ox-LDL/LOX-1信号通路在糖尿病相关疾病中的研究进展

氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的氧化修饰产物,具有很强的细胞毒性,是诱发脂毒性的主要异常脂类。植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)是一种分子量为50 kDa跨膜糖蛋白。研究表明,ox-LDL/LOX-1信号通路在糖尿病并发症、主动脉粥样硬化、类风湿性关节炎及肿瘤等疾病中具有重要的病理生理作用,特别是糖尿病相关疾病的进展与ox-LDL/LOX-1信号通路的激活或表达上调密切相关。本文通过对ox-LDL/LOX-1信号通路在糖尿病相关疾病中的研究进展进行综述,旨在为糖尿病相关疾病的诊治提供理论依据。

LOX-1与肿瘤的相关性研究进展

代谢紊乱和肿瘤发生、发展密切相关,靶向癌症代谢途径成为抗肿瘤治疗的新靶点。凝集素样氧化低密度脂蛋白(LOX-1)是氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的受体,两者通过结合发挥促进动脉粥样硬化形成的作用。LOX-1在多种实体肿瘤中高表达,证实其与肿瘤的发生、发展存在密切关系。在本综述中主要阐明了在前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肺癌、胃癌和乳腺癌这些不同的实体瘤中,LOX-1通过促进新生血管形成和促上皮–间充质转化等机制实现抗肿瘤作用。在肿瘤的相关性研究进展中,LOX-1有望成为抗肿瘤治疗的新靶点。

慢病毒介导LOX-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡

目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)RNA干扰慢病毒表达载体并观察LOX-1在氧化应激诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠LOX-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,构建慢病毒载体pLL3.7-LOXl。慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒。慢病毒侵染H9C2大鼠心肌细胞,RT-PCR鉴定对LOX-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测LOX-1对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制LOX-1能抑制H_2O_2诱导的细胞活力下降,减轻H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡,与H_2O_2组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建靶向大鼠LOX-1基因RNAi慢病毒载体,LOX-1激活可能在H_2O_2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用。

芹菜素对动脉粥样硬化大鼠LOX-1和NF-κB表达的影响

目的探究芹菜素对动脉粥样硬化大鼠LOX-1和NF-κB表达的影响。方法构建大鼠动脉粥样硬化模型,SD大鼠随机分为正常组、模型组、芹菜素低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg),阳性对照组(辛伐他汀14 mg/kg)。HE染色法光镜观察大鼠主动脉组织病理改变,生化分析仪检测大鼠血脂(TC、TG、LDC-C、HDL-C)水平,qRT-PCR检测大鼠主动脉组织LOX-1 mRNA表达,Western blot检测大鼠主动脉组织NF-κB蛋白表达。结果与正常组比较,模型组TC、TG、LDC-C水平升高(P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01),LOX-1 mRNA、NF-κB p65蛋白表达增强(P<0.01)。加入不同剂量的芹菜素干预后,TC、TG、LDC-C水平降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平升高(P<0.05,P<0.01),LOX-1 mRNA、NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论芹菜素对动脉粥样硬化大鼠有改善作用,其分子机制可能与抑制LOX-1、NF-κB表达有关。

银杏叶提取物对活化血小板刺激人冠状动脉内皮细胞产生ROS以及表达LOX-1和磷酸化p38MAPK的影响

目的研究银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb)对活化血小板刺激人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelialcells,HCAECs)产生ROS和表达LOX-1、磷酸化p38MAPK的影响。方法将HCAECs随机分为空白组,活化血小板组和活化血小板+银杏叶提取物低、中、高剂量组(分别为4、40、400μg/ml),应用H2DCF-DA探针、Western印迹分别检测ROS的产生以及LOX-1和磷酸化p38MAPK的表达。结果活化血小板可以介导HCAECs表达ROS、LOX-1和磷酸化p38MAPK(P<0.05);EGb能明显抑制ROS的产生以及LOX-1和磷酸化p38MAPK的表达(P<0.05),随着EGb浓度增高,ROS和LOX-1抑制效果越明显,磷酸化p38MAPK现象不明显。结论 EGb对HCAECs的保护机制可能与抑制ROS、LOX-1和磷酸化p38MAPK的表达有关。

