重组AcNPV载体携带的外源基因在家蚕中的动态表达

重组AcNPV作为用于昆虫培养细胞的真核表达载体,感染部分家蚕品种,感染症状较BmNPV轻,可以存活较长时间,且不会经口传染,因此将它用作一种瞬时表达载体来研究基因的功能及其表达调控具有一定的优越性。该实验构建了分别由A3和Polh启动子控制的分泌型萤火虫荧光素酶为报告基因的供体质粒,通过"Bac-to-Bac"原理得到重组杆状病毒的bacmid,转染Sf9细胞获得具有感染性的病毒。用Real-time PCR方法测定其拷贝数后,注射五龄起蚕和蛹。通过测定血液中荧光素酶活性,比较了由A3和Polh启动子分别控制的外源蛋白在家蚕中的动态表达。结果表明A3启动子控制的外源基因进入家蚕体内后在前24 h表达高于Polh启动子,Polh启动子控制的外源基因则在病毒注射48 h后逐渐高于A3启动子。蛹血中的动态表达情况与蚕血中情况基本一致。文章还应用Real-time定量RT-PCR对于A3和Polh启动子的不同表达动态进行了分析。