~25℃,最适pH6,还需要一定的光照;以蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉和D-果糖为碳源和以蛋白胨、硫酸铵和硝酸铵为氮源的培养基最有利于龙眼拟茎点霉的生长发育;分生孢子的大量萌发要求高湿度和营养刺激,最适萌发温度25~28℃,最适pH6~7,在分生孢子器中,分生孢子的存活时间长于1年;该菌菌丝的致死温度为59℃（10 min）,分生孢子为50℃（10 min）。

拟茎点霉侵染对龙眼果实采后果皮褐变和活性氧代谢的影响

【目的】研究拟茎点霉侵染对龙眼果实采后果皮褐变和活性氧代谢的影响。【方法】采后龙眼果实用拟茎点霉孢子悬浮液(浓度为104个孢子/mL)浸泡接种5 min,以无菌水处理的龙眼果实为对照。经过处理的果实在(28 1)℃、相对湿度90%下贮藏,贮藏期间定期测定果实病害指数、果皮褐变指数、MDA含量、产生速率、活性氧清除酶(SOD、CAT、APX)活性和内源抗氧化物质(AsA、GSH)含量的变化。【结果】与对照果实相比,拟茎点霉侵染提高了龙眼果实病害指数和果皮褐变指数。同时,拟茎点霉侵染促进龙眼果皮产生速率增加,且在整个侵染过程维持较高水平;拟茎点霉侵染0—2 d内的果皮GSH含量和APX活性明显下降而SOD和CAT活性快速上升,侵染2—5 d内的果皮APX活性快速上升而SOD和CAT活性快速下降,侵染5 d后的果皮SOD和APX活性快速下降;在整个侵染过程的果皮AsA含量快速下降,而MDA含量增加。【结论】拟茎点霉侵染导致龙眼果皮活性氧清除能力下降而积累大量活性氧,大量的活性氧对细胞膜结构的破坏会引起细胞区室化功能的丧失,使多酚氧化酶与酚类物质接触,其结果引起酚类物质的酶促氧化和黑褐色高聚物的形成而导致龙眼果皮褐变。

DNP和ATP对Phomopsis longanae Chi侵染的龙眼果实病害发生、能荷状态和呼吸代谢的调控

与拟茎点霉接种果实相比,DNP能提高拟茎点霉接种果实的病害指数和果皮褐变指数,提高果实呼吸速率和果皮COX、AAO、PPO活性及NAD和NADH含量,降低果皮NADK活性和NADP、NADPH含量及能荷值。而ATP则能降低拟茎点霉接种果实的病害指数和果皮褐变指数,降低果实呼吸速率和果皮COX、AAO、PPO活性及NAD和NADH含量,提高果皮NADK活性和NADP、NADPH含量,维持较高的果皮能荷值。据此认为,DNP处理促进拟茎点霉侵染所致龙眼果实采后病害发生,与DNP加剧能量亏缺、削弱磷酸戊糖呼吸代谢途径及增强COX、AAO和PPO等呼吸末端氧化酶活性有关;而ATP处理延缓拟茎点霉侵染所致龙眼果实采后病害发生,与ATP维持较高的能荷值、增强磷酸戊糖呼吸代谢途径及降低COX、AAO、PPO等呼吸末端氧化酶活性有关。

龙眼果实潜伏性病原真菌的初步研究

采用快速、简便的果肉分离法,从健康龙眼果实中分离潜伏侵染的真菌。经形态和致病性鉴定,2个分离频率较高的潜伏侵染真菌为龙眼拟茎点霉[Phomopsis longanae Chi]和可可毛色二孢[Lasiodiplodia theobromae(Pat.)Griff. & Maubl.];不同发育阶段的龙眼果实分离结果表明,龙眼拟茎点霉在花期即可侵染,而可可毛色二孢主要在龙眼果实膨大期侵染。研究结果为制定龙眼果实采后病害综合防治策略提供依据。

‘东壁’和‘福眼’龙眼果实果皮褐变差异的生理机制

比较研究在温度(8±1)℃、相对湿度85%贮藏条件下‘东壁’和‘福眼’龙眼果实的果皮褐变差异及其与活性氧及酚类物质代谢的关系。结果表明:贮藏期间,‘东壁’龙眼果实的果皮褐变指数、果皮O2-·产生速率、丙二醛含量、细胞膜透性都显著低于‘福眼’龙眼,而活性氧清除酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸氧化酶(APX))活性和内源抗氧化物质(还原型抗坏血酸(As A)、还原型谷胱甘肽(GSH))含量都显著高于‘福眼’龙眼;‘东壁’龙眼果实的果皮多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性都低于‘福眼’龙眼,而果皮花色素苷、类黄酮和总酚含量则高于‘福眼’龙眼。因此,采后‘东壁’龙眼果实较不容易发生果皮褐变,与其具有较强的活性氧清除能力,能减少O2-·积累,减轻膜脂过氧化作用,较好地保持龙眼果皮细胞膜结构的完整性,延缓PPO、POD与酚类物质接触而减少酚类物质的酶促氧化褐变有关。

