龙牙百合的植株再生与遗传转化

以龙牙百合鳞片叶切块为外植体 ,通过多种培养基的比较试验 ,得出MS +2 ,4 -D 2mg/L +6 -BA0 2mg/L是诱导愈伤的最佳培养基 ,MS +6 -BA 1mg/L +NAA 0 0 5mg/L是不定芽诱导及伸长的适宜培养基。MS +NAA 2mg/L是生根的最佳培养基。本试验已建立了适用于龙牙百合遗传转化的快速高频再生系统。用携带有几丁质酶基因和 β - 1、 3葡聚糖酶基因的工程菌 ,通过农杆菌介导法和基因枪转化法转化龙牙百合 ,经PCR和点杂交检测证明外源基因已经整合到植物染色体中。同时对农杆菌介导法和基因枪法进行比较 ,发现农杆菌介导法的转化率为 16 7% ,基因枪法的转化率为 5 0 % ,因此可能基因枪转化法更适于龙牙百合的遗传转化。

龙牙百合茎尖脱毒快繁及种球培育技术

当龙牙百合鳞茎在58℃下处理10-20min，再在40℃下处理72h；茎尖大小为0．2～0.4mm时的诱导成活率达60％～66．7％。继代增殖培养基为MS＋1．0mg／LBA＋0．1mg／LNAA时，其增殖系数是3．36。培养基中4．5％～5．5％的食用糖和60d的培养时间利于鳞茎数量和质量的增加。移栽后的小鳞茎培育8个月可达鲜重22g／个以上的脱毒种球。

龙牙百合多糖的纯化及其分子量的测定

本研究用DEAE-sepharose Fast Flow柱从百合水提物中分离纯化得到两种多糖LLP1、LLP2,经高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定LLP1为单一组分、LLP2为糖蛋白,将这两种多糖进行气相色谱分析。结果如下:LLP1由甘露糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成,分子量为11756D,LLP2由半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成,分子量1038773D。

龙牙百合贮藏期间内源激素的变化

以龙牙百合的试管鳞茎及商品鳞茎为材料,研究了5℃低温与25℃常温贮藏对鳞茎内外层鳞叶的内源激素(ABA、GA_3和IAA)含量的动态变化影响,实验结果如下:在5℃低温贮藏过程中,GA_3含量最高,IAA次之,ABA较低,且GA_3与IAA含量呈明显上升趋势,而ABA含量总体呈下降趋势;在25℃常温贮藏过程中,ABA、GA_3和IAA的含量与5℃低温贮藏的变化基本一致,只是变化的幅度较小。同一鳞茎内层鳞叶和外层鳞叶的同种激素含量基本处在同一水平,变化幅度基本一致。试管鳞茎ABA的含量要比商品鳞茎的要高,而GA_3和IAA的含量则比商品鳞茎的要低。贮藏过程中内源激素GA_3/ABA、IAA/ABA的比值总体呈上升趋势,贮藏后期GA_3/ABA比值急剧上升。同时,探讨了内源激素的变化和平衡与休眠解除的关系,认为休眠的解除可能为GA_3类促进物质和ABA类抑制物质相互作用的促进抑制平衡所致。

龙牙百合鳞茎总黄酮提取工艺及抗氧化性研究

[目的]探讨龙牙百合鳞茎总黄酮的最佳提取工艺,并研究其抗氧化活性。[方法]以龙牙百合鳞茎为研究对象,采用优化超声波法提取总黄酮。在单因素试验的基础上,采用正交试验法研究了乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对总黄酮提取量的影响,并确定其最佳工艺条件,并对其体外抗氧化活性进行了研究。[结果]龙牙百合鳞茎总黄酮的最佳工艺条件如下:提取温度为30℃,乙醇浓度为80%,料液比(g∶m L)为1∶10,提取时间为20 min。在此条件下,百合鳞茎总黄酮提取量为(32.236±0.513)mg/g。抗氧化试验结果表明,龙牙百合鳞茎总黄酮提取液对DPPH·的清除效果优于相同浓度的维生素C溶液,且存在显著差异(P<0.05)。[结论]该研究可为龙牙百合的综合开发与利用提供理论依据。

