不同宫颈病变组织HPV6/11、HPV16/18、p53、Ki67表达的临床意义

目的 探讨人乳头状病毒（HPV）6/11、HPV 16/18、p53、Ki67表达与宫颈病变的关系及临床意义.方法 应用原位杂交及免疫组化技术,检测150例不同宫颈病变患者宫颈组织的HPV 6/11、HPV 16/18、p53、Ki67表达.结果 在宫颈良性病变、恶性病变及正常对照组织中,4个检测指标比较均有统计学差异（P均＜0.05）;在宫颈尖锐湿疣、炎症病变、宫颈上皮内瘤变Ⅰ～Ⅱ中,HPV 6/11、p53、Ki67表达阳性率比较均有统计学差异（P＜0.01或＜0.05）;p53表达在正常组织与良性病变中有统计学差异（P＜0.05）;HPV 16/18在良、恶性病变中有统计学差异（P＜0.01）.结论 在正常宫颈组织向恶性病变发展中,HPV 16/18、Ki67表达逐渐增强,p53表达逐渐降低;HPV 6/11在宫颈尖锐湿疣病变中高表达,在宫颈正常组织、恶性病变中表达较低.对宫颈活检时行HPV 6/11、HPV 16/18、p53、Ki67检测,有助于宫颈恶性病变的早期诊断.

抗HPV11 E2核酶的计算机设计

借助计算机软件分析 ,设计出能特异性切割HPV11型 6 4 4ntE2mRNA的核酶 (ribozyme) .遵循Symon′s锤头状核酶结构和GUX剪切位点原则 ,靶序列存在 32个这样的剪切位点 .通过计算机软件分析出核酶的最佳剪切位点 ,并对底物及核酶的二级结构进行预测及进行相应基因生物学功能和基因同源性分析 ,筛选出 2个锤头结构核酶 .针对这两位点设计的核酶分别命名为RZ2 777和RZ32 81.计算机分析显示 ,两核酶与底物切点两翼碱基形成锤头状结构 ,切点所在基因序列具有相对松弛的二级结构 ,位于该基因重要生物功能区内 ,是核酶的理想攻击区域 .通过基因库检索 ,在已知人类基因排除了与上述两核酶切点两翼碱基有基因同源性序列的可能性 .将两核酶用于体外剪切实验取得了良好的实验结果 。

外阴恶性肿瘤中P21^(WAF1/CIP1) P53及HPV6/11 HPV16/18的检测和意义

目的 探讨P2 1WAF1/CIP1,P5 3及HPV6/11,16/18与外阴恶性肿瘤的关系。方法 P2 1WAF1/CIP1,P5 3用免疫组化SP法检测 ;HPV6/11,16/18用原位杂交法 (ISH)检测。结果 P2 1WAF1/CIP1,P5 3在外阴恶性肿瘤组、外阴上皮内瘤变 (VIN)组、正常对照组中的阳性检测率分别为 40 .0 0 % (12 /3 0 )、63 .3 3 % (19/3 0 ) ,5 2 .3 8% (11/2 1) ,47.62 % (10 /2 1) ,0 (0 /10 )和 0 (0 /10 ) ;外阴病变各组P2 1WAF1/CIP1,P5 3与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;HPV6/11、16/18在外阴恶性肿瘤组、VIN组中的阳性检测率分别为 60 .0 0 % (18/3 0 )和 3 3 .3 3 % (10 /3 0 ) ,42 .86% (9/2 1)和 2 8.5 7% (6/2 1) ,正常对照组没有检测出 ;HPV 6/11阳性率外阴恶性肿瘤组、VIN组与正常组比较差异均有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;外阴恶性肿瘤组HPV16/18阳性率与正常组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 P2 1WAF1/CIP1P5

FQ-PCR方法检测女性CA患者HPV_(6、11)和HPV_(16、18)的实验研究

目的:探讨女性尖锐湿疣(CA)患者HPV6、11型和HPV16、18型的感染情况。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测216例女性CA患者疣体组织或分泌物中的HPV6、11型和HPV16、18型。结果:HPV6、11型阳性率为94.91%(205/216),HPV16、18型阳性率为16.20%(35/216),HPV6、11型和HPV16、18型同时阳性的感染率为12.50%(27/216)。定量测定结果显示,HPV6、11型患者病毒载量最高1.0×108 copies/ml,最低2.8×103copies/ml;HPV16、18型患者病毒载量最高1.0×108 copies/ml,最低2.57×104 copies/ml。结论:FQ-PCR技术具有灵敏、简捷、安全、特异性强的特点,避免了单纯PCR扩增产生的假阳性。女性尖锐湿疣患者应用此方法检测HPV阳性率高,可以快速区分高危型及低危型的HPV感染,有助于对尖锐湿疣的复发和癌变作出可能性预测。