缺镁胁迫对龙眼苗期氮代谢的影响

采用溶液培养方法研究了缺镁胁迫对龙眼苗期氮代谢的影响。结果表明 ,缺镁胁迫下 ,龙眼叶片硝酸还原酶 (NR)活性下降 ,游离氨基酸总量增加 ,水解氨基酸总量减少 ,蛋白质合成受阻而分解加剧 ;核酸酶 (RNase)活性提高 ,核糖核酸 (RNA)、脱氧核糖核酸 (DNA)含量降低 ,缺镁对RNA的影响比DNA大 ;活性氧 (O2 ·-)净产生速率增加。统计分析表明 ,缺镁胁迫下 ,龙眼核酸和蛋白质含量下降是其合成受阻。

37份龙眼种质资源亲缘关系的ISSR分析

本研究利用ISSR技术对37份龙眼种质资源进行遗传多样性检测。研究结果表明,从100条ISSR引物中筛选出7条重复性好,条带清晰的引物对37份龙眼品种基因组DNA进行扩增,共扩增出54条带,其中43条具有多态性,比率为79.6%。不同龙眼品种间遗传相似系数变幅为0.69～0.97,平均达0.83,说明ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性。UPGMA聚类结果表明,ISSR标记能将37份龙眼品种完全区分开,并能将来源于中国、越南和泰国的37份龙眼品种分别聚类到中国、越南和泰国三大品种群,说明龙眼品种资源的亲缘关系与地理因素有关,三个国家的龙眼品种之间存在较大的遗传差异。本研究结果将为为龙眼品种资源的研究利用提供参考。

SO_2对龙眼冷藏效果及货架寿命的影响

ＳＯ２处理结合低温贮藏，显著降低了龙眼（ＤｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎａＬｏｕｒ．）果实的呼吸强度和果皮ＰＰＯ（多酚氧化酶）活性出库后，仍能维持这种抑制效果，从而抑制了果皮褐变，改善了果实外观。

拟茎点霉侵染对采后龙眼果皮LOX活性和膜脂脂肪酸组分的影响

用拟茎点霉(Phomopsis longanae Chi)侵染福眼龙眼(Dimocarpus longan Lour.‘Fuyan’)果实,研究龙眼果皮脂氧合酶(LOX)活性、膜脂脂肪酸组分和细胞膜透性的变化及其与果皮褐变的关系。结果表明:拟茎点霉侵染导致龙眼果皮褐变指数、LOX活性和细胞膜透性增加,不饱和脂肪酸组分[亚油酸(C18:2)、亚麻酸(C18:3)和花生一烯酸(C20:1)]下降而饱和脂肪酸组分[棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)]增加,脂肪酸不饱和指数(IUFA)和脂肪酸不饱和度下降。拟茎点霉侵染提高龙眼果皮LOX活性和加速膜脂不饱和脂肪酸的降解,从而破坏细胞膜系统的完整性,导致膜系统区室化功能丧失,使多酚氧化酶与酚类物质接触,引起酚类物质的酶促氧化和黑褐色高聚物形成,导致龙眼果皮褐变。

模拟酸雨对龙眼叶片叶绿素a荧光特性的影响

利用OS5 FL饱和脉冲调制式荧光测定仪研究了酸雨胁迫对龙眼叶片叶绿素a荧光特性的影响。结果表明 :在pH≤ 3.5的酸雨胁迫下 ,龙眼叶片叶绿素a荧光诱导动力学曲线发生明显变化 ,Fv/Fm、Fv/Fo、PSⅡ非环式电子传递的量子效率 (ΦPSⅡ )、荧光下降比值(Rfd)、光化学猝灭系数 (qP)和非光化学猝灭系数 (qN)均随酸雨pH下降而降低 ,说明酸雨抑制了PSⅡ的功能和碳同化能力。叶绿素含量下降主要是由于叶绿素a下降所致 ,叶绿素b对酸雨的反应不敏感。

模拟酸雨对龙眼叶绿体活性的影响

研究了模拟酸雨对龙眼叶绿体活性的影响 .结果表明 ,pH≤ 3.5的酸雨胁迫使叶绿素 (Chl)、类胡萝卜素 (Car)含量下降 .Chl含量的下降是Chla含量下降的结果 ,Chlb对酸雨的反应不敏感 ,因而Chla/Chlb下降 .Chl和Car含量、Chla/Chlb随胁迫时间的延长而下降 .光照加剧了酸雨对光合色素的伤害 .酸雨胁迫使叶绿体光还原活性、光合磷酸化活性、H+ ATPase活性降低 ,电子传递链的破坏与磷酸化解偶联 ,从而使叶绿体不能有效吸收、传递、转换光能 .光合磷酸化过程对酸雨胁迫的反应比光还原过程敏感 .