不同激素对龙牙百合埋片繁殖的影响

通过对比NAA、IAA、IBA、6-BA、PP333和生根粉6种激素对龙牙百合埋片繁殖的影响，得出NAA120—150mg／L对龙牙百合繁殖的效果均好于其它各种激索，增殖系数均在1以上。小鳞茎芽平均直径在5mm以上，发根小鳞茎平均长根1．9条。

隆回龙牙百合多糖的体外抗氧化活性研究

目的探索龙牙百合多糖的体外抗氧化效果。方法从龙牙百合中超声提取多糖,蒽酮-硫酸法测定多糖含量。分别研究龙牙百合粗多糖和精制多糖对自由基DPPH、O_2^-·、·OH和NO_2^-的清除作用,并与VC阳性对照进行比较。结果龙牙百合粗多糖中多糖含量为6.57%,精制多糖中多糖含量为11.51%。在0.2~1.4mg/mL浓度范围内,龙牙百合多糖对DPPH、O_2^-·、·OH和NO_2^-有一定的清除能力,且清除效果与多糖浓度呈剂量-效应关系。相同浓度的龙牙百合粗多糖的清除能力强于精制多糖,但两种多糖抗氧化效果均弱于阳性对照VC。结论龙牙百合多糖具有良好的抗氧化能力,可开发成一种新的天然绿色食品抗氧化剂。

微切助互作技术提取龙牙百合鳞茎总黄酮工艺研究

目的利用微切助互作技术优化龙牙百合鳞茎提取总黄酮的工艺方法。方法采用微晶纤维素为助剂,龙牙百合鳞茎为主要原料,总黄酮提取率为指标,通过单因素和正交试验优化龙牙百合鳞茎总黄酮的最优提取参数。结果总黄酮提取工艺条件为:微晶纤维素添加量1.5%(m:m),提取时间35min,提取温度50℃,乙醇体积分数60%(V:V)。该条件下总黄酮提取率为5.98%,是热回流法的2.26倍,且提取总时长由122 min缩短到62min,以60%乙醇作提取溶剂,大大减少了有机溶剂使用。结论微切助互作技术是提取龙牙百合鳞茎总黄酮的一种高效、低成本方法,具有很好的应用前景。

百合多糖提取工艺优化

以龙牙百合为试验材料,研究了温度、料液比、时间和处理次数4个单因素对多糖提取率的影响,并在单因素试验的基础上,进行了4因素3水平正交试验。试验结果表明:提取最优条件为温度60℃,时间40 min,提取次数4次,料液比1∶5。此优化条件下,百合多糖的提取率可达6.27%。

抑制鲜龙牙百合成分提取物褐变的分析

对鲜龙牙百合(Lilium brownii var.viridulum Baker)成分提取中的褐变处理方法进行了研究。分别采用乙醇提取法和维生素C提取法抑制提取物的褐变,确定了用乙醇提取法抑制褐变的最佳乙醇体积分数为80%;用维生素C提取法抑制褐变的最佳维生素C浓度为0.6 g/L,并证实了提取物在后续保存过程中,只需采用合适的抑制剂浓度并置于冰箱即可,无需其他特殊处理。

龙牙百合种球鳞片无菌快繁技术研究

以龙牙百合鳞片为材料,对其组织培养中的关键技术进行了研究。结果表明:百合鳞片组织培养最适表面消毒方法为75%乙醇擦洗3min+0.1%氯化汞浸泡13 min;最佳诱导培养基配方为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L;最佳扩繁培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L;最佳生根培养基配方为1/2MS+NAA 0.10 mg/L。

不同基质对龙牙百合产量及品质的影响

为筛选龙牙百合成本低廉、栽培效果好的基质,研究了不同基质配方及按照一定比例混入土或沙对龙牙百合产量及品质的影响。结果表明:T1、T1T、T1S和T1TS处理在促进龙牙百合植株的生长、提高出苗率、增加产量及提高品质上均优于其他处理,其中基质T1(即体积比为发酵菇渣∶稻壳∶草炭∶珍珠岩∶百合专用全元生物有机肥=3∶2∶2∶2∶1)表现最佳,可在百合栽培中进行推广应用。