复合酶制备鳕鱼皮梯级胶原肽的初步研究

利用酶工程技术,以鳕鱼皮作为研究对象,研究开发鳕鱼皮梯级胶原肽制品。选取胰蛋白酶和碱性蛋白酶作为试验用酶,通过正交试验方法确定最适水解条件,胰蛋白酶:加酶量2.5%、温度45℃、pH6.5、时间4h;碱性蛋白酶:加酶量4%、温度50℃、pH8.0、时间3h。复合酶解的最适条件为:胰蛋白酶和碱性蛋白酶混合水解,加酶量分别为2.5%和4%、温度50℃、pH8.0、时间4h,蛋白质水解度26.1%。分离得到两多肽组分UF-1和UF-2,分子量(Mr)范围分别为:UF-1:2000u<Mr<6000u;UF-2:Mr<2000u,其中UF-2的含量最高为83.32%。用高效液相色谱分析水解产物相对分子量分布,确定复合酶解产物为蛋白胶原肽和游离氨基酸,其相对分子质量集中分布在1350u和145u左右。

海参水煮液酶解多肽的抗氧化活性

以海参水煮液的冻干粉为原料,选取中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶分别酶解制备多肽,测定其对·OH、O-2·和DPPH·自由基的清除能力,并与合成抗氧化剂TBHQ对比。结果表明,3种蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽对·OH、O-2·和DPPH·自由基的清除能力均随样品质量浓度的升高而增强;其中,中性蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽清除·OH、O-2·和DPPH·自由基的IC50值依次为8.565、6.658和2.015mg/ml,其对O-2·的清除能力优于TBHQ。经液相色谱法测定,中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解制得的海参水煮液多肽分子量分别分布在<2 500、<3 500和<1 000D的小分子肽中。

大豆多肽产品的主要成分分析

对一种大豆多肽产品的水的质量分数、氨基酸的主要种类及其质量分数、多肽分子量分布等进行了分析,结果表明:该样品水的质量分数为6.84%,多肽的质量分数为76.33%,人体所需的 8 种必需氨基酸的总质量分数为24.94%,多肽中以分子量小于1 000 Da的为主,游离氨基酸的质量分数约为 26.33%,表明大豆多肽具有较高的营养价值.与文献报道的结果相比,该产品的大豆蛋白水解度过高.

负重训练和补充大豆多肽干预大鼠骨骼肌衰老过程的实验研究

目的:探讨负重训练和补充大豆多肽干预大鼠骨骼肌衰老过程的作用效果。方法:56只雄性SD大鼠随机分为7组:成年组,模型组,D-半乳糖小负重组,D-半乳糖大负重组,D-半乳糖补肽组,D-半乳糖补肽小负重组,D-半乳糖补肽大负重组。6周后处死大鼠,制作冰冻切片,测试血清以及骨骼肌各项指标。结果:与成年组相比,模型组大鼠体重和每日摄食量分别呈现升高和下降的趋势,负重和补肽可以在一定程度上缓解两种趋势,但都无统计学意义;模型组大鼠骨骼肌细胞出现萎缩和退行性改变等衰老的迹象,负重和补肽可以在一定程度上减轻这种现象;模型组大鼠血清SOD、SOD/MDA比值和骨骼肌总蛋白含量显著低于成年组,血清MDA显著高于成年组,运动和营养干预各组显著逆转这种趋势,并有明显的交互作用;与成年组相比,模型组大鼠骨骼肌脂褐素含量显著升高,负重或补肽可以一定程度上缓解或逆转这种趋势,两种具有明显的交互作用。结论:负重训练或补充大豆多肽均可以有效的预防大鼠骨骼肌衰老过早的出现,两种方式联合运用效果更为明显。

海参多肽的抗氧化性能研究

利用海参自身的蛋白酶使其机体自溶,研究酶解液中不同分子量的海参多肽的抗氧化活性。采用超滤膜将海参酶解液分级分离,得到SPHI(>10kDa)、SPHII(5～10kDa)、SPHIII(3～5kDa)、SPHIV(<3kDa)4个分子量范围的海参多肽。采用化学发光体系,通过测定不同分子量海参多肽清除.OH/O2-·/H2O2的IC50,比较不同分子量海参多肽的抗氧化性,以VC做阳性对照。结果表明,4种组分对3种活性氧(ROS)的清除能力均强于VC,4种组分对3种活性氧的清除顺序分别是SPHIV>SPHIII>SPHII>SPHI。说明海参多肽对3种活性氧均有良好的清除效果,并呈现量效关系。

