忍冬——一种新发现的镉超富集植物

镉(Cd)是毒性最强的重金属元素之一,具有稳定、积累和不易消除等特性,进入土壤环境中易被植物吸收,并可通过食物链进入人体,在人体内不断积累,严重威胁人体健康及生命安全。植物修复技术(Phytoremediation)是近年来发展起来的一种主要用于清除土壤重金属污染的绿色生态技术。植物修复技术的核心是找到超富集植物(Hyperaccumulator),但现已知的超富集植物往往存在生物量低、生长缓慢、地域性较强和修复时间较长等缺陷,且研究对象多集中矿区及草本植物,而对木本植物的研究甚少,因此有必要针对这一问题开展相关研究以丰富超富集植物的种类。为此,本文采用水培和土培相结合的试验方法,研究木本植物忍冬Lonicera japonica Thunb.对不同浓度镉(Cd)的生长响应及积累特性。结果表明:不同浓度的Cd处理对忍冬的生长并未造成毒害症状,表现为其根部和地上部生物量与对照相比并无显著差异。无论水培还是土培生长条件下,在较高浓度的Cd处理下,忍冬仍能保持正常生长,表现出很好的耐性。在水培条件下,当营养液中Cd处理浓度为25 mg.L-1时,忍冬地上部中Cd含量接近300.00μg.g-1;而在土培条件下,当土壤中Cd处理浓度为50 mg.kg-1时,其地上部中Cd含量仍远远高于Cd超富集植物的临界含量标准,即地上部分富集Cd超过100μg.g-1,且其具有较高的耐性系数(index oftolerance,IT均超过0.80)和富集系数(bioaccumulation factor,BF均远超过1.00),这表明忍冬具备了Cd超富集植物的特征,是一种新发现的Cd超富集植物,将其应用于Cd污染土壤修复具有重要的现实意义。

金银花品种杂交和异源四倍体的诱导

以来自河南和山东两个地道产区的金银花栽培种为亲本,建立金银花的杂交种,并以杂交种为材料,诱导金银花异源四倍体。结果表明:过氧化物同工酶电泳能够用来鉴定金银花杂交种,本实验成功建立了金银花杂交种H-4和H-5。以H-4顶芽为材料,金银花异源四倍体的最佳诱导方法为用0.2%秋水仙素溶液(含2%二甲基亚砜)浸泡72h,其诱导率达到了32.3%,本实验成功诱导了23个金银花异源四倍体株系。金银花杂交体和异源四倍体的成功建立,为下一步金银花优良品种的筛选打下了坚实的基础。

土壤环境对金银花质量影响的研究进展

金银花自古被誉为清热解毒的良药,具有较高的医药价值和经济价值,其生长的土壤环境对其产量和品质有着很大的影响。总结综述了土壤环境(土壤重金属、农残、物理性质、化学性质、生物性质等)对金银花质量的影响,以期为金银花药材质量的提高和土壤的科学管理提供参考。

金银花不同品种间遗传变异的ISSR分析

采用ISSR标记技术对金银花不同品种的遗传变异进行了研究。从100个引物中筛选出10个重复性高、扩增效果好的引物，对23个金银花品种的样本进行PCR扩增，共获得174条稳定的谱带，其中多态性条带169条，多态性比率为97．1％，23个金银花品种间的遗传相似系数范围在0．4713～0．1000之间，平均遗传相似数为0．6299，平均基因多样度（He）和Shannon多样性指数分别是0．3793和0．5563，表明品种间的遗传基础较宽及遗传多样性较高。聚类分析（UPGMA）表明：23个供试金银花品种划分为忍冬、美国忍冬、灰毡毛忍冬3大类。可见，利用ISSR标记可有效地分析金银花种质资源的遗传变异，为金银花品种鉴别、分类、种质资源的有效利用提供理论依据。

