红曲中内酯型Lovastatin的HPLC测定方法研究

对高效液相色谱(HPLC)测定红曲中内酯型Lovastatin的方法进行研究。采用75%乙醇对红曲中的Lovastatin超声提取20min。 离心后用中性氧化铝柱层析吸附上清液中的色素。一定条件下Lovastatin不被吸附而随着洗脱液流出。经过前处理后的样品以甲醇：0.1%磷酸（V/V）75：25为流动相在1ml/min流速下用反相高效液相色谱分离去除残余色素及其它杂质干扰，内酯型Lovastatin用紫外检测器在238nm波长下检测。在本实验条件下7次重复测定加标样品的回收率为98%±5% ，标准样品7次重复测定的变异系数为2.63% 。样品中内酯型Lovastatin的最低检测下限为4μg。利用本实验条件成功测定了两种红曲发酵制品中内酯型Lovastatin的含量。

RP-HPLC以开环形式测定红曲中总Lovastatin含量

建立用反相高效液相色谱(RP-HPLC)以开环形式测定红曲样品中总Lovatatin含量的方法。红曲样品用0.2mol/LNaOH溶解,50℃超声提取转化60min,使样品中的Lovastatin全部转化为开环形式,再用硅胶吸附层析,初步除去样品中的色素及部分杂质。经过前处理后的样品以磷酸缓冲液-乙腈系统(V/V)65∶35为流动相,在1ml/min流速下用反相高效液相色谱分离去除残余色素及其它杂质干扰,开环Lovastatin用紫外检测器在238nm波长下检测。本方法的最低检测限为0.2μg/ml,在0.2～6μg/ml范围内呈良好的线性关系,γ=0.9991。6次重复测定样品加标回收率为96%±3%,变异系数为3%。采用本实验方法测定5种红曲发酵样品中的总Lovastatin含量均取得满意结果。

紫外分光光度法测定红曲中酸式Lovastatin的含量

研究紫外分光光度计测定红曲中酸式Lovastatin的方法。将内酯型Lovastatin全部转化为酸式形式后用硅胶柱层析进行分离,再用双波长紫外分光光度法测定样品中总Lovastatin（以酸式存在）含量,同时用本室报道的实验方法测定内酯型Lovastatin的含量,二者之差为红曲样品中酸式Lovastatin的含量。实验探索了样品中Lovastatin转化和洗脱的最佳条件,对总Lovastatin测定方法的准确度、精密度及最低检测限进行了研究,并且运用这一方法实测了五种红曲样品中酸式Lovastatin的含量。结果表明该方法具有良好的实用性,适用于中小企业对Lovastatin产品的科研开发及质量控制。

红曲霉固态发酵产Lovastatin的培养条件

对 1株红色红曲霉固态发酵产Lovastatin的培养条件进行了研究。得出固态基质最佳初始含水量为 40 %,基础基质中加入葡萄糖和有机氮源能显著提高发酵产物中Lovastatin含量 ,多种蔬菜浸出汁都能提高Lovastatin产量 ,红曲米浸泡水对Lovastatin有明显的促进作用。稻米的种类及米的粉碎度对Lovastatin的合成也有一定的影响。在优化的培养条件下 ,干曲中Lovastatin的含量可以达到 2 5～ 3 0mg/g。

液态发酵法产Lovastatin的研究进展

Lovastatin是Aspergillus和Monascus等丝状真菌的次生代谢产物,在人体内通过竞争性地抑制胆固醇合成的限速酶3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶而阻断内源性胆固醇的合成,强烈降低血胆固醇浓度,是预防和治疗高血脂症和高胆固醇症及相关病症的有效药物。近年来,研究人员对液态发酵产Lovastatin开展了广泛深入的研究,取得了一系列重要研究进展,促进了工业化生产Lovastatin的发展。文中对Lovastatin高产菌种及选育、碳源和氮源及发酵培养条件对不同菌种产Lovastatin的影响等方面的研究进展进行了综述,为相关的研究与应用提供参考。

重离子束-紫外线复合诱变选育高产Lovastatin土曲霉菌株

利用重离子束与紫外线复合诱变的方法,选育得到一株高产Lovastatin土曲霉菌株Aspergillus terreusUV150-3。液态摇瓶发酵中Lovastatin产量达966.32mg/L,较原始出发菌株A.terreus CA99提高了4.6倍。经连续传代培养5代,其遗传性状均比较稳定。

