下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变诊断价值的meta分析

目的系统评价液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值。方法计算机检索CNKI、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library、Embase、Science数据库中关于TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测诊断子宫颈癌前早期病变的相关文献,检索时限均为建库至2023年1月。由2位评价员按纳入标准和排除标准各自筛选文献、提取资料和评价质量后,应用RevMan 5.3、Stata 15.0、Meta-Disc 1.4统计软件分析TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值,计算诊断敏感性的Spearman相关系数验证阈值效应,进行异质性检验;计算合并敏感性、特异性、阳性似然比和阴性似然比、诊断比值比、SROC曲线下面积。结果共纳入15篇文献,合计6620例患者。Meta分析显示,合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比均不存在明显异质性(I^(2)=31.6%、14.2%、10.9%、16.7%、17.2%,P=0.1162、0.2947、0.3311、0.2663、0.2610),采用固定效应模型进行统计分析,其结果分别为0.95(95%CI:0.94~0.96)、0.87(95%CI:0.86~0.88)、6.86(95%CI:6.26~7.51)、0.06(95%CI:0.05~0.07)、113.23(95%CI:86.44~148.31)。SROC曲线下面积为0.9414。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对诊断子宫颈癌前早期病变有重要价值。

HPV16 E6-295T/G和E6-350T/G变异位点影响IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的研究

目的探讨HPV16(Human Papillomavirus Type 16)E6-295T/G和E6-350T/G变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。方法在宫颈癌细胞C33A(HPV阴性)中分别转染真核表达载体295G/350G-GV230、295T/350G-GV230和295T/350T-GV230作为实验组,以NC-GV230作为对照组。通过免疫组织化学法、Western blot方法检测HPV16 E6295T/G、350T/G不同变异位点对IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9蛋白质表达的影响。通过IBM SPSS Statistics 26软件对实验结果进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义,免疫组织化学法定量采用image J软件进行阳性细胞计数。结果Western blot结果显示,免疫分子干扰素κ(Interferon Kappa,IFNκ)的表达,HPV16 E6-295G/350G变异组较HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组降低(P<0.01,P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的免疫分子主要组织相容性复合体I类(Major Histocompatibility Complex Class I,MHC-I)的表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05)。HPV16 E6-295G/350G变异组的信号转导子和转录激活子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,STAT1)表达显著低于HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G组(P<0.05,P<0.01)。变异组HPV16 E6-295G/350G与HPV16 E6-295T/350T原型组和HPV16 E6-295T/350G变异组相比,干扰素调节因子9(Interferon Regulatory Factor 9,IRF9)表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论HPV16病毒E6蛋白质可以降低IFNκ、MHC-Ⅰ、STAT1和IRF9的蛋白质表达水平,E6基因T295G/T350G变异降低这些分子的表达作用最强。

Reid阴道镜评分、HPV E6/E7 mRNA表达量在宫颈癌中的临床应用价值研究

目的研究Reid阴道镜评分(以下简称Reid评分)、高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)mRNA表达量与宫颈癌国际妇产科联盟(FIGO)分期、血清常规肿瘤标志物水平的相关性及对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。方法选取2021年3月至2022年5月在菏泽市立医院就诊的100例宫颈癌患者作为宫颈癌组,另选同期诊治的50例低级别鳞状上皮内病变(LSIL)患者作为LSIL组,50例高级别鳞状上皮内病变(HSIL)患者作为HSIL组。比较3组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清常规肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)]水平;分析宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清常规肿瘤标志物水平及宫颈癌FIGO分期的相关性;根据宫颈癌组患者术后随访结果分为术后有淋巴结转移和无淋巴结转移,比较有无淋巴结转移患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平,分析Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量对宫颈癌术后淋巴结转移的预测价值。结果宫颈癌组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于HSIL组、LSIL组(P<0.05);HSIL组Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于LSIL组(P<0.05)。宫颈癌患者Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与血清CA125、CEA水平均呈正相关(r=0.405~0.705,P<0.05)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期呈正相关(r=0.415、0.501,P<0.05)。宫颈癌组术后淋巴结转移患者的Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量及血清CA125、CEA水平均高于无淋巴结转移的患者(P<0.001)。Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.756(95%CI:0.657~0.838)、0.760(95%CI:0.662~0.841)、0.803(95%CI:0.710~0.877)、0.768(95%CI:0.670~0.848)。将CA125、CEA联合检测作为常规预测方案,Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量、CA125、CEA联合检测作为新预测方案,常规预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI:0.724~0.889),新预测方案预测宫颈癌术后淋巴结转移的AUC为0.955(95%CI:0.892~0.987),新预测方案预测的AUC明显大于常规预测方案(Z=1.981,P=0.045)。与常规预测方案比较,新预测方案的净重新分类指数为0.021(95%CI:0.015~0.039)、综合判别改善指数为0.046(95%CI:0.033~0.069),均P<0.05。结论Reid评分、HPV E6/E7 mRNA表达量与宫颈癌FIGO分期及血清CEA、CA125水平相关,且在预测宫颈癌术后淋巴结转移方面具有一定价值。