HPV6/11、HPV16/18与HPVL1蛋白检测在男性阴茎乳头状增生性病变诊断中的应用

目的调查男性阴茎乳头状增生性病变患者的HPV6/11、HPV16/18和HPVL1蛋白表达情况,确定病理诊断应用依据。方法回顾性调查130例男性阴茎乳头状增生性病变患者,采用常规病理组织学方法、免疫组化和原位杂交技术检测男性阴茎乳头状增生性病变患者手术标本的HPV6/11、HPV16/18和HPVL1蛋白表达情况。结果 130例阴茎上皮乳头状增生性病变病例,尖锐湿疣、低级别上皮内病变、高级别上皮内病变和鳞癌分别占64.6%、16.9%、10.8%、7.7%。尖锐湿疣中HPV6/11、HPVL1蛋白表达阳性率为92.9%和97.6%,高于其他三组病变。低级别上皮内病变HPV16/18表达阳性率为81.8%,高于其他3组病变。结论对于HPVL1表达阴性的男性阴茎上皮乳头状增生性病变患者应该严格随访。

HPV611相关尖锐湿疣皮损中P53和P21蛋白的表达

目的 : 了解P5 3和P2 1在HPV6 11相关尖锐湿疣 (CA)皮损中的表达和意义。方法 : 用免疫组化SP法检测经PCR法证实HPVDNA6 11阳性的 2 7例CA皮损和 10例正常皮肤。结果 : (1)CA皮损基底细胞和棘细胞表达P5 3较正常皮肤显著增加 ;(2 )CA皮损棘细胞表达P2 1与正常皮肤无显著差异。结论 : (1)P5 3可能刺激和促进HPV6 11相关CA皮损的细胞增殖 ;(2 )P2

男性尖锐湿疣患者尿道黏膜HPV6/11型DNA的检测

目的探讨男性尖锐湿疣患者尿道黏膜人乳头瘤病毒6/11型的感染情况。方法采用PCR荧光法对43例男性尖锐湿疣患者疣体和尿道黏膜进行HPV6/11型核酸定性、定量检测。同时对20例健康男性的尿道黏膜进行检测。结果患者疣体处检出阳性例数为37例(86.05%),同时尿道黏膜检测阳性例数为27例(62.79%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);尖锐湿疣患者尿道黏膜的阳性率明显高于健康男性(5.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。针对患者HPV6/11型定量检测结果显示:疣体的病毒载量为(6.90×107)±(3.87×108),而且不同的患者虽然病程长短有区别,但病毒载量却无明显差异;尿道黏膜的病毒载量为(4.51×106)±(1.23×107),与疣体的病毒载量差异无统计学意义。结论男性尖锐湿疣患者的尿道黏膜存在着HPV6/11型的亚临床或隐性感染。

多重PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16、18和11/6E_6基因的研究

目的 :研究宫颈癌发病与 HPV16、18E6基因的关系。方法 :采用多重 PCR技术检测 83例宫颈癌组织中 HPV16、18及 11/ 6 E6基因。结果 :( 1)新疆地区 36例宫颈癌中 HPV E6基因检出率为 86 .11% ( 31/ 36 ) ,其中HPV16 E6占构成比 80 .5 6 % ( 2 5 / 31)。 ( 2 )山西地区宫颈癌中 HPV DNA阳性检出率 5 1.0 6 % ( 2 4/ 47) ,其中HPV16 E6占构成比 5 0 .0 0 % ( 12 / 2 4)。 ( 3)两组 HPV E6阳性检出率比较 P <0 .0 1,差异有显著性。两组 HPV16E6构成比比较 ,P >0 .0 5 ,差异无显著性。结论 :宫颈癌发生与 HPV感染的关系密切 ,且新疆地区比山西地区更为密切。两组 HPV感染以

HPV6/HPV11型病毒在儿童复发性呼吸道乳头状瘤中的表达

目的研究儿童复发性呼吸道乳头状瘤(juvenile onset recurrent respiratory papillomatosis,JORRP)的患儿首次发病及完全治愈时肿瘤组织中HPV6型和HPV11型病毒含量的表达变化以及其病毒感染率。方法收集从首次发病到完全治愈的JORRP患儿29例,分别取每例患儿首次发病及治愈时的标本,采用qRT-PCR法分别测定其首次发病及完全治愈时乳头状瘤组织标本中HPV病毒的含量。结果①首次发病组与治愈组HPV6型与HPV11型病毒qRT-PCR相对定量结果的差异均无统计学意义(P>0.05)。②首次发病组与治愈组HPV6型病毒感染的总体阳性率相同(P>0.05);HPV11型病毒感染的总体阳性率不同(P<0.05)。结论①完全治愈组与首次发病组的JORRP患儿相比,HPV6型与HPV11型病毒量的表达并无明显变化。②首次发病组的患儿均有HPV11型病毒感染,治愈组的患儿HPV11型病毒感染率有所下降。

