红曲霉固态发酵产洛伐他汀工艺条件的研究

该文通过对洛伐他汀生产菌红曲霉S-01固态发酵工艺条件的研究,确定了固态发酵的最佳工艺条件:发酵培养基配方为大米2500 g、甘油75 g、蛋白胨175 g、初始含水量40%,按装载量350 g/1.5 L进行装瓶,接种量25%,于30℃发酵7 d(前发酵),23℃发酵33 d(后发酵),经过优化后的红曲固态发酵产洛伐他汀的含量达到14.38 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀含量为9.35 mg/g,酸式(开环)洛伐他汀占比为65.02%。该研究对功能红曲的工业化生产有一定的指导意义。

一测多评法同时测定红曲茯苓片中洛伐他汀和洛伐他汀酸含量

目的:建立适于红曲茯苓片质量控制的洛伐他汀和洛伐他汀酸的一测多评含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以洛伐他汀为对照,建立与其开环产物洛伐他汀酸的校正因子关系,同时对产品中洛伐他汀和洛伐他汀酸两种成分同时进行定量检测的一测多评方法。结果:阴性样品无干扰,样品检测方法的专属性良好,洛伐他汀和洛伐他汀酸在相应的线性范围内线性关系良好,R^(2)>0.9999,精密度和重复性RSD值均小于3%,加标回收率为在98.43%~103.18%之间。洛伐他汀对洛伐他汀酸的相对校正因子为0.9000;一测多评法测定三批红曲茯苓片中洛伐他汀酸的平均含量为0.3563 mg/g,外标法测定洛伐他汀酸的平均含量为0.3668 mg/g;洛伐他汀的平均含量为1.1113 mg/g,表明所构建的一测多评法可用于红曲茯苓片的多成分质量评价研究。结论:本研究建立的产品中洛伐他汀定量方法稳定准确,专属性强,为以红曲为原料的红曲茯苓片的质量控制和深度开发提供了科学依据。

相对校正因子法测定红曲米药材中洛伐他汀和开环洛伐他汀

目的通过相对校正因子同时测定红曲米药材中两种洛伐他汀的含量。方法以洛伐他汀为对照,通过高效液相色谱法建立该成分与开环洛伐他汀的相对校正因子,并通过相对校正因子计算开环洛伐他汀的量;同时为验证方法的准确性及适用性,比较17批红曲米药材外标法实测值与相对校正因子法的测定值。结果相对校正因子法得到的17批红曲米药材中洛伐他汀与开环洛伐他汀的总量与高效液相外标法测得的总含量值无显著性差异。结论相对校正因子法可以作为红曲米药材质量控制方法;该法以洛伐他汀一种对照品同时控制2种成分的量,节约了试验成本,为多指标成分中药材质量评价模式提供参考。

一株适用于苦荞米发酵的红曲霉菌株分离与筛选

目的筛选一株适用于苦荞米发酵的红曲霉菌株。方法从豆腐乳、红曲米分离筛选鉴定红曲霉菌株22株,优选长势较快的5株菌株,编号为MZ1、MZ7、MZ18、MZ20和MZ23。综合考察发酵后样品中红曲色价、总黄酮、洛伐他汀、γ-氨基丁酸以及桔青霉素的含量,根据发酵后样品中较高含量的红曲色价、总黄酮、洛伐他汀、γ-氨基丁酸以及较低含量的桔青霉素,筛选适用于苦荞米发酵的最佳红曲霉菌株。结果实验数据表明红曲霉菌株MZ20发酵后样品的红曲色价、总黄酮和洛伐他汀含量均最高;其中总黄酮含量为29.03±4.39mg/g,是发酵前的4.47倍;洛伐他汀含量为0.52±0.04μg/g;γ-氨基丁酸含量为135.89±7.22μg/g;桔青霉素含量均不高于40μg/kg。结论成功分离并筛选红曲霉菌株MZ20作为苦荞米的发酵菌株。