RP-HPLC对金银花和连翘单煎、单煎后合并及混煎的分析

目的：利用RP-HPLC对金银花和连翘单煎、单煎后合并及混煎进行分析，寻找异同。方法：采用Alltech-C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱进行分离，流动相采用乙腈-水（含0．2％醋酸）系统梯度洗脱，流速1．0mL·min^-1，检测波长有280nm，柱温为室温，进样体积10μL。结果：绿原酸和连翘酯苷A分别在下列范围内有良好的线性：0．980—9．800μg（r=0．9999）和0．972—9．720μg（r=0．9999）。平均回收率（n=6）分别为99．85％（RSD2．0％）和100．87％（RSD1．6％）。归属了银翘药对主要色谱峰的来源，定量了绿原酸和连翘酯苷A的含量，定性地比较了以下色谱峰所代表的成分在4个供试品中含量的多少，色谱峰k，m，n：金银花〉合并〉混煎；色谱峰g，h：连翘〉合并〉混煎；色谱峰d，e，i：混煎〉金银花，混煎〉合并。结论：金银花和连翘单煎、单煎后合并及混煎4个供试品的RP—HPLC图有异同表明银翘药对的物质基础和金银花、连翘单用的物质基础有异同，为进一步研究课题“银翘药对的药效物质基础研究”提供了方向，为临床和制药提供了一些实验依据，同时也为中药复方研究提供了参考，具有一定的理论和实践意义。

金银花根围AM真菌多样性的季节性变化研究

为了探明金银花根围AM真菌季节性变化规律及其影响因素,2011年3月、6月、9月和12月在河北省安国市中药材基地分0-10、10-20和20-30 cm 3个土层采集金银花(Lonicera japonica)根围土壤,应用PCR-DGGE技术研究AM真菌多样性季节变化规律及其与土壤因子相关性。4个季节共分离出15种AM真菌分子种,AM真菌丰富度、香农-威纳指数和均匀度从春季到冬季先降后升,夏季最低。土壤采样深度对AM真菌多样性有显著影响,随土层加深AM真菌多样性指数降低。聚类分析表明,不同季节AM真菌群落组成差异显著,但总体来说冬季和春季群落结构相似,夏季和秋季相似。主成分和相关性分析表明,丰富度和香农-威纳指数与土壤速效P和全N显著正相关,与pH显著负相关,辛普森多样性指数与土壤全N显著正相关,与pH显著负相关,其中全N影响最大,随全N含量升高,AM真菌丰富度、多样性指数先升后降。说明金银花根围AM真菌多样性具有明显的季节性变化规律,这种变化与土壤因子密切相关,这为深入了解AM真菌、宿主植物和土壤环境之间关系,利用菌根生物技术提高金银花产量和品质提供了依据。

微量元素对金银花绿原酸合成关键酶基因LjHCT和LjC3H1表达的影响研究

绿原酸是金银花(Lonicera japonica Thunb.)入药的主要化学成分,如何稳定和提高绿原酸的含量是近年来金银花研究的热点。本研究通过对金银花分别根施Fe、B和Mo 3种微量元素,比较处理前、后金银花中微量元素与绿原酸含量的变化,并定量分析3种微量元素对金银花绿原酸合成关键酶基因LjHCT和LjC3H1表达的影响。研究结果显示,高浓度的Fe处理对LjHCT基因的表达有明显的抑制作用,而中、低浓度的Fe处理可以促进LjHCT基因的表达;随着B和Mo元素浓度的提高,LjHCT基因的表达量也逐渐增加。低浓度的Fe处理可以促进LjC3H1基因的表达,而高浓度的Fe处理对LjC3H1基因的表达具有抑制作用;B元素对LjC3H1基因表达无显著影响,而高浓度的Mo处理可以促进LjC3H1基因的表达。根施中、低浓度的Fe元素,中、高浓度的Mo和B元素后金银花绿原酸含量显著增加;而根施高浓度的Fe元素后金银花中绿原酸含量显著减少。研究结果表明微量元素Fe、B和Mo可通过调节绿原酸生物合成关键酶基因的表达从而有效促进绿原酸的形成和积累。本研究为人工定向调控金银花绿原酸含量、开发人工栽培金银花专用微量元素肥料提供了理论依据。

金银花扦插育苗试验

将山东产区的金银花引种到云南栽培,开展扦插育苗试验研究。结果表明,采用IBA和NAA浸泡处理插穗,扦插苗的成活率高、生根数多、根较长;而IAA的处理效果不明显;当用50 mg/L IBA浸泡插穗10 min时,扦插苗的成活率达94.00%,生根数达46.67条,根长达4.52 cm;珍珠岩育苗比腐殖土或混合基质育苗的效果好,扦插苗质量较好,成活率达86.00%,生根数达35.20条,根长达4.80 cm。