大豆蛋白水解物中肽分子分布的研究

研究采用超滤法与凝胶过滤色谱 (GFC)相结合实验方法就大豆蛋白酶解产物寡肽混合物的分子量的分布状况进行了测定。研究结果表明 ,木瓜蛋白酶与Asl .398蛋白酶的酶解物中以分子量在 10 0 0D以下的小肽为主 :木瓜蛋白酶解产物中分子量 10 0 0D以下的占 6 3.9% ,10 0 0～ 2 0 0 0D之间的 4 .6 4 % ,2 0 0 0～ 4 0 0 0D之间的占 8.2 1% ,4 0 0 0～ 10 0 0 0D之间的占 8.2 0 % ,分子量 10 0 0 0D以上的占 15% ;As1.398蛋白酶酶解物中分子量 10 0 0D以下的占 72 .1% ,10 0 0D～ 2 0 0 0D的占 6 .4 2 % ,2 0 0 0D～ 4 0 0 0D之间的占 2 .5% ,4 0 0 0～ 10 0 0 0D之间的占 3.92 % ,10 0 0 0D以上的占 15%

利用狭鳕加工废料制备胶原的表征及其生物学功能

以狭鳕加工废料为来源提取酸溶胶原并加以表征。该胶原在230nm处有最大紫外吸收,红外吸收光谱指示存在螺旋结构。电泳图谱分离出多个亚基,鉴定为I型胶原。该胶原有独特的氨基酸组成,甘氨酸达19.8%,羟脯氨酸占6.9%。酸水解制备的胶原多肽平均分子量区间为3.2～53kDa。胶原多肽具有不同的生物学功能:较高分子量的胶原多肽用于小鼠表现出止血、促凝血和促进外伤愈合的功能,而较低分子量的胶原多肽则对烫伤修复有显著的促进作用。

黑豆多肽的制备及其对乙醇脱氢酶活性的影响研究

目的制备黑豆多肽,研究其对乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）活性的影响。方法采用碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解法制备黑豆多肽。用截留分子量分别为5000、3500、2000、1000 Da的透析袋将黑豆多肽分离成4个相对分子量的肽段,对不同相对分子量的黑豆多肽进行抗氧化能力以及体外醒酒活性实验。结果黑豆多肽在碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解后的水解度达35.64%。不同分子量的黑豆多肽均具有对乙醇脱氢酶的激活作用和对羟自由基（·OH）的清除能力,且都随着黑豆多肽相对分子质量的减小而增强。相对分子质量在1000 Da以下的黑豆多肽对乙醇脱氢酶的激活率和羟自由基（·OH）的清除能力最强,分别达22.43%和24.39%。结论黑豆多肽具有较强的乙醇脱氢酶激活率,并且与黑豆蛋白质和其他来源的多肽相比,相对分子质量在500~2000 Da的黑豆多肽中亮氨酸和丙氨酸的含量较多,因此推测黑豆多肽具有较好的醒酒效果。

胶原蛋白酸解为胶原多肽的动力学研究

通过全波长扫描和凝胶渗透色谱,对水解过程动态及其多肽分子质量的变化进行了研究,考察了水解温度、酸用量等因素对水解动态的影响,并对酸法水解的过程动力学进行了分析。结果说明:鸭掌胶原蛋白酸法水解得到的多肽分子质量分布不均匀,分子质量大小随反应时间的增大而减小;增大酸用量和提高温度可使水解反应更彻底,水解过程可用一级反应动力学方程进行描述。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。

酿造酱油储藏期间呈味分子变化研究

文章对酿造酱油在储藏期内呈味分子的变化情况进行了研究。选取两种不同品牌的酿造酱油(酱油Ⅰ、酱油Ⅱ),分别在常温、50℃条件下储藏不同时间,测定其单宁含量、游离酚含量、氨基酸组成及含量、多肽分子量分布的变化情况,探讨这些呈味分子变化可能对酱油风味带来的影响。结果表明:随着储藏时间的延长,两种酱油的单宁含量在一定范围内上下波动,游离酚含量基本稳定;氨基酸组成不变,但其含量随储藏时间的延长发生明显变化;分子量<200Da的小分子肽逐渐聚合生成分子量为200～5000Da的多肽,进而生成分子量>5000Da的多肽。这些呈味分子变化的综合效应,使得成品酿造酱油的风味在储藏期间出现不可逆的变化。

蚕丝胶蛋白的多肽组分及其分子量的研究

以家蚕、野桑蚕、天蚕、柞蚕、樗蚕、蓖麻蚕为材料，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法对成熟幼虫丝腺分区进行丝胶蛋白多肽组成的研究。结果表明，六种蚕类丝胶蛋白表现出不同的多肽组成。