模拟酸雨对龙眼叶绿体的伤害效应

龙眼叶绿体超氧化物歧化酶 (SOD)和抗坏血酸过氧化物酶 (AsA POD)活性、谷胱甘肽 (GSH)和抗坏血酸含量 (AsA)含量随酸雨的 pH值下降而降低 ,膜脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)的含量则随酸雨的pH下降而增加 .pH 3.0的酸雨胁迫 2h ,SOD和AsA POD活性、GSH和AsA含量有所增加 ,并随胁迫时间的延长而下降 .pH 3.5的酸雨处理使类囊体膜崩解 ,叶绿体基粒片层结构混乱 ;pH 3.0的酸雨处理的叶绿体片层结构伤害更为严重 .图 5图版 2参 2

模拟酸雨对龙眼坐果的影响及钙调节

pH 4.5的酸雨处理的花粉萌发率比CK下降 9.38%,pH 3.5处理可观察到花粉受害的症状 ,花粉萌发率比CK下降 2 4.2 3%.pH 4.0的酸雨处理雌花 ,其坐果率显著下降 (P <0 .0 5 ) .0 .0 2～ 0 .0 4mmol/L的Ca(NO3 ) 2 溶液处理显著促进酸雨胁迫下花粉的萌发 ,当Ca(NO3 ) 2 的浓度超过 0 .0 8mmol/L时则促进作用开始减弱 .酸雨胁迫后用 2mmol/LCa(NO3 ) 2 溶液或清水喷洒可显著减少因酸雨对雌花和坐果的危害 .图 1表 6参 2

模拟酸雨对龙眼幼果纤维素酶活性和内源激素含量的影响

酸雨胁迫后 ,龙眼幼果IAA、GA1+ 3 、ZRs、DHZRs、iPAs含量下降 ,ABA含量升高 ,生长抑制物ABA和生长促进物(IAA、GA1+ 3 )的比值提高 ,酸雨胁迫还使纤维素酶活性上升 ,促进幼果脱落 .易脱落幼果的纤维素酶活性和ABA含量高于正常幼果 ,而IAA、GA1+ 3 、iPAs、ZRs、DHZRs含量低于正常幼果 .图 6表 1参

水分胁迫对龙眼光合作用的影响

以一年生实生盆栽苗为试材,用红外线 CO_2气体分析器研究了水分胁迫对龙眼光合作用的影响。结果表明,幼龄叶片对水分胁迫的反应比较敏感,老龄叶片反应迟钝;叶片光合速率(Pn)的下降与叶片含水量的下降基本同步,都明显滞后于土壤相对含水量的下降;Pn 下降的原因,既有气孔因素,也有非气孔因素;严重的水分胁迫改变了叶片光合速率的日进程;复灌后其光合作用恢复较慢,且不能恢复到胁迫前的最高水平;龙眼生长的最适土壤相对含水量为62%～84%,灌水临界期约为38%～42%。

酸雨对龙眼果树影响研究

通过大田和室内模拟试验,研究酸雨对龙眼果树的影响。结果表明酸雨使龙眼树叶、梢、芽的营养元素K、Mg、P、Fe、Zn、Mn渗出;叶绿素降低;酸雨中的H+、Cl-被吸收;细胞受损害,随着酸雨PH值下降,伤害程度加大,PH<3伤害是不可逆转的;Ca2+似有在逆境中迅速运输以起保护作用的倾向;每升含KH2PO41.0mg、Ca(NO3)23.3mg,FeSO442礸,H3BO329礸的混合液在酸雨之前或后喷淋果树,能降低伤害,浓度上限可至50倍。花、蕾、幼果受酸雨的伤害,程度是花>蕾>幼果,喷淋每升含Ca(NO3)23.3mg,KNO32.7mg,FeSO442礸的混合溶液可起保幼果作用。土壤肥沃、田间管理好、营养充分,能有效拮抗酸雨的侵害。

植物提取物对龙眼主要致腐真菌的抑制作用

从低温贮藏的腐烂龙眼果实中分离主要致腐真菌,并以丁香、甘草、花椒和高良姜4种常见药食两用植物为试验材料,对主要致腐真菌进行体外抑菌试验,从中筛选抑菌效果较好的植物提取物及有效的提取方法,然后用二倍稀释法测定其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果表明:低温条件下龙眼的致腐真菌主要是龙眼拟茎点霉菌,丁香提取物对该菌抑制效果最好;而且在室温下,用75%乙醇震荡提取48 h所得丁香提取物抑菌效果最佳;丁香提取液的最小抑菌浓度为6.25 mg·m L-1,最小杀菌浓度为12.50 mg·m L-1。

模拟酸雨对龙眼幼果多胺含量的影响研究

以8年生乌龙岭龙眼为试验材料,研究不同pH的模拟酸雨对龙眼幼果多胺含量的影响。结果表明,酸雨胁迫下龙眼幼果多胺(PAs)、腐胺(Put)、亚精胺+精胺(Spd+Spm)含量上升,并随果实的发育而逐渐下降。易脱落幼果的PAs、Put、Spd+Spm含量均显著高于正常幼果。