原发性高血压患者血浆脂联素和LOX-1的水平变化及相关性

目的:探讨脂联素、LOX-1与原发性高血压发生、发展的关系。方法:收集120例原发性高血压患者,根据血压水平分组,高血压1级(37例),2级(40例),3级43例,同时选取健康对照40例。于肘静脉采血,采用ELISA法检测血浆脂联素及sLOX-1浓度,同时检测相关生化指标。结果:1、2、3级组脂联素水平均低于健康对照组,且3级组脂联素水平明显低于1级组(P<0.01);相反,1、2、3级组sLOX-1的水平均高于对照组,且3级组LOX-1水平明显高于1级组(P<0.01);血浆脂联素和sLOX-1水平呈显著负相关(r=-0.903,P<0.05)。结论:原发性高血压的发病与血浆脂联素及sLOX-1水平有密切关系。

银杏叶提取物对脂多糖介导的血管内皮细胞低密度脂蛋白受体LOX-1表达的影响

[目的]观察银杏叶提取物(GBE50)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化低密度脂蛋白受体(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor,LOX-1)表达的影响。[方法]应用LPS刺激体外培养的HUVECs 24h。RT-PCR方法检测(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor mRNA,LOX-1 mRNA)表达水平;采用蛋白质印迹分析检测LOX-1蛋白表达水平。[结果]LPS(1μg/mL)上调LOX-1 mRNA和蛋白表达水平,GBE50(40μg/mL)轻度抑制LPS介导的LOX-1 mRNA(P<0.005)和蛋白表达增加(但没有统计学意义,P>0.05),GBE50(80μg/mL)及NF-κB抑制剂CAPE(20μg/mL)明显抑制LOX-1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01)。[结论]GBE50可能通过抑制LOX-1表达,在防治动脉粥样硬化中发挥作用。

吡格列酮对高脂饮食兔主动脉LOX-1表达的影响

目的探讨吡格列酮对高脂饮食下兔主动脉LOX-1表达的影响及其对动脉粥样硬化的作用。方法设立正常饮食、高脂饮食及高脂饮食加吡格列酮干预3组,通过比较主动脉病理形态学改变、血脂的变化、LOX-1分子及mRNA的表达进行研究,采用免疫组化检测兔主动脉LOX-1分子的表达,采用RT-PCR检测LOX-1mRNA的表达。结果吡格列酮能减轻高脂饮食所致的内膜增厚和平滑肌增生,减轻高脂血症所致动脉粥样硬化的发展。吡格列酮还能明显升高HDL,对TC、LDL、TG和BS无明显影响。高脂饮食刺激兔主动脉LOX-1分子及mRNA的表达,吡格列酮能显著减轻这种作用。结论吡格列酮能减轻高脂饮食兔主动脉LOX-1分子及mRNA的表达,这可能是噻唑烷酮类药物抗动脉粥样硬化的重要作用机制。

搜风祛痰中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA及NF-κB mRNA表达的影响

目的观察搜风祛痰中药对AngⅡ诱导体外培养人脐静脉内皮细胞凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与核因子-κB基因表达的影响。方法制备家兔中药复方活心汤含药血清。采用酶消化法体外培养HUVECs2～3代用于实验。采用RT-PCR法测定脐静脉血管内皮细胞LOX-1 mRNA水平。随机分为正常对照组、AngⅡ组、AngⅡ+低剂量中药血清组、AngⅡ+中剂量中药血清组、AngⅡ+高剂量中药血清组。用中药先孵育2h后再加入0.5μmol/LAngⅡ刺激2h,取出细胞盖玻片固定。结果与对照组比较,活心汤含药血清可抑制AngⅡ导致的细胞损伤,减少LOX-1mRNA及NF-κB mRNA的表达。结论活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,保护血管内皮细胞功能。

近红外荧光分子标记的LOX-1抗体靶向小鼠动脉粥样硬化模型的成像研究

目的:探讨近红外荧光分子标记的凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)抗体探针在ApoE-/-鼠主脉动脉粥样硬化近红外荧光(NIRF)成像中的可行性。方法:将ApoE-/-小鼠以高脂饮食喂养20周,建立动脉粥样硬化模型。将24只ApoE-/-动脉粥样硬化模型小鼠随机分为3组,即抗LOX-1抗体-NIR-797组、非特异性IgG-NIR-797组和单纯磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组8只,分别经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797、非特异性IgG-NIR-797和单纯PBS。另取8只C57BL/6小鼠作为对照组,经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797,注入探针24 h后取小鼠主动脉及主要脏器行NIRF成像,再取主动脉行油红O染色,比较NIRF成像面积和油红O染色面积比例的差异。结果:ApoE-/-小鼠经尾静脉注入抗LOX-1抗体-NIR-797探针24 h后,NIRF成像显示有强荧光信号聚集于小鼠离体主动脉的斑块区域,而注入非特异性IgG-NIR-797组斑块区信号明显减弱,PBS组及对照组C57BL/6小鼠仅见较弱荧光信号,单因素方差分析结果显示差异有统计学意义(F=232,P<0.001)。NIRF阳性面积与斑块油红O染色面积比例分别为(42.70±1.25)%和(42.78±1.51)%,两者差异无统计学意义(t=0.409,P=0.695)。结论:近红外荧光分子标记的抗LOX-1抗体探针能够特异性地显示ApoE-/-鼠主动脉粥样硬化斑块的分布,可以作为小鼠动脉粥样硬化斑块成像的有效工具,LOX-1将来可能成为一个新的评价动脉粥样硬化的良好靶点。