忍冬(Lonicera japonic Thunb.)果实抑菌活性及化学成分研究

【目的】研究忍冬Lonicera japonica Thunb.果实的化学成分,为忍冬果实的开发利用提供依据。【方法】在抑菌试验的基础上,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20等方法分离纯化化合物,并通过化合物的理化性质和波谱分析鉴定其结构。【结果】从忍冬果实中分离得到7个化合物,分别为熊果酸、齐墩果酸、原儿茶酸、苜蓿素、槲皮素、咖啡酸和木犀草苷。【结论】忍冬果实醇提物和醇提物的不同极性部位具有一定的抑菌活性,且以乙酸乙酯部位的作用最强。从乙酸乙酯部分分离得到的7个化合物均为首次从忍冬果实中分离得到,为研究忍冬果实的药效物质基础及综合开发利用忍冬果实提供了科学依据。

金银花提取液抑菌活性的研究

[目的]对金银花水提液和醇提液的抑菌活性进行研究。[方法]首先用滤纸片法测定了样品对几种受试菌的抑制活性,再采用微量稀释法测定了敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。[结果]金银花水提液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的MIC为19.25%,MBC为38.50%;对枯草芽孢杆菌的MIC为38.50%。金银花醇提液对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌具有抑制作用,对沙门氏菌的MIC为9.80%,MBC为19.60%;对金黄色葡萄球菌MIC为19.60%,MBC为39.20%;对巨大芽孢杆菌的MIC为19.60%。[结论]金银花水提液和醇提液对部分受试菌具有明显的抑制作用。

超高压法提取金银花中总黄酮的研究

应用超高压技术提取金银花中总黄酮,考察压力、提取时间、固液比(g/mL)和原料粒度对总黄酮提取率的影响,并同热醇浸泡提取法、微波提取法和超声提取法的得率进行比较,得到最佳提取条件为:压力360MPa、时间5min、固液比1:14(g:mL)和原料粒度80目时,提取得率最高。热醇浸泡提取法、微波提取法、超声提取法同超高压提取法相比,其总黄酮得率分别为10.32%、11.21%、12.02%和13.56%。超高压提取方法得率高、时间短,是一种提取金银花中总黄酮的较好方法。

金银花SSR指纹图谱的构建及遗传多样性分析

以金银花及其常见变种为材料,利用SSR标记技术构建分子指纹图谱,并用于遗传多样性分析。选择25个SSR位点用于多态性分析,其中3个位点具有较强多态性,并构建基于Excel格式的金银花SSR指纹图谱,包括3对引物在6个供试材料中扩增到的18条多态性条带信息。应用该指纹图谱对金银花及其变种的遗传多样性进行分析,结果表明,金银花与山银花之间遗传距离较远,仅0.28。应用该指纹图谱对87个市售金银花进行分析,能够区分出河北、山东、河南等地的金银花品种。SSR标记技术具有快速、稳定的优点,具备金银花种质资源标准化分析及中药材市场化检测应用的价值。

不同因子对“金丰一号”金银花生根的影响

研究了基本培养基,IBA,活性炭和蔗糖对"金丰一号"金银花生根的影响,结果表明:基本培养基为1/2 MS时,生根效果较佳;IBA 3 mg.L-1,时,试管苗生长较好,生根也快;从节约成本出发,蔗糖的浓度为15 g.L-1对生根较为有利.即适于生根的培养基为1/2 MS+IBA 3 mg.L-1+0.2 g.L-1活性炭+15 g.L-1蔗糖.