HPV16 E6 下调 DHRS2 表达可介导宫颈上皮细胞的致癌转化

目的探讨HPV16 E6对宫颈上皮细胞基因及信号通路的影响,筛选与致癌转化相关的基因。方法构建HPV16 E6感染的正常人宫颈上皮细胞(HUCEC)模型,进行转录组测序筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因和基因组(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异信号通路。采用RT-qPCR验证主要差异下调表达基因。对主要差异基因的蛋白结构与HPV16 E6蛋白进行分子对接预测分析,通过RT-qPCR及Western blot验证HUCEC细胞模型中主要差异基因表达情况,并采用RT-qPCR及Western blot实验在宫颈癌细胞系SiHa及CaSki中进一步验证差异基因的表达。结果共筛选出差异表达2倍以上的基因55个。本研究聚焦下调差异基因,结果表明:负调控的差异基因GO功能富集于氧化还原过程;KEGG富集分析主要与碳水化合物代谢及癌症等相关。10个差异基因mRNA下调表达趋势与测序结果基本一致。分子对接预测DHRS2与HPV16 E6蛋白存在相互作用。与对照组比较,HUCEC细胞模型中HPV16 E6下调DHRS2的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)、ETV5的蛋白(P<0.01)表达;在SiHa、CaSki细胞系中,与对照组比较,DHRS2的mRNA及蛋白表达亦明显下调(P<0.05),并与P53蛋白表达趋势正相关。结论HPV16 E6可能通过下调DHRS2表达介导宫颈细胞致癌转化,促进宫颈癌发生。

宫颈脱落细胞HPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用

目的研究宫颈脱落细胞E6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用价值。方法选取2018年3月至2020年3月安康市妇幼保健院收治的268例宫颈癌疑似病变患者作为研究对象,取宫颈脱落细胞作为实验标本,检测E6/E7mRNA阳性率及拷贝数,并行HPV分型检查。以病理诊断为金标准,其中140例纳入宫颈癌组,128例为非宫颈癌组。并对268例患者进行HPV分型,高危型HPV组212例,低危型HPV组15例,低危混合型HPV组41例,记录宫颈癌发生率。采用多因素回归分析宫颈癌与高危型HPV的影响因素,利用受试者工作曲线(ROC)分析各影响因素单项和联合对检测宫颈癌与HPV分型的准确性。结果宫颈癌组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于非宫颈癌组,高危型HPV组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于低危型及低危混合型HPV组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示受教育程度初中及以下(95%CI:0.187~0.836)、孕次≥3次(95%CI:1.079~1.625)、初次性生活时间<18岁(95%CI:1.075~1.611)、鳞状细胞癌抗原(SCC)(95%CI:1.058~1.782)及HPVE6/E7mRNA阳性(95%CI:1.251~2.049)是宫颈癌的高危因素(P<0.05)。年龄(35~65岁)(95%CI:1.134~1.436)、孕次≥3次(95%CI:1.346~2.472)、性伴侣≥3个(95%CI:1.526~2.386)、阴道分泌物异常(95%CI:1.021~1.778)及HPVE6/E7 mRNA阳性(95%CI:1.216~1.920)是高危型HPV的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示孕次、初次性生活时间、SCC及HPVE6/E7 mRNA多项联合检测宫颈癌的AUC为0.826,高于单项检测(P<0.05)。年龄、孕次、性伴侣、阴道分泌物及HPVE6/E7 mRNA联合检测高危型HPV的AUC为0.880,高于单项检测(P<0.05)。结论HPVE6/E7 mRNA阳性是宫颈癌和高危型HPV共同的独立影响因素,基于HPVE6/E7 mRNA的多项联合检测较单项检测能显著提高检测宫颈癌与HPV分型的准确性。

HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌筛查中的价值

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA、HPV E6/E7蛋白和液基薄层细胞学检查(thin-prep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌筛查中的价值。方法 选取2021年7月至2022年6月于诸暨市人民医院妇科接受早期宫颈癌筛查的成年女性190例为研究对象,分别进行HPV DNA、HPVE6/E7蛋白及TCT检测,并进一步行阴道镜活检检查。比较不同病变患者的HPVDNA、HPVE6/E7蛋白和TCT对高级别病变的诊断效能。结果 CIN3及宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于宫颈炎患者(P<0.05),宫颈癌患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT检查及三者联合检测的阳性率均显著高于CIN1患者(P<0.05)。CIN2+患者的HPV DNA、HPV E6/E7蛋白、TCT及三者联合检测的阳性率显著高于CIN1-患者。HPVDNA、HPVE6/E7蛋白、TCT三者联合诊断高级别病变的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。结论 HPV DNA、HPV E6/E7蛋白及TCT可作为筛查宫颈癌和癌前病变的手段,且三者联合检测的敏感度最高。

HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

探讨HPV E6/E7mRNA检测联合光动力治疗对宫颈低级别鳞状上皮内病变患者分流诊治的价值

目的了解HPV E6/E7mRNA检测联合光动力治疗对低级别鳞状上皮内病变(LSIL)的分流诊治价值。方法选取100例LSIL女性患者,均进行HPV分型检测及E6/E7mRNA检测,然后采用光动力治疗。比较治疗后不同时间临床疗效及HPV转阴情况。结果与组织学检测结果比较,HPV分型检测结果的诊断准确率为90.0%,E6/E7mRNA检测结果的诊断准确率为88.0%。治疗6个月后,患者总有效率和HPV转阴率为91.0%、62.0%,均分别高于治疗3个月时的71.0%、42.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPV E6/E7mRNA检测方法的联合应用,对判断LSIL具有较高的准确性;而对患者提供光动力治疗,疗效显著,可以显著改善症状,促进病情快速恢复。

HPV E6/E7 mRNA和TOP2A对宫颈高级别鳞状上皮内病变锥切术后复发的影响

目的分析宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)冷刀锥切术后复发的影响因素。方法收集唐山市工人医院和唐山市妇幼保健院2015年1月—2020年6月368例宫颈HSIL患者的临床病理及随访资料,所有患者均行冷刀锥切术,术前均行人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测并定期复查,应用免疫组织化学方法检测宫颈组织ⅡA型拓扑异构酶(TOP2A)和p16表达情况,分析术后复发的影响因素。结果HPV E6/E7 mRNA持续感染组复发率(25.4%)显著高于未持续感染组(6.3%),TOP2A高表达组复发率(12.5%)显著高于TOP2A低表达组(2.9%),差异均有统计学意义(P<0.05)。年龄、象限受累范围、腺体受累、组织学分级、p16表达与复发无关(P>0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7 mRNA持续感染和TOP2A高表达是术后复发的独立危险因素(OR=4.989,OR=3.883;均P<0.05)。不同型别HPV持续感染复发率的差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA持续感染与TOP2A的高表达呈正相关(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA持续感染与TOP2A高表达是宫颈HSIL冷刀锥切术后复发的高危因素,二者可能在复发机制上存在内在联系,检测HPV E6/E7 mRNA持续感染情况及TOP2A表达对宫颈HSIL的术后临床管理具有指导意义。

HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中的临床效果

目的:评价HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中的临床应用价值。方法:选取2021年3月至2022年12月就诊于云南省肿瘤医院的1409例患者,患者均行TCT、HPV DNA及HPV E6/E7 mRNA检测,活检结果为金标准,比较HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测的一致性,分析不同筛查方式对宫颈高级别病变的检出率、阴道镜转诊率,计算其灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数及AUC值。结果:HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA两者检测一致性在HSIL组及宫颈癌组中Kappa系数分别为0.833、1,总体上两者Kappa系数为0.533;≤LSIL、≥HSIL病变中,HPV E6/E7 mRNA检测阳性率随宫颈病理级别升高而升高;5种初筛方式(mRNA检测、DNA检测、TCT检测、TCT+DNA、TCT+mRNA)在诊断≥HSIL病变的效能比较中,以HPV E6/E7 mRNA诊断效能最高,高于其它4种筛查方式,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测宫颈高级别病变一致性较好;阳性率随着宫颈病理级别的升高而升高,同时HPV E6/E7 mRNA在筛查≥HSIL病变的效能最优,有望成为临床宫颈癌初筛工具的候选。

TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变诊断价值的meta分析

目的系统评价液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值。方法计算机检索CNKI、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library、Embase、Science数据库中关于TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测诊断子宫颈癌前早期病变的相关文献,检索时限均为建库至2023年1月。由2位评价员按纳入标准和排除标准各自筛选文献、提取资料和评价质量后,采用RevMan 5.3、Stata 15.0、Meta-Disc 1.4统计软件分析TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值,计算诊断敏感性的Spearman相关系数验证阈值效应,进行异质性检验ꎻ计算合并敏感性、特异性、阳性似然比和阴性似然比、诊断比值比、SROC曲线下面积。结果共纳入15篇文献,合计6620例患者。Meta分析显示,合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比均不存在明显异质性(I2=31.6%、14.2%、10.9%、16.7%、17.2%,P=0.1162、0.2947、0.3311、0.2663、0.2610),采用固定效应模型进行统计分析,其结果分别为0.95(95%CI:0.94~0.96)、0.87(95%CI:0.86~0.88)、6.86(95%CI:6.26~7.51)、0.06(95%CI:0.05~0.07)、113.23(95%CI:86.44~148.31)。SROC曲线下面积为0.9414。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对诊断子宫颈癌前早期病变有重要价值。

TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值

目的:探讨液基薄层细胞学检查(TCT)联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈鳞状上皮内病变中的诊断价值。方法:选择在郑州大学第一附属医院病理科行细胞学筛查并在1个月内行宫颈组织病理学检查的女性患者624例,年龄18~81岁,均进行了TCT、p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测。对比病理学结果,评价各项检测方法单独或联合的诊断价值。结果:病理组织学结果显示624例患者中阴性(慢性炎症)183例,阳性441例(低级别鳞状上皮内病变176例、高级别鳞状上皮内病变227例、鳞状细胞癌38例);TCT阳性376例,阴性248例;p16/Ki-67双染阳性317例,阴性307例;HPV E6/E7 mRNA阳性360例,阴性264例;TCT+p16/Ki-67双染阳性425例,阴性199例;TCT+HPV E6/E7 mRNA阳性434例,阴性190例;3项联合阳性367例,阴性257例。以病理组织学结果为金标准,TCT+p16/Ki-67、TCT+HPV E6/E7 mRNA和3项联合诊断宫颈鳞状上皮内病变的敏感度分别为87.30%、89.11%、77.32%,特异度分别为78.14%、77.60%、86.34%。结论:TCT联合p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA检测可提高宫颈鳞状上皮内病变的诊断效能。

p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变检出效能的比较

目的比较p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA联合检测与单独检测对宫颈癌前病变的检出效能。方法收集2021—2022年接受宫颈癌前病变筛查的患者112例,液基薄层细胞检测(TCT)宫颈细胞的病变情况,并经病理学检查确诊。根据宫颈HPV E6/E7 mRNA检测试剂盒检测宫颈脱落细胞的HPV E6/E7 mRNA水平,利用CINtec PLUS细胞学试剂盒检测宫颈细胞p16/Ki-67双染情况。分析p16/Ki-67双染、HPV E6/E7 mRNA单独或联合检测对宫颈癌前病变检出效能的影响。结果112例宫颈癌前病变筛查患者的病理学结果显示,低度鳞状上皮内病变(LSIL)33例,高度鳞状上皮内病变(HSIL)79例。HPV E6/E7 mRNA阳性72例(64.3%),阴性40例(35.7%);p16/Ki-67双染阳性83例(74.1%),阴性29例(25.9%)。不同癌前病变组间HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄段癌前病变组间差别有统计学意义(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA表达和p16/Ki-67双染间差别无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA联合p16/Ki-67双染检测宫颈癌前病变的敏感度和准确性均高于两者单独检测,阴性预测值高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。两者联合检测HSIL的敏感度、特异度和阳性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测,准确性和阴性预测值均高于两者单独检测。另外,p16/Ki-67双染检测HSIL的敏感度、准确性和阴性预测值均高于HPV E6/E7 mRNA单独检测(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA和p16/Ki-67双染联合检测在宫颈癌前病变检出中具有临床价值。