中国荷斯坦奶牛LOX-1基因3′UTR的PCR-SSCP分析

为了寻找影响奶牛产奶性状的候选基因,采用PCR-SSCP分子标记方法,对中国荷斯坦奶牛LOX-1基因3′非编码区进行了多态性分析。结果表明,在中国荷斯坦奶牛中检测的LOX-1基因3′UTR有AA型、BB型和AB型3种基因型,其频率分别为0.1374,0.3130和0.5496;不同基因型与中国荷斯坦奶牛的乳脂率之间有显著的相关性(P<0.05),但对乳蛋白率、产奶量和体细胞评分(SCS)影响不大,未达到显著水平。初步认为LOX-1基因可能是控制中国荷斯坦奶牛产奶性能的一个候选基因,或是与之存在紧密遗传连锁的分子标记。

LOX-1研究进展

LOX 1是一种Ⅱ型膜蛋白 ,按结构分类 ,它属于C型选择素家族。它可以结合、中和、降解ox LDL ,还具有介导血小板与内皮细胞的相互作用等功能。LOX 1的表达不是结构性的 ,在血管紧张素Ⅱ、剪切力、肿瘤坏死因子α、肿瘤生长因子β、内皮素 1作用下 ,其表达上调。对血浆中可溶性LOX

搜风祛痰法对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药对血管紧张素II致体外培养人脐静脉内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响。方法:制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs 2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定内皮细胞LOX-1 mRNA,随机分成5组:正常对照组,AngⅡ组,低浓度药物血清+AngⅡ组中浓度药物血清+AngⅡ组高浓度药物血清+AngⅡ组。结果:活心汤可抑制AngⅡ所致的内皮细胞损伤,减少LOX-1 mRNA的表达。结论:活心汤可抑制AngⅡ所致的HUVECs损伤,可以保护血管内皮功能。

LOX-1与动脉粥样硬化

氧化低密度脂蛋白(oxidizedlow-densitylipoprotein,Ox-LDL)是修饰脂蛋白中的一种,其与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。1997年,Sawamura等在牛主动脉内皮细胞上发现了Ox-LDL的一种新型受体,即植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-likeoxidizedlowdensitylipoproteinreceptor-1,LOX-1),其在结构和功能上不同于其他类型的巨噬细胞清道夫受体。该文介绍LOX-1在近几年来的一些研究新进展,及其与动脉粥样硬化发病机制间的相互关系。

西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响

目的研究西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响。方法健康SD雄性大鼠,随机分为4组:空白对照组、模型组、西红花酸高剂量组、西红花酸低剂量组。高脂饲料建立大鼠实验性动脉粥样硬化模型,测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。同时取主动脉做病理切片检查。RT-PCR、Westernblotting技术检测主动脉LOX-1的基因与蛋白表达水平,观察西红花酸对其血管平滑肌细胞LOX-1表达的影响。结果高、低剂量的西红花酸能显著降低动脉粥样硬化大鼠血清TC、TG和LDL-C含量;明显降低主动脉LOX-1的表达。结论西红花酸可明显下调动脉粥样硬化大鼠LOX-1的表达。

血清可溶性LOX-1及外周血单核细胞LOX-1 mRNA在急性冠脉综合征中的临床意义

目的检测血清可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和外周血单核细胞LOX-1mRNA在急性冠脉综合征患者中的表达,探讨其在评价预测急性冠状动脉综合征(ACS)的意义。方法用酶联免疫法ELISA测定ACS组(n=75)、SAP(稳定型心绞痛)组(n=60)及正常对照组(n=40)血浆ox-LDL和LOX-1的水平,并分离外周血单核细胞检测LOX-1mRNA的表达。结果 ACS组ox-LDL、LOX-1、外周血单核细胞LOX-1mRNA水平均显著高于SAP组和CON组(P<0.05);ACS组患者血浆LOX-1水平与ox-LDL呈显著正相关,ACS组患者外周血单核细胞LOX-1mRNA表达水平与血浆ox-LDL呈显著正相关。结论 ACS患者血浆可溶性LOX-1和外周血单核细胞LOX-1mRNA水平均明显升高,二者可以作为诊断早期ACS的一个有效指标。