金银花叶片净光合速率日变化影响因子研究

以金银花为材料,研究了其净光合速率的日变化及其与主要环境因子的关系。结果表明,金银花净光合速率日变化的诸多影响因子间有着直接或间接的、比较复杂的相互关系,在一日不同的时间段内各因子间相关性可能截然不同,在研究光合指标的日变化时,根据具体情况分阶段进行,有利于正确考察一些光合影响因子的实际影响。通径分析结果表明,金银花净光合速率日变化的主要限制因素是光合有效辐射,其次是胞间CO2浓度。

金银花新品系与主栽品种的表皮毛、叶色素及光合速率的比较分析

对金银花新品系与主栽品种的叶、茎、花蕾表面腺毛、非腺毛的密度、长度进行观察和分析,并测定其叶的叶绿素、花青素含量和光合速率,为良种的鉴别和鉴定提供依据.结果表明,豫金1号的表皮毛长度、密度均高于对照,豫金2号表皮毛除叶下表面非腺毛长度低于对照亚特红蕾1号,其他均高于对照;豫金1号、豫金2号的叶绿素含量和光合速率分别较对照高,说明在一定范围内,叶片的光合速率随叶绿素含量的增加而提高,叶片花青素含量与光合速率的相关系数达到显著水平(P<0.05),花青素含量与光合速率之间呈负相关.结论:表皮毛的长度、密度等可作为金银花新品种鉴别指标的依据.

^(60)Co-γ射线辐照对金银花插穗的诱变效应

目的探讨60Co-γ射线辐照金银花插穗的诱变效应,确定金银花插穗辐射诱变的技术与适宜剂量。方法选取金银花5年生枝条,设置不同剂量辐照处理,苗床培育插穗,测定不同处理的新生叶片数、新生枝数和根条数、插穗成活率等。结果辐照处理延缓了插穗萌芽期和展叶期,降低了插穗叶片数、新生枝数和根条数,插穗成活率下降。辐照剂量与插穗叶片数、分枝数、根条数都呈极显著的负相关关系。结论金银花5年生枝条60Co-γ射线诱变处理的适宜剂量范围为35~45 Gy。

自然诱变品种红金银花中木犀草苷含量初探

目的应用HPLC对自然突变品种红金银花中化学成分进行初步分析,建立了其中木犀草苷的分析方法并测定其含量。方法选用Venusil XBP-Cl8柱,以乙腈-磷酸-水为流动相进行梯度洗脱,采用Agilent DAD检测器(238 nm)对自然诱变品种红金银花中木犀草苷进行了初步分析测定。结果木犀草苷的保留时间为39.50 min,定量线性范围0.035 5～ 0.284 0μg(r=0.999 9),精密度和稳定性实验RSD均小于3%,加样回收率达98.85%。结论 建立的红金银花中有效成分木犀草苷检测方法灵敏度高、稳定性和重现性好;红金银花中木犀草苷平均含量为0.54 mg/g。

一种降暑凉茶的研制

以菊花等传统降暑原料配制成一种适于夏季饮用的茶饮,结果表明:混合茶香气品质较好的适宜重量配比为菊花:金银花:荷叶=95:5:3,汤色品质较好的适宜配比为菊花:金银花:荷叶=90:5:3,滋味品质较好的适宜配比为菊花:金银花:荷叶=90:5:8,综合感官品质较好的适宜配比为菊花:金银花:荷叶=95:5:3。

忍冬(Lonicerajaponic Thunb.)果实中的环烯醚萜苷类成分

【目的】在前期研究的基础上,进一步研究忍冬Lonicera japonica Thunb.果实的化学成分。【方法】采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20等方法对忍冬果实乙醇提取物的乙酸乙酯部分进行分离纯化,并通过波谱技术和参考文献鉴定其结构。【结果】分离得到了6种环烯醚萜苷类成分,分别鉴定为金吉苷、马钱素、马钱素-7-酮、獐牙菜苷、Demethylsecologanol、裂环氧化马钱素。【结论】化合物1～6为首次从忍冬果实中分离得到。

忍冬不同农家品种果皮表面纹饰观察

目的比较忍冬10个农家品种果皮形态特征,为品种划分与良种选育提供实验依据。方法采用扫描电镜观察果皮表面纹饰。结果忍冬不同农家品种果皮表面纹饰可分为两类,其中第2类又可根据表面颗粒状物的有无分为两类,分类结果与当地药农对忍冬品系的划分部分吻合;且不同农家品种间果皮表面纹饰各不相同。结论忍冬果皮表面纹饰可作为忍冬不同农家品种划分的参考。