群体感应淬灭酶LsrK蛋白表达纯化

对群体感应淬灭酶LsrK蛋白进行重组表达及纯化。构建重组工程菌Escherichia coli BL21(DE3)-pET-28a-lsrK,利用乳糖自诱导的方法诱导表达重组蛋白LsrK,并利用亲和层析和凝胶过滤层析进行纯化。LsrK蛋白经凝胶过滤层析后,纯度较高,蛋白浓度达到28.6mg/L发酵液,为进一步进行LsrK蛋白的结构解析及功能研究奠定了基础。

LsrK激酶活力测定反应体系的优化及其稳定性研究

对群体感应淬灭酶LsrK的活力测定反应体系进行优化,测定LsrK的激酶活力和稳定性。以信号分子AI-2为底物,对反应体系中ATP浓度、发光波长和LsrK激酶浓度进行优化,利用Kinase-Glo发光试剂盒测定激酶活力,并在优化反应体系下测定LsrK激酶活力的稳定性。确定反应体系中ATP浓度为3μM,LsrK激酶浓度为15μM,发光波长为560nm;LsrK在30℃条件下,随时间延长,激酶活力逐渐降低,12h时酶活力基本完全消失。为进一步进行LsrK蛋白的功能研究及酶制剂的制备奠定了基础。