红曲发酵谷物麸糠提取Lovastatin的研究

Lovastatin是一种强力抑制胆固醇合成的活性物质,,能够预防动脉粥样硬化和冠心病的产生。目前市场上大部分Lovastatin是从红曲米中提取出来的。本试验采用农副产品—麦麸为基质,来发酵提取Lovastatin,找出了适合本试验的提取溶剂:75%乙醇。然后经中性氧化铝吸附脱除红曲色素,最后采用增量法,成功地检测了红曲麸中的Lovastatin的含量。

红曲菌代谢产物 lovastatin 的定性定量检测及其作用观察

用红曲菌对实验性动脉粥样硬化家兔进行治疗，观察红曲菌对高脂血症和动脉粥样硬化病变的影响。结果证实红曲菌能明显降低高胆固醇血症家兔的血胆固醇浓度，并能缓解其动脉粥样硬化病变的进展。通过薄层层析和高效液相的方法对红曲菌的代谢产物进行了定性、定量检测，证实红曲菌在代谢过程中可以产生具有抑制胆固醇合成的物质———ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ。

固定化红曲霉液体发酵Lovastatin的研究

以红曲霉为研究材料,采用海藻酸钠包埋法固定化红曲霉高产Lovastatin菌株,将其与游离细胞的发酵进程进行比较,分析了固定化细胞的发酵特性及发酵稳定性。结果表明,固定化细胞和游离细胞具有相似的前期发酵过程和Lovastatin最高值,但固定化细胞表现出更长的稳定期和更好的稳定性。

Lovastatin对HL-60细胞凋亡及超微结构的影响

目的 :探讨洛伐他汀 (Lovastatin ,LOV)对HL - 6 0细胞凋亡的影响并观察细胞超微结构变化。方法 :以 4、8、16 μmol/LLOV处理HL - 6 0细胞 1～ 3d后 ,经DNA梯形带检测、DNA片段化百分率检测以及透射电镜等技术方法 ,观察细胞凋亡效应的发生。结果 :LOV处理HL - 6 0细胞后 ,有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;DNA片段化百分率增高 ;透射电镜下 ,HL - 6 0细胞呈现凋亡性变。结论 :LOV能诱导HL - 6 0细胞凋亡并使细胞超微结构发生凋亡性变。

Lovastatin治疗33例高胆固醇血症

高胆固醇血症是冠状动脉粥样硬化的主要易患因子。血浆大部分胆固醇是以低密度脂蛋白(LDL-C)的形式存在,其中高密度脂蛋白(HDL-C)与冠状动脉硬化呈负性相关,甘油三酯则主要存在于乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中,血浆胆固醇中内源性者约占2/3,因而干扰胆固醇生物合成是一种合理的治疗方法。Lovastatin(Merck)

双波长紫外分光光度法测定红曲中洛伐他汀(Lovastatin)的含量

：对紫外分光光度计测定组曲中洛伐他汀（Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）的方法进行研究。采用７５％乙醇对红曲中的Ｌｏｖｉｓｔａｔｉｎ超声提取２０ｍｉｎ。离心后用中性氧化铝柱层析吸附上清液中的色素．一定条件下Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ不被吸附而随着洗脱液流出．由于Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ在２４６ｎｍ、 ２５４ｎｍ两波长下其吸光度之差（Ａ２４６—Ａ２５４）正好能够代表一个特征吸收峰的峰高，并且经实验测定与其浓度的关系符合比尔定律．而红曲色素在此波长下△Ａ值极小，因此采用双波长紫外分光光度法能够排除样品经吸附层析分离后残存色素的干扰，完成对样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ含量的定量测定．在本实验条件下６次重复测定加标样品的回收率为９７．５±１．３８％，变异系数为１．４％．样品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的最低检测下限为０．６５μｍ／ｍｌ．利用本实验条件成功测定了三种红曲发酵制品中Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ的含量．同时测定加标回收率．结果看到实测样品的回收率都在９５％以上，标准偏差小于０．２．说明该方法具有良好的实用性．适用于中小企业对Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ产品的科研开发及产品质量控制．

土曲霉固态发酵lovastatin的动力学研究

对Aspergillus terreus ATCC20542固态发酵产lovastatin的过程进行了研究,根据发酵过程中菌体生长和产物生成等规律,建立了土曲霉固态发酵的过程动力学模型,并对模型进行了参数拟合和验证。模型在一定程度上揭示了lovastatin发酵代谢过程的特征,可以用于分析固体发酵过程。