应用荧光定量聚合酶链反应检测非典型尖锐湿疣HPV 6/11-DNA

目的探讨用FQ-PCR检测非典型尖锐湿疣HPV 6/11-DNA的可行性。方法采用FQ-PCR检测194例疑诊CA、107例单纯阴道炎、50例健康查体者的HPV6/11-DNA,同时对疑诊CA者进行病理组织学检测。结果194例疑诊CA样本,HPV 6/11-DNA的阳性率为77.83%(151/194),阳性标本DNA定量范围在1.4×10 cop ies/m l^1.78×107cop ies/m l,平均为1.27×106cop ies/m l;炎症组和正常对组均为0 copy/m l。病理组织学检测阳性率为70.10%(136/194),经χ2检验,FQ-PCR与病理组织学检测二者有显著性差异(χ2=4.787,P<0.05)。HPV6/11-DNA定量数值的高低与发病部位的多少有关(χ2=9.87,P<0.01),与CA的形态、大小、数量/部位及具体发病部位无关。结论FQ-PCR检测HPV 6/11-DNA,有助于正确判断尖锐湿疣和假性湿疣,HPV 6/11-DNA数值的高低可反应CA的严重程度。

尖锐湿疣及湿疣样病变中HPV6／11DNA原位杂交的观察

对４８例生殖道尖锐湿疣（ＣＡ）及湿疣样病变常规石蜡包埋组织切片进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６／１１型ＤＮＡ原位分子杂交及病理组织学观察，在１２例ＣＡ中９例（７５％）和湿疣样病变中１例（２．７％）检出ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ，阳性细胞位于鳞状上皮中表层的凹空细胞及其周围细胞核内。在ＣＡ与湿疣样病变的鉴别诊断中，ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ原位杂交检测具有重要的价值。

HPV6/11相关尖锐湿疣皮损中PCNA和Ki-67蛋白的表达

目的 :为了解增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigenPCNA)和细胞增殖相关核抗原Ki- 6 7在尖锐湿疣 (CA)皮损中的表达和意义。方法 :用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶免疫组化方法 (简称SP法 )检测经多聚酶联反应 (polymerasechainreactionPCR)证实人乳头瘤病毒 (HPV)DNA6 / 11阳性的 2 7例CA皮损和 10例正常皮肤。结果 :(1)CA皮损和正常皮肤均表达PCNA和Ki- 6 7。 (2 )CA皮损基底细胞和棘细胞表达PCNA和Ki- 6 7均显著高于正常皮肤。结论 :PCNA和Ki- 6 7只能反映CA皮损的增殖状态而不能反映其增殖性质。

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的 构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果 所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论 所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 。

女阴尖锐湿疣与假性湿疣、乳头状瘤的HPV_(11)、HSV_2、EB病毒检测分析

目的 :探讨女阴尖锐湿疣 (CA)与假性湿疣 (PV)、乳头状瘤 (SP)和病毒感染的关系。方法 :分析 83例女阴CA、PV、SP的病理组织学特点 ,并作乳头状瘤病毒 11型 (HPV1 1 )、泡状病毒 2型 (HSV2 )和EB病毒免疫组织化学检查。结果 :在 3种疣状增生病变中 ,CAHPV1 1 感染率明显高于PV和SP(P <0 0 1) ,CA中HPV1 1 感染率明显高于HSV2 和EB病毒 (P <0 0 1)。结论 :CA和HPV感染关系密切且与HSV2 。

HPV6/11原位杂交方法在尖锐湿疣诊断上应用

尖锐湿疣是由HtW6B／11型感染引起的一种性传播疾病，常规病理及临床诊断有一定困难，易与假性湿疣相混，而二者治疗方法不同。用原位杂交技术检测外阴湿疣组织中有无HPV感染可确诊，为临床诊断和治疗提供重要依据。原位分子杂交是近几年来在病理组织学领域兴起的又一新技术，由于它是在核酸分子水平上分析研究细胞的功能和形态，因而其准确性和特异性较其它手段优越，自1986年首次应用于常规石蜡包埋的组织切片上以来，已显示出巨大的发展潜力．尖锐湿疣近年来显著增多，研究表明它与人乳头瘤病毒（HPV）感染有关，特别是HPV6／11呈现高表达，仅凭HE切片形态难以进行判断．HPV原位分子杂交具有较高的敏感性和特异性。采用HPV6／11探针对尖锐湿疣样病变的石蜡切片进行原位分子杂交，现报道如下：

抗HPV11/E2基因Ribozyme对靶RNA的体外剪切研究

为了寻找HPV11型引起的生殖系统感染的治疗途径和探讨HPV的致病机理 ,本实验以HPV11病毒质粒为模板 ,扩增出HPVll型E2区 6 44bp片段 ,采用pGEM T EasyVector为载体 ,构建 pTV 6 44克隆载体 ,经筛选得到克隆株 ,提取质粒测序鉴定。采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析 ,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点 ,及进行基因同源性分析和生物学功能分析 ,选择出针对HPVllE2靶基因的RZ2 777,在最适条件下进行体外剪切反应 ,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子 ,选择合适的反应条件切割效率达到 6 0 %以上 ,Km和Kcat值分别为 0 .6 3μmol/L、0 .12 μmol/L ,RibozymeL两端的 5′ cis ribozyme和 3′ cis ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性 ,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明 ,Ribozyme可能成为治疗HPVll型引起的尖锐湿疣的有效手段 ,并有望在分子水平上开辟出基因治疗HPVll病毒感染的另一新天地。