添加有机酸对红曲发酵产洛伐他汀的影响

探讨了添加六种不同有机酸(苹果酸、乳酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、醋酸)对红曲发酵产洛伐他汀的影响。首先采用Plackett-Burman实验筛选出对红曲发酵产洛伐他汀具有显著影响的三个因子,即柠檬酸、草酸、醋酸,然后通过Box-Behnken响应面实验确定产洛伐他汀的最佳工艺。研究结果表明:柠檬酸添加量为1.86%,草酸添加量为0.58%,醋酸添加量为0.06%的条件下,洛伐他汀的含量为11.35 mg/g。

HPLC法测定血脂康胶囊中洛伐他汀和洛伐他汀酸的含量

目的:建立血脂康胶囊中的洛伐他汀和洛伐他汀酸HPLC定量分析方法。方法:利用HPLC法,采用YMC-C 18柱(150 mm×4.6 mm,4μm),流动相为甲醇:10 mmol·L^(-1)甲酸铵-0.2%甲酸水溶液(73:27),流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长为237 nm。结果:洛伐他汀的线性范围为1.649～9.891μg(r=1.000 0),平均回收率为98.5%(RSD=2.31%,n=6);洛伐他汀酸的线性范围为0.221～1.327μg(r=1.000 0),平均回收率为96.3%(RSD=2.03%,n=6)。结论:本方法专属性强、结果准确、简便可行,可用于血脂康胶囊及其它相关天然他汀类药物的质量控制。

七叶皂苷对洛伐他汀在高脂血症大鼠模型体内药代动力学的影响

目的在高脂血症大鼠模型中研究七叶皂苷对洛伐他汀药代动力学的影响。方法采用高脂饲料喂饲大鼠,构建高脂血症大鼠模型,通过血清生化分析确定造模成功。选择12只造模成功的大鼠,随机分成2组,即单独给药组和联合给药组,每组6只大鼠。单独给药组和联合给药组大鼠分别经尾静脉注射给予0.9%生理盐水和注射用七叶皂苷钠(0.5 mg/kg,qd),连续14 d。第14天,给药后,两组大鼠灌胃给予洛伐他汀(20 mg/kg,0.5%CMC-Na溶液),并于洛伐他汀给药前和给药后不同时间点采集血样,采用HPLC-MS/MS方法测定洛伐他汀及其活性代谢物洛伐他汀酸的血药浓度,计算药动学参数。结果长期给予七叶皂苷钠导致洛伐他汀酸的血浆暴露水平显著升高,Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别是单独给药组的2.43(90%CI:1.55,3.31)、2.66(90%CI:1.67,3.66)和2.99倍(90%CI:1.44,4.55),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与单独给药组相比,联合给药组洛伐他汀的血浆暴露也略有增加,但两组Cmax和AUC比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论七叶皂苷可抑制高脂血症模型大鼠的洛伐他汀代谢,增加其体内暴露水平。

甘草对高脂血症大鼠模型洛伐他汀药代动力学的影响

目的研究高脂血症大鼠模型中甘草对洛伐他汀药代动力学过程的影响。方法将18只SD大鼠随机分为对照组(n=6)和实验组(n=12)。实验组采用高脂饲料喂养大鼠,构建高脂血症大鼠模型,随机分为洛伐他汀单独给药组(n=6)和洛伐他汀与甘草联合给药组(n=6)。联合给药组给予甘草颗粒,单独给药组给予相应体积的生理盐水,连续7 d后,2组大鼠单剂量灌胃给予洛伐他汀胶囊(20 mg/kg,0.5%CMC-Na溶液)。分别于给药前和给药后不同时间点采集血浆样品,采用液相色谱-质谱联用方法测定血药浓度,计算药代动力学参数,并进行组间比较。结果长期给予甘草导致洛伐他汀代谢产物洛伐他汀酸在高脂血症大鼠中血浆暴露水平显著升高,联合给药组平均C_(max)较单独给药组升高约80%(P<0.05),而AUC0-t和AUC0-∞分别升高115%和109%(P=0.005和P=0.027)。联合给药组与单独给药组比较,洛伐他汀的C_(max)和AUC增加,但无统计学差异(P>0.05)。结论甘草可抑制洛伐他汀在高脂血症大鼠体内的代谢,增加其体内暴露水平。

