低血清培养基对Marc-145细胞增殖与产毒能力的影响

为了探究低血清培养基对Marc-145细胞增殖与产毒能力的影响,本试验在低血清培养基加入不同体积分数的牛血清后,分别在方瓶与转瓶上培养Marc-145细胞,培养3代后进行接毒、收获抗原。检测每次传代后培养48 h的细胞密度与抗原效价,培养基添加3%~4%血清,细胞密度与对照组较一致,同时低血清培养基培养的Marc-145细胞对PRRSV的产毒能力低于对照组约0.2~0.3 lgTCID50/mL。结果表明:低血清培养基培养Marc-145细胞可将血清添加量降低至3%~4%,产毒能力符合产品质量要求,该数据可为Marc-145细胞低血清或无血清培养提供参考。

常规培养基低血清培养对猪圆环病毒Ⅱ型效价的影响

为了减少抗原生产过程中血清的使用量,节约生产成本、提升产品质量,本试验通过降低常规培养基中血清浓度和不同时间点换液相结合的方法培养猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus typeⅡ,PCVⅡ),收获后对比分析病毒滴度。结果显示试验组的病毒滴度比对照组略高,表明常规培养基降低血清浓度亦能维持细胞生长,并收获与原生产工艺病毒滴度相当的抗原。该方法的应用将减少血清使用量,节约生产成本。

CHO工程细胞株低血清培养的初探

以DMEM∶F12(1∶1)为基础培养基,对CHO细胞的低血清培养进行了初步探索,降低培养基中血清含量,观察了细胞在10%、5%和1%等不同浓度低血清培养条件下生长状态和外源蛋白表达活性的变化。试验结果表明:在含1%血清的F12∶DMEM(1∶1)培养基中,细胞仍能保持良好的生长状态,且培养上清中的目的蛋白活性与常规血清浓度10%DMEM培养条件下的活性接近。从而达到了既可以降低生产成本,又可以降低纯化难度的目的。

啮齿类海马神经元的原代培养及方法改进

目的:通过对新生啮齿类海马神经元的分离和培养,尝试建立一个简单、稳定、高效的啮齿类海马神经元原代培养方法,为脊髓损伤的相关分子机制研究提供目的细胞。方法:取新生SD乳鼠的海马组织,通过低浓度胰酶消化制成细胞悬液、4h差速贴壁后使用无血清Neurobasal培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫荧光对海马神经元相关微管蛋白-2(MAP2)行特异性染色,结合DAPI核染色鉴定神经元。结果:该方法培养的海马神经元生长状态良好,纯度较高。结论:采用低浓度胰酶消化,差速贴壁及无血清培养啮齿类海马神经元符合体外细胞实验要求,为进一步研究提供良好的目的细胞。

幼小仓鼠肾细胞(BHK21)低血清驯化及代谢比较

以幼小仓鼠肾细胞(BHK21)为研究对象,将DMEM培养基中血清体积分数从15%降至1%进行驯化培养。比较驯化过程中细胞的生长变化;同时测定血清体积分数由15%降至2%的过程中,培养液中葡萄糖、谷氨酰胺等氨基酸以及乳酸、氨的浓度变化。结果表明,血清体积分数由15%降至2%,细胞生长的延迟期延长96 h;同时细胞对葡萄糖、谷氨酰胺的代谢速率以及乳酸的积累速率都降低了50%,而氨的积累速率降低了29%。

低血清培养PK-15细胞及其增殖猪圆环病毒2型的研究

依次采用含60、30、20、10mL/L血清浓度的低血清培养基驯化PK-15细胞,并给驯化好的细胞上接种猪圆环病毒2型(PCV-2),以确定PCV-2在该培养体系下的生长情况。结果用含60、30、20mL/L血清浓度的低血清培养基各进行3代次驯化,PK-15细胞能完全适应且生长状态良好;当血清浓度降至10mL/L时,传代1次细胞无法保持良好状态,细胞出现贴壁较差、生长停滞等现象。各血清浓度培养体系中细胞生长曲线测定结果显示,在细胞培养的0、24、48、72、96h各组细胞密度与常规培养的对照组差别不明显。因此用该低血清培养体系培养PK-15细胞时,血清最低添加量为20mL/L。用该体系培养的PK-15细胞接种PCV-2后,通过荧光抗体染色测定病毒滴度。结果显示,低血清培养的PCV-2病毒滴度为10^(6.5)TCID_(50)/mL,与常规条件培养的PCV-2对照(病毒滴度为10^(6.375 )TCID_(50)/mL)差别不明显,表明该体系可用于PCV-2的增殖。表明研究建立了PK-15细胞低血清培养PCV-2体系,为PCV-2的相关研究奠定了基础。

单一血清和混合血清培养BHK21细胞的比较研究

本试验用单一血清和混合血清对幼年叙利亚地鼠肾（BHK21）细胞进行了培养，显微镜观察细胞的生长状况，并用细胞计数仪对相应的细胞进行计数及活力测定。结果表明，在同一时间含有5％的4种混合血清的低血清培养基培养的BHK21细胞比同一浓度的任何一种单一血清培养的细胞形态更好，细胞活力更高。

低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化

目的优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础。方法分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响。结果用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72h收获的病毒血凝效价最高。结论已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件。