不同分子质量米糠多肽的抗氧化活性

采用截留分子质量为10000、3000D超滤膜对碱性蛋白酶水解米糠蛋白的水解液进行分离,获得不同分子质量(Mw)的米糠多肽混合物组分,以6种抗氧化活性指标对米糠多肽混合物组分的抗氧化活性进行评价。结果表明:米糠多肽的抗氧化活性与蛋白分子质量大小密切相关。Mw>10kD的米糠多肽对.OH的清除能力最强,属于活性氧自由基清除的抗氧化机制;Mw3～10kD的米糠多肽对Fe3+螯合能力最强,属于金属离子螯合的抗氧化机制;Mw<3kD的米糠多肽对O-2.的清除能力、DPPH自由基的清除能力、ABTS+.清除能力和Fe3+还原能力最强,属于电子转移(SET)的抗氧化机制。不同分子质量的米糠多肽抗氧化活性随多肽质量浓度的增加而增加。

枸杞多肽对D-半乳糖诱导小鼠的抗衰老作用及其可能机制

目的研究枸杞多肽对D-半乳糖(D-gal)衰老模型小鼠的影响及其可能作用机制。方法ICR小鼠60只,随机分为正常对照组、衰老模型组、枸杞多肽200,400,800mg/(kg.d)剂量组和100mg/(kg.d)维生素E(VitE)组。除正常组外均采用D-gal10mg/kg颈背部皮下注射,每日1次,连续注射5周,同时枸杞多肽和VitE组按20ml/(kg.d)灌胃给药。观察各组小鼠的行为学及学习记忆改变,并于5周后检测小鼠血清、心脏、肝脏、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及端粒酶活性。结果与正常对照组相比,衰老模型组小鼠体重增加明显减少,小鼠跳台错误次数明显增多,小鼠血清、心脏、肝脏和脑SOD和端粒酶活性降低,MDA含量增加(P<0.01)。与模型组相比,枸杞多肽组和VitE组小鼠体重增加升高(P<0.01),小鼠跳台错误次数减少(P<0.05),小鼠血清、心脏、肝脏和脑组织SOD活性升高,MDA含量减少(P<0.05);枸杞多肽200mg/(kg.d)剂量组及VitE组小鼠血清端粒酶活性有升高的趋势,但差异不显著;400和800mg/(kg.d)剂量组小鼠血清和心脏端粒酶活性升高(P<0.01),VitE组小鼠心脏端粒酶活性也明显升高;而各治疗组小鼠肝脏和脑组织端粒酶活性无明显变化。结论枸杞多肽对D-gal诱导衰老模型小鼠有抗衰老作用,其机制可能与提高小鼠血清、心脏、肝脏和脑组织SOD活性,减少MDA含量,以及提高血清和心脏端粒酶活性有关。

鸡胚低分子多肽对D-半乳糖拟衰老小鼠学习记忆的影响

目的探讨鸡胚低分子多肽对D-半乳糖(Gal)诱导的衰老小鼠学习记忆的影响。方法以孵化16d的鸡胚为原料经酸碱水解、反复酶解、超滤等过程制备鸡胚低分子多肽(LMP)。BALB/c小鼠48只,随机分为对照组、模型组、低分子多肽低剂量、和高剂量干预组,每组12只。模型组及两个干预组颈背部皮下注射80mg/(kgbw.d)Gal诱导衰老模型;对照组皮下注射8ml/(kgbw·d)生理盐水。前两组灌胃20ml/(kgbw·d)生理盐水;后两组分别灌胃10ml/(kgbw·d)和20ml/(kgbw·d)的鸡胚低分子多肽。采用Morris水迷宫观察小鼠学习记忆的行为学变化。结果模型组潜伏期比对照组明显延长(P<0.01),在平台象限游泳距离的百分比明显降低(P<0.01)。鸡胚LMP干预组与模型组比较,可明显缩短潜伏期(P<0.01),提高在平台象限游泳距离的百分比(P<0.01)。结论鸡胚低分子多肽有改善D-半乳糖拟衰老小鼠学习记忆的功效。

辐射交联制备含白芷香豆素的水凝胶及其性能研究

以白芷香豆素辐照抑菌稳定性研究为基础,采用辐射交联与冻/融循环方法制备含白芷香豆素的聚乙烯醇/羧甲基纤维素钠水凝胶材料。通过抑菌率、力学强度、吸水率及扫描电镜观察等方法研究香豆素含量及薄荷脑、小分子胶原肽复配对水凝胶结构与性能的影响。结果表明,白芷香豆素具有辐照稳定性,经辐照至剂量0、10和20kGy后,其对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度(MIC)分别为3.13、3.13和1.56mg/mL,抑菌性提高;对金黄色葡萄球菌的MIC均为6.25mg/mL;复合水凝胶中,随香豆素含量增大,水凝胶抑菌率先快速增大后逐渐减缓,拉伸强度逐渐降低;当添加质量分数为1%时,通过与薄荷脑复配可将水凝胶抑菌率提高到100%,而拉伸强度无明显变化,为0.7MPa;小分子胶原肽可提高白芷香豆素的分散性和抑菌率,拉伸强度略有降低,水凝胶的2、24h吸水率分别达到800%和1100%。