中药和保健食品中非法添加降脂类药物的检测方法研究

目的:建立准确、灵敏的 HPLC-MS/MS 方法检查中药制剂及保健品中非法添加的10种化学降酯药物(烟酸、普伐他汀钠、瑞舒伐他汀钙、苯扎贝特、阿托伐他汀、氟伐他汀钠、吉非罗齐、洛伐他汀、非诺贝特、辛伐他汀)。方法:采用 Waters SunfireC_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),梯度洗脱:流动相 A 为20 mmol·L^(-1)醋酸铵溶液,流动相 B 为甲醇。选择正负离子检测10种临床常用降脂药物,利用质谱解析软件研究了该类化合物的质谱裂解规律,通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比,确定样品中是否掺杂了化学降脂药物。结果:HPLC-MS/MS 方法测定上述化学物质不受药物辅形剂干扰,各药物色谱峰之间分离度良好,质谱分别率符合要求,10种降脂药的最小检出量为2 ng 至40 ng。结论:该方法灵敏度、准确性均可满足定性研究的要求,简便、快捷。

外源添加剂促进裂殖壶菌合成DHA

为提高二十二碳六烯酸(DHA)产量,根据裂殖壶菌生物合成DHA的代谢途径,考察外源添加剂对裂殖壶菌发酵生产DHA影响。研究表明:分生物素、柠檬酸、苹果酸和洛伐他汀均能提高裂殖壶菌DHA的合成能力。同时添加生物素、苹果酸和洛伐他汀时能够显著提高DHA的产量,DHA的最高产量达到11.55 g/L,相比对照提高71.87%。

微量营养源对红曲霉产洛伐他汀开闭环组分的影响

采用HPLC法测定红曲霉液态发酵培养合成开环的酸型莫纳可林K(Monacolin K)及闭环的内酯型洛伐他汀(Lovastatin)的含量,研究生长因子、前体物质和金属离子等微量营养源对红曲霉液态发酵产洛伐他汀开闭环组分的影响。结果表明:红曲霉液态发酵中,添加烟酸、乙酸钠和硫酸锌等微量营养源能促进Monacolin K及Lovastatin的合成,并提高Monacoling K的比例;当烟酸、乙酸钠和硫酸锌的添加量分别为:0.01%、0.15%和0.15%时,产生的开环Monacolin K的比例占79%,开闭环洛伐他汀总质量浓度为57.138mg·L-1。

洛伐他汀烟酸缓释片研制

目的制备洛伐他汀烟酸缓释片,解析释药机理,并考察烟酸缓释层组成对药物释放的影响。方法通过压制双层片制备洛伐他汀烟酸缓释片。通过释药速率常数(k)将各因素对烟酸和洛伐他汀的释放效果进行评价。结果HPMC用量或黏度增大,k减慢;PVPK30用量增大,k加快;在一定范围内压片压力波动对烟酸和洛伐他汀的释药行为无明显影响。结论缓释片中药物主要是通过溶蚀机制释放。

洛汀烟酸缓释片中洛伐他汀溶出度的测定

目的建立了洛汀烟酸缓释片中洛伐他汀溶出度测定方法。方法采用转蓝法,以2%十二烷基硫酸钠溶液1 000 m l（内含1.38 g磷酸二氢钠,并用1 mol·L^-1氢氧化钠溶液调pH至7.0）为溶出介质,转速为75 r·min^-1,采用HPLC法检测。结果洛伐他汀在2.5-25 mg·L^-1范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为97.39%,RSD=1.68%（n=9）,与国外同品种AdvicorTM中洛伐他汀溶出度一致。结论方法准确可靠,可用于洛汀烟酸缓释片的质量控制。

高效液相色谱法分离测定洛伐他汀及其开环酸

改进了洛伐他汀的分析方法,以甲醇∶水=80∶20为流动相,采用紫外检测器检测,使用C4色谱柱定性、定量分析了洛伐他汀及洛伐他汀羟基酸,并得出了相关方程.实验证明,采用新的色谱条件可在有效地分析洛伐他汀及其开环酸的基础上,节约分析成本.

