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羊种布鲁氏菌LpxB基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析
被引量:
10
1
作者
聂鑫
赵天靖
+8 位作者
曹瑞勇
彭冬梅
李国华
李亚颖
徐开莲
朱华培
庞峰
王凤阳
杜丽
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第7期1681-1687,共7页
试验旨在克隆羊种布鲁氏菌LpxB基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。以布鲁氏菌M5-90株基因组为模板,参照GenBank中M5-90株基因组DNA序列,用DNAMAN软件设计1对引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增得到大小为1 188bp的LpxB基因,将...
试验旨在克隆羊种布鲁氏菌LpxB基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。以布鲁氏菌M5-90株基因组为模板,参照GenBank中M5-90株基因组DNA序列,用DNAMAN软件设计1对引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增得到大小为1 188bp的LpxB基因,将其连接入pMD20-T载体上,构建pMD20-T-LpxB重组质粒,将其转化到E.coli DH5α感受态细胞中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定正确后扩大培养。将BamHⅠ和XhoⅠ双酶切获得的LpxB片段连接入pET-28a,构建重组质粒pET-28a-LpxB,转化到E.coli BL21(DE3)中,双酶切鉴定正确后扩大培养。经IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting对蛋白进行鉴定。运用DNAMAN、BioEdit等软件对LpxB基因编码的氨基酸序列进行分析。结果表明,本研究成功克隆了LpxB基因并进行了蛋白表达,在LpxB蛋白二级结构中,α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占52.41%、14.94%、8.10%和24.55%。
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关键词
羊种布鲁氏菌
lpxb
基因
克隆
原核表达
生物信息学分析
下载PDF
职称材料
题名
羊种布鲁氏菌LpxB基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析
被引量:
10
1
作者
聂鑫
赵天靖
曹瑞勇
彭冬梅
李国华
李亚颖
徐开莲
朱华培
庞峰
王凤阳
杜丽
机构
海南大学农学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第7期1681-1687,共7页
基金
国家自然科学基金(31460670)
文摘
试验旨在克隆羊种布鲁氏菌LpxB基因并进行原核表达和蛋白的生物信息学分析。以布鲁氏菌M5-90株基因组为模板,参照GenBank中M5-90株基因组DNA序列,用DNAMAN软件设计1对引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增得到大小为1 188bp的LpxB基因,将其连接入pMD20-T载体上,构建pMD20-T-LpxB重组质粒,将其转化到E.coli DH5α感受态细胞中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定正确后扩大培养。将BamHⅠ和XhoⅠ双酶切获得的LpxB片段连接入pET-28a,构建重组质粒pET-28a-LpxB,转化到E.coli BL21(DE3)中,双酶切鉴定正确后扩大培养。经IPTG诱导其表达,用SDS-PAGE和Western blotting对蛋白进行鉴定。运用DNAMAN、BioEdit等软件对LpxB基因编码的氨基酸序列进行分析。结果表明,本研究成功克隆了LpxB基因并进行了蛋白表达,在LpxB蛋白二级结构中,α-螺旋、伸展链、β-折叠和无规卷曲分别占52.41%、14.94%、8.10%和24.55%。
关键词
羊种布鲁氏菌
lpxb
基因
克隆
原核表达
生物信息学分析
Keywords
Brucellamelitensis
lpxb gene
cloning
prokaryotic expression
bioinformatics analysis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
羊种布鲁氏菌LpxB基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析
聂鑫
赵天靖
曹瑞勇
彭冬梅
李国华
李亚颖
徐开莲
朱华培
庞峰
王凤阳
杜丽
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
10
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