高危型HPVE6/E7mRNA、TCT单独检测和分子细胞联合检测在宫颈病变筛查中的应用

目的探讨14种高危型HPV E6/E7 mRNA分子检测与液基薄层细胞学联合检测(TCT+HPV mRNA)在宫颈病变筛查中的应用价值。方法回顾性分析2021年1月至2021年12月3,907例行宫颈活检术患者的临床资料。样本以宫颈活检病理结果为依据,分为无鳞状上皮内病变组2,792例、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组742例、≥高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组373例(包含诊断为HSIL及以上级别的各类宫颈癌病例),以活检病理结果为金标准,对高危型HPV(16、18/45及其他11型)E6/E7 mRNA分子检测、TCT细胞学检测的结果进行统计分析。结果LSIL组联合检测的敏感度高于HPV mRNA及TCT单独检测,差异有统计学意义(P<0.001)。HSIL及以上组,HPV mRNA筛查敏感度优于TCT,差异有统计学意义(P<0.001);联合检测和HPV mRNA单独检测相比,敏感度差异无统计学意义(P>0.05)。HPV16、HPV18/45 mRNA分型检测特异性好,LSIL组为83.99%、≥HSIL组为82.94%。结论分子及细胞联合检测可提高LSIL及以上病变筛查的敏感度,临床可结合方法特异性、医疗成本等选择适当的检测方法。

β-D-葡聚糖通过下调HPV16 E6和重新激活p53调节HPV16阳性宫颈癌细胞的生物学行为

目的:研究β-D-葡聚糖在宫颈癌细胞中的作用及可能机制。方法:CCK-8法检测β-D-葡聚糖对宫颈癌细胞CaSki、HeLa和SiHa细胞增殖的影响,伤口愈合试验检测细胞迁移情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中HPV16 E6/E7、HPV18 E6/E7、p53和p21 mRNA表达水平,Western blot检测N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、p53、波形蛋白、p21蛋白表达水平。以宫颈癌CaSki细胞为研究对象,在雌性BALB/c小鼠皮下注射成瘤,验证β-D-葡聚糖在体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:β-D-葡聚糖对不同宫颈癌细胞增殖的影响不同,对CaSki细胞增殖有显著的时间依赖性抑制作用,对HeLa细胞增殖无显著影响,对SiHa细胞作用72h后表现为促进增殖作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、HeLa和SiHa细胞的迁移都有抑制作用(P<0.05)。β-D-葡聚糖对CaSki、SiHa的细胞周期有调节作用并能促进其凋亡(P<0.05),但对HeLa细胞无显著影响。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组CaSki和HeLa细胞中HPV16 E6 mRNA表达水平降低,p53和p21 mRNA表达水平在3种细胞中均升高(P<0.05)。与对照组相比,β-D-葡聚糖处理组3种细胞波形蛋白表达量降低,E-钙黏蛋白、p53和p21表达量增加(P<0.05)。结论:β-D-葡聚糖抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6表达并上调p53和p21表达,抑制HPV16阳性宫颈癌细胞的增殖、迁移,调节细胞周期,促进细胞凋亡,并在体内发挥抗肿瘤作用。

Nn6HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变早期筛查中的应用价值分析

目的探究HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变早期筛查中的应用价值。方法选取行宫颈病变筛查的患者90例,以病理活检结果为金标准,将患者分成宫颈炎症组、CIN1组、CIN2组、CIN3组以及宫颈癌组,比较HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA对早期宫颈病变的筛查价值,并分析HPV E6/E7 mRNA拷贝数与宫颈病变的关系。结果患者年龄>40岁时,HPV E6/E7 mRNA的阳性检出率显著高于HPV DNA阳性检出率(P<0.05)。宫颈炎症组、CIN1组与CIN2组中,HPV E6/E7 mRNA阳性检出率略低于HPV DNA阳性检出率,但两种检测方法之间的差异不显著(P>0.05)。CIN3组与宫颈癌组采用HPV E6/E7 mRNA检测的阳性检出率显著高于HPV DNA阳性检出率(P<0.05)。HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性与阳性预测值均显著高于HPV DNA检测(P<0.05),特异性略高于HPV DNA检测,但差异不显著(P>0.05)。另外随着患者宫颈病变程度的加深,HPV E6/E7 mRNA拷贝数显著增多(P<0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA检测对早期高级别宫颈病变的筛查价值高于HPV DNA检测,同时其拷贝数与患者宫颈病变程度密切相关。