液态培养红曲霉产洛伐他汀开闭环组分的研究

对红曲霉产开环莫纳可林K及闭环洛伐他丁的液态发酵工艺进行研究,探讨不同培养基成分和发酵条件对产洛伐他丁开闭环组分的影响。结果表明,最佳的变温培养方法是先30℃培养2d后再26℃培养7d,产生的开环莫纳可林K的比例可达87%,比26℃恒温培养的提高了2.63倍。当培养基中添加8%木糖、3%蛋白胨、0.2%NaNO3、0.2%KH2PO4、0.35%MgSO4,在接种量6%,摇床转速160r·min-1,采用变温培养方法,得到的洛伐他汀类物质的产量最高,且开环莫纳可林K含量比基本培养基的提高了18倍。

洛汀烟酸缓释片烟酸释放度的测定

目的建立洛汀烟酸缓释片中烟酸的释放度测定方法。方法以1000mL水为溶出介质,转速为100r/min,考察释放曲线;释放度测定采用紫外法。结果烟酸的释放符合一级释药方程,并与国外上市的同品种Advicor的烟酸释放度一致。结论洛汀烟酸缓释片符合2000年版《中国药典(二部)》附录ⅪⅩD中关于缓释制剂的相关规定。

土曲霉发酵过程中菌形和有机酸积累对产物合成的影响

对土曲霉(Aspergillus terreus)产洛伐他汀过程中胞内外有机酸浓度进行测定,发现菌形对发酵过程胞内外有机酸浓度和洛伐他汀的产量有很大的影响。在发酵过程中形成球状菌比丝状菌更有利于洛伐他汀的合成,并且球状菌的胞内有机酸浓度普遍高于丝状菌。通过把有机酸与产素关联,发现在高产批次中胞内柠檬酸,α-酮戊二酸以及丙二酸大量积累,并且在产素期维持三羧酸循环的低通量能促进洛伐他汀高产。

瓜薤降脂滴丸质量标准的研究

目的:建立瓜薤降脂滴丸质量标准。方法:采用薄层色谱法对薤白、瓜蒌皮进行定性色谱鉴别,采用C18柱,流动相分别为甲醇-甲酸-水(39∶1∶60)、甲醇-水(75∶25),检测波长分别为286nm及237nm,测定样品中丹酚酸B和洛伐他汀的含量。结果:样品中薤白、瓜氨酸薄层鉴别的色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;丹酚酸B进样量在0.5048～2.5240μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为99.88%,RSD为1.39%;洛伐他汀进样量在0.3174～1.5870μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为99.71%,RSD为1.33%。结论:方法可准确用来定性、定量检测,具有简便、准确及专属性强的特点,可用于瓜薤降脂滴丸的质量控制。

洛汀烟酸缓释片中两组分的含量测定

目的建立复方洛汀烟酸缓释片中洛伐他汀和烟酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为ODS柱(250mm×4.6mm,5μm)&流动相为水-乙腈-四丁基氢氧化铵(80.5∶18∶1.5);检测波长为263nm;流速为1.0mL/min;进样量为20μL。结果洛伐他汀和烟酸的质量浓度线性范围分别为25～150μg/mL和25～250μg/mL,平均回收率分别为100.1%和99.22%,RSD分别为1.5%和1.37%。结论HPLC法准确可靠,简单可行,可用于复方洛汀烟酸缓释片的质量控制。