用国产SH－2型微载体和低血清培基灌流培养CHO工程细胞

采用国产ＳＨ—２型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂ＢＩＧＢＥＦ—２，在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原ＣＨＯ工程细胞ＣＬ—１１Ｇ，所得细胞密度超过１×１０￣７细胞／ｍｌ，尿激酶原平均活性为４００７ＩＵ／ｍｌ，最高达６６１４ＩＵ／ｍｌ，均高于以前采用５％血清的培基和Ｂｉｏｓｉｌｏｎ微载体培养时的水平，从而更有利于中试和未来的大规模工业化生产。

MDCK细胞微载体悬浮培养放大工艺研究

MDCK细胞对各种流感病毒具有高度敏感性,广泛应用于流感病毒的分离和疫苗制备。通过探索培养基中促进细胞贴壁的关键组分,并筛选水解物,开发了适合MDCK细胞生长的低血清培养基。发现钙、镁离子是细胞贴壁不可缺少的物质,麦麸水解物可以部分代替培养基中的血清。利用该低血清培养基,经过消化转移将MDCK细胞从5 L反应器放大至25 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,25 L反应器中培养48 h细胞密度可达30.5×105cells/ml。研究结果为工业规模反应器微载体悬浮培养MDCK细胞生产流感病毒奠定了基础。

低血清培养PK-15细胞系对TGEV增殖规律的研究

为降低疫苗生产综合成本,本研究探讨了以低血清培养基(M08011)替代常规细胞培养基(DMEM)的可行性。本研究依次采用含100、80、50、30、20、10、0mL/L血清的低血清培养基(M08011)驯化PK-15细胞,并考察猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在低血清培养的PK-15细胞系中的增殖规律。结果显示,驯化后的PK-15细胞在含100、80、50、30、20 mL/L的低血清培养基中生长状态良好,与常规培养基所培养的PK-15细胞无差异。低血清培养体系培养PK-15细胞时,血清最低添加量为20 mL/L。用该体系培养的PK-15细胞接种TGEV后,TGEV的TCID50为10^-4.97/100μL,与常规条件培养的TGEV的TCID50为104.88/100μL相比,差别不明显。TGEV接种PK-15细胞,低血清培养基中血清浓度降低至20 mL/L,毒价未受到影响。结果表明,本研究建立的PK-15细胞及TGEV低血清培养体系可初步应用于TGEV的增殖培养,为相关疫苗研发奠定了基础。

山羊支原体山羊肺炎亚种在2种培养基上的生长特性比较

为筛选出山羊传染性胸膜肺炎疫苗制备中抗原产量高且成本低的培养基,本试验将山羊支原体山羊肺炎亚种M1801株和M1601株接种于含20%马血清的改良Thiaucourt’s肉汤(MTB)和新研制的含5%马血清的培养基(HF3),在120 h内监测其pH值、颜色变化单位(color change units, CCU)和菌体蛋白浓度的变化,绘制相应曲线。结果表明,山羊支原体山羊肺炎亚种用HF3培养时pH值下降更慢,2个菌株在HF3培养基中的CCU计数均高于MTB培养基,且高滴度维持时间更长,菌体的蛋白浓度也略高于MTB培养基。结果提示山羊支原体山羊肺炎亚种在HF3培养基中产量更高,较MTB具有更好的效果,且血清浓度低,成本更低廉,为山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗的大批量生产奠定了基础。

低血清培养基培养人胚肺二倍体细胞(2BS株)及其增殖甲型肝炎病毒的初步研究

目的研究2种低血清培养基对人胚肺二倍体细胞(2BS株)的培养效果及甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)在低血清培养基中的增殖情况。方法使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清培养细胞,显微镜下观察细胞形态、贴壁情况,细胞计数并绘制生长曲线;优化低血清培养基B的血清浓度;使用5层细胞工厂连续传代培养,放大低血清培养基细胞培养工艺;使用低血清培养基连续进行3次细胞传代后接种HAV,检测病毒滴度。结果使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清,细胞生长密度峰值分别为1.55×10^(5)、2.07×10^(5)和1.30×10^(5)个/cm^(2),统计学分析表明,低血清培养基B+5%新生牛血清达到细胞生长密度峰值高于低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清,差异具有统计学意义(P均<0.05);低血清培养基B+5%新生牛血清同B+3%新生牛血清连续培养3代细胞生长密度差异均无统计学意义(P=0.47、0.07、0.12);使用5层细胞工厂培养细胞,低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清连续培养3代,细胞生长密度均高于E-MEM+10%新生牛血清;低血清培养基B+3%新生牛血清与低血清培养基B+5%新生牛血清的病毒滴度分别为9.50和9.33 lgCCID_(50)/mL,低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清的病毒滴度分别为8.50和9.00 lgCCID_(50)/mL。结论低血清培养基适用于培养2BS细胞增殖HAV,为低血清培养基在甲肝疫苗生产中的应用奠定了基础。

体外细胞实验低硒条件构建的研究进展

硒是生物体内一种必需的微量元素,缺硒会抑制细胞分化和细胞周期的进程、诱导细胞凋亡以及增强某些病毒的毒力。此外,硒缺乏是克山病的重要病因学说,也是心血管病的危险因素。基于体外细胞实验的低硒研究应用广泛,然而,其低硒条件的构建尚无明确统一的方法。故文中对体外低硒条件构建方法及其应用的研究进展进行综述,以期为后续相关研究提供借鉴。