体外研究人LOX-1受体功能的细胞模型建立

目的研究LOX-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制。方法根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力。结果pEGFP-LOX-1重建质粒经测序证实克隆的LOX-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍。表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞。结论成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具。

ox-LDL对JEG-3细胞系LOX-1和凋亡相关分子表达的调控及意义

目的检验ox-LDL对滋养细胞中Lox-1和凋亡相关分子表达的调控,探讨ox-LDL和Lox-1与子痫前期发病的关系。方法JEG-3细胞培养并传代;采用细胞免疫化学方法、RT-PCR和Western-blot进行JEG-3细胞LOX-1和凋亡相关基因的检测。结果细胞免疫化学检测到LOX-1和Caspase-3在JEG-3细胞浆及细胞膜中均有表达;加入ox-LDL继续培养24和48h后,细胞的LOX-1和Caspase-3表达显著增强,同时加入LOX-1抑制剂角叉菜胶后,又逆转上述作用;RT-PCR与Western-blot结果一致,ox-LDL可剂量和时间依赖地诱导JEG-3细胞LOX-1、Caspase-3和Bax蛋白及mRNA的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,LOX-1抑制剂角叉菜胶可逆转上述作用。ox-LDL对JEG-3细胞LOX-1表达的调控与Caspase-3和Bax的趋势一致,而与Bcl-2的趋势相反。结论ox-LDL可诱导滋养细胞LOX-1的表达,并可能导致滋养细胞凋亡增加,为进一步解释子痫前期的发病机制提供了实验基础。

氧化低密度脂蛋白对大鼠肾脏系膜细胞增殖及LOX-1、TNF-α表达的影响

目的：应用MTT酶标分析法,检测在不同浓度、不同时长氧化低密度脂蛋白（ ox-LDL）干预下的大鼠肾小球系膜细胞（ RMC）的增殖情况以及不同浓度ox-LDL干预下LOX-1和TNF-α的表达,探讨其相互关系。方法：体外培养RMC,使用不同浓度ox-LDL在不同时间对RMC干预,经MTT法检测,并进行分组分析。用浓度为5μg/ml和50μg/ml的ox-LDL干预RMC 24 h,使用RT-PCR法和Western blot法检测LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达量,并进行分析比较。结果：Ox-LDL干预RMC 在时间点为24 h的结果显示,在1-30μg/ml范围内呈生长促进效应,浓度大于30μg/ml后呈生长抑制效应；干预48 h组对细胞效应趋势基本与作用24 h后一致,但生长抑制效应从30μg/ml开始；而72 h组,ox-LDL在各个浓度均显示出生长抑制效应。5μg/ml及50μg/ml浓度ox-LDL干预RMC后,均可使LOX-1和TNF-α的mRNA和蛋白表达升高,且50μg/ml较5μg/ml效果明显,结果差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Ox-LDL对RMC增殖影响具有浓度及时间依赖性。较低及较高浓度ox-LDL均能导致RMC中LOX-1和TNF-α的表达增高,且浓度较高时效果更明显。其机制可能为ox-LDL导致LOX-1表达增多,引起炎症因子的产生和趋化,发生细胞损伤,提示脂质代谢紊乱在肾脏疾病中的重要作用。

搜风祛痰中药对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响

目的:探讨AngII对人脐静脉内皮细胞Lox-1mRNA及iNOSmRNA表达的影响,阐明搜风祛痰法的中药调控Lox-1与iNOS在AS过程中可能性的作用机理。方法:家兔中药血清的制备,采用酶消化法培养HUVECs2-3代用于实验,采用RT-PCR法测定脐内皮细胞LOX-1mRNA及iNOSmRNA,随机分为5组:正常对照组,AngII组,低浓度中药血清+AngII组,中浓度中药血清+AngII组,高浓度中药血清+AngII组。结果:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达明显上调。中药血清使Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,其中低中剂量组之间有统计学意义,中高剂量组之间没有统计学差异。结论:AngII使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达上调;搜风祛痰中药使血管内皮Lox-1mRNA及iNOSmRNA的表达下降,中剂量的中药在表达上效果显著,起到良好的抗AS作用。