裙带菜多肽的制备及其抗氧化活性的研究

实验以裙带菜为原料制备裙带菜蛋白,通过单因素和正交试验确定了碱性蛋白酶为裙带菜抗氧化肽制备的最佳酶,最优酶解条件为:料液比4%、酶解温度55℃、酶解时间3.5h、加酶量7500U/g、pH 10.0,该条件下制备的裙带菜多肽的还原能力最强,700nm处的吸光值为0.411。对制备的裙带菜多肽进行超滤分级,从O_2^-·清除率、·OH清除率、DPPH自由基清除率、Fe^(2+)螯合率4个方面,探究了不同分子量裙带菜多肽的抗氧化能力。结果表明:裙带菜多肽对Fe^(2+)的螯合能力和DPPH自由基的清除能力较强,对O_2^-·和·OH的清除能力相对较弱,且总体呈现低分子量肽段的抗氧化活性较强,高分子量肽段的抗氧化活性较弱的趋势。

酶膜耦合法制备均一分子量胶原蛋白多肽

为得到均一分子量胶原蛋白多肽,首先用固定化胰蛋白酶对胶原蛋白进行柱上循环酶切,经过3次柱上循环酶切后目标肽收率达到最高,含量较初始胶原蛋白提高70%以上;然后采用超滤法对酶解液进行分离,胶原蛋白多肽数均分子量达到15 600Da,具有良好的分子分布形态(M_(10)=8 300Da,M_(90)=21 000Da),目标肽总收率为23%,相对收率为174%。将制备的均一分子量胶原蛋白多肽用于交联型血浆代用品的制备,产品具有理想的体内应用理化指标。通过优化膜分离组件与酶解循环条件,可制备适用于不同原料来源和不同应用需求的均一分子量胶原蛋白多肽。

负重训练和补肽对衰老大鼠骨骼肌α-actin mRNA和MHC异形体mRNA表达影响的研究

目的:探讨负重训练和补充大豆多肽对D-半乳糖衰老大鼠骨骼肌α-actin mRNA和MHC异形体mRNA表达的影响。方法:56只3月龄雄性SD大鼠随机分为7组、每组8只、成年组、模型组、小负重组、大负重组、补肽组、补肽小负重组、补肽大负重组。除成年组外,其余各组进行6周D-半乳糖造模同时施加相应大、小负重的跑台训练和补肽干预,6周后处死大鼠,测试各项指标。结果:与成年组相比,模型组大鼠骨骼肌α-actin、MHC-I、MHC-IIa、MHC-IIxmRNA表达量显著下降(P<0.01),MHC-IIbmRNA的表达量显著升高(P<0.01),负重训练或补肽干预均可以有效缓解这种骨骼肌衰老性的表现,两种方法具有显著的交互作用(P<0.01或P<0.05)。结论:负重训练或补充大豆多肽均可以有效缓解衰老大鼠骨骼肌α-actin和MHC异形体mRNA表达量的衰老性表现,并且两种方法联合应用效果好于单一干预因素。

血清TPA、sVCAM-1与子痫前期发病关系的初步探讨

目的:探讨组织多肽抗原(tissue polypeptide antigen,TPA)、可溶性血管细胞粘附分子-1(solublevascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)与子痫前期发病的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定子痫前期患者(实验组)和正常晚孕妇女(对照组)外周血中TPA、sVCAM-1的浓度,并与子痫前期患者病情及新生儿体重进行相关分析。结果:①轻、重度子痫前期患者外周血TPA浓度均高于正常孕妇,两者比较差异有统计学意义(P重<0.01,P轻<0.05),其中重度患者升高尤为明显;②重度患者外周血sVCAM-1浓度高于轻度患者和正常孕妇,差异有统计学意义(P重<0.01);③外周血中TPA浓度和sVCAM-1浓度呈正相关(r=0.419);④外周血TAP、sVCAM-1浓度与患者舒张压及24h尿蛋白定量呈正相关(r分别为0.521、0.374);与新生儿体重呈负相关(r=-0.614)。结论:随着子痫前期患者病情的加重,母血中TPA、sVCAM-1浓度均明显升高,提示胎盘滋养细胞凋亡增多、血管内皮细胞损伤加重。