TCT、HPV E6/E7 mRNA、hTERC基因扩增对子宫颈癌的筛查价值

目的 探究薄层液基细胞学检测(liquid-based thinprep cytologic test,TCT)、人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA、人端粒酶RNA(human telomerase RNA component,hTERC)基因扩增对子宫颈癌的筛查价值。方法 对2019年1月—2022年5月于山东电力中心医院就诊的68例疑似子宫颈癌患者进行TCT、HPV E6/E7 mRNA、h TERC基因扩增检测,均行阴道检查及病理检查(金标准)。对比各种方法诊断结果,并比较诊断价值。结果 根据金标准,阳性52例,阴性16例;TCT检查结果中阳性40例,阴性28例;联合检测结果中阳性48例,阴性20例;h TERC基因扩增结果表明子宫颈癌患者49例,非子宫颈癌患者19例;联合诊断的AUC值为0.849,95%CI为0.735~0.962,灵敏度为86.50%,特异度为85.00%。结论 TCT、HPV E6/E7 mRNA、hTERC基因扩增联合诊断对子宫颈癌患者具有较好的筛查价值。

比较HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测用于宫颈癌前病变筛查的临床价值

分析宫颈癌前病变的筛查方法HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测的临床价值,比较两种方法分别与细胞学联合检测的诊断性能。方法 收集2020年1月-2021年8月就诊于上海市嘉定区妇幼保健院分别行液基薄层细胞学(TCT)、HPV E6/E7 mRNA检测和HPV DNA检测的209例患者,最终以阴道镜组织活检结果为准,统计分析三种检测结果及宫颈活检结果的差异,探讨在宫颈癌前病变筛查中HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测的价值。结果209例宫颈筛查女性中HPV E6/E7 mRNA阳性率在慢性宫颈炎、LSIL、HSIL中逐渐的明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测无论在敏感性、特异性还是准确性方面都比TCT联合HPV DNA检测及其他三种检测方法高。TCT联合HPV E6/E7 mRNA 检测的曲线下面积(AUC) 为0.905, TCT联合HPV DNA 的曲线下面积(0.776)。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测应用于宫颈癌早期筛查具有更好的诊断价值,有利于减少阴道镜的转诊率和患者的负担。

Detection of Human Papillomavirus DNA and E6/E7 mRNA from HPV Genotypes 16, 18, 31 and 33 in Histologically Confirmed Cases of Cervical Cancer and Precancerous Lesions in Burkina Faso

Introduction: Cervical cancer, caused by persistent high-risk human papillomavirus (HPV) infection, remains a global public health problem. The cellular transformation and maintenance of the malignant phenotype of these HPVs are attributed to the viral oncoproteins E6 and E7. Objective: This study aims to detect the presence of human papillomavirus DNA and E6/E7 oncoprotein mRNA of HPV genotypes 16, 18, 31 and 33 in cases of cervical cancer and precancerous lesions, histologically confirmed in Burkina Faso. Methods: This descriptive cross-sectional study focused on cases of cervical cancer and high-grade intraepithelial neoplasia (CIN) and was conducted from June to December 2022. One hundred (100) samples of fixed and paraffin-embedded tissues were collected from the pathological anatomy and cytology laboratories of hospitals in the capital of Burkina Faso. High-risk human papillomavirus (HR-HPV) DNA was detected using multiplex real-time PCR, while the presence of E6 and E7 mRNA in cervical cancer and high-grade CIN samples was determined using real-time Reverse Transcriptase-PCR (RT-PCR) with TaqMan probes. Results: The mean age of women diagnosed with cervical cancer and high-grade CIN was 50.81 ± 13.65 years, ranging from 22 to 82 years. Cervical cancer and high-grade CIN were positive for at least one high-risk human papillomavirus (HR-HPV) in 80% of cases. The most prevalent genotypes observed were HPV16, 18, 31, and 33, collectively accounting for 70.08% of cases. Of the 89 samples that tested positive for HR-HPV genotypes 16, 18, 31, and 33, 88 (98.88%;95% CI: [94.58 - 99.94]) were also positive for the presence of mRNA encoding the E6 and E7 oncoproteins of HPV16, 18, 31, and 33. Conclusion: In the presence of HPV DNA, testing for E6 and E7 oncoprotein mRNA could serve as a promising biomarker and valuable tool for improved assessment of the progression to cervical cancer.