土曲霉(Aspergillus terreus)产生洛伐他汀(lovastatin)的研究

从土曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＣＡ９５１发酵液中，分离出一种白色针状晶体，经质谱、紫外光谱、红外光 谱和核磁共振谱分析，与文献报道的洛伐他汀（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）基本一致。 Ａ．ｔｅｒｒｅｕｓ ＣＡ９５１经亚硝基胍诱变，选出 编号为ＣＡＮ １８７的突变株，其产生洛伐他汀的能力比ＣＡ９５１高６６％。摇瓶发酵实验研究了不同碳源、氮源和 水质对 ＣＡＮ１８７ 菌株产生洛伐他汀的影响，并进行了 ５００Ｌ发酵罐实验，发酵单位达９００ｍｇ／Ｌ左右。

Lovastatin对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞HMG CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响。方法 采用MTT比色法、生长曲线测定、计算细胞生长抑制率、流式细胞仪分析、以及RT PCR等技术方法 ,观察LOV对HL 60细胞体外增殖能力、细胞周期分布及HMG CoA还原酶mRNA表达的影响。结果 HL 60细胞经LOV处理后 ,生长减慢 ,细胞周期被阻滞在G0 /G1 期 ,LOV剂量越大 ,时间越长 ,增殖抑制作用越明显 ;LOV处理HL 60细胞 1～ 3d ,低剂量组 ( 4 μmol /L)HMG CoA还原酶mRNA表达上调 ;而中剂量组 ( 8μmol/L)和高剂量组 ( 16μmol/L)第 1天有增加趋势 ,第 2～ 3天明显降低。结论 LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞受阻于G0 /G1 期 ,该作用有明显剂量 效应和时间依赖关系 ;随洛伐他汀处理剂量和时间的不同 ,HL 60细胞HMG

Lovastatin对肝癌HepG2细胞作用后基因差异表达的初步研究

目的:用cDNA芯片观察lovastatin作用前后HepG2细胞的差异表达基因。方法:20μmol/L的lovas-tatin作用于HepG2细胞18h,各提取实验组与对照组细胞总RNA,用cDNA直接标记法制备探针,进行杂交,杂交信号经扫描后,用软件分析基因表达情况。应用RT-PCR验证部分差异表达基因。结果:Lovastatin作用后表达上调的基因有30个,表达下调的基因有11个,涉及信号转导、肿瘤免疫、细胞周期等方面,RT-PCR结果符合基因芯片结果。结论:用基因芯片筛选出的lovastatin作用后的肝癌细胞差异表达基因为深入研究他汀类药物的抗肿瘤机制提供重要的理论依据。

国产洛伐他汀（Lovastatin）调血脂作用的实验观察

通过观察重庆制药五厂研制生产的洛伐他汀对由ＴｒｉｔｏｎＷＲ－１３３９所致的大鼠高脂血症的影响。灌服１０ｍｇ／ｋｇ的作用最为明显，可使因Ｔｒｉｔｏｎ升高的血清总胆固醇，低密度脂蛋白的含量显著降低（Ｐ＜０．０１），而使高密度脂蛋白含量显著升高（Ｐ＜０．０１），但对甘油三脂的含量无显著影响。

洛伐他汀(Lovastatin)对鸡蛋和鸡血浆中胆固醇含量的影响

将44只新扬州鸡随机平均分成4组。对照组用基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的同时分别添加0.015%、0.03%和0.06%的洛伐他汀(Lovastatin),研究洛伐他汀对鸡蛋和血浆中胆固醇含量的影响,试验期为5周。试验结果表明:洛伐他汀能显著降低产蛋鸡血浆和鸡蛋中胆固醇水平(P<0.05),但对产蛋率的影响不显著(P>0.05)。

红曲霉固态发酵生产Lovastatin培养条件的探索

对红曲霉固态发酵生产Lovastatin培养条件进行了优化选择。得出最佳培养条件为:培养料含水量为40%,pH值为4.0～5.0,温度为30℃左右,培养料中加入适量碳源与氮源,有利于提高Lovastatin产量。

Lovastatin对人粒系白血病细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察洛伐他汀(lovastatin ,LOV)对体外培养的人粒系白血病细胞株HL - 6 0增殖和细胞周期的影响。方法:采用生长曲线测定、MTT检测、流式细胞仪分析等实验技术。结果:LOV对HL - 6 0细胞有增殖抑制作用,能使细胞周期阻滞于G0 /G1期,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。结论:LOV能抑制HL - 6 0细胞的增殖,同时影响该细胞的细胞周期进程。