沙门菌快速血清分型策略的应用

为建立一种对临床沙门菌株进行快速血清分型的策略,本研究尝试将玻片凝集法和液相芯片法进行联合应用。首先利用玻片凝集法对467株动物源沙门菌进行鉴定,然后对不能直接利用玻片凝集法鉴定血清型的沙门菌采用液相芯片法进行补充鉴定。结果显示,利用玻片凝集法可以直接检测409株沙门菌的O抗原和H抗原,包含49种血清型;结合液相芯片法在1 d内完成了其余58株沙门菌的O抗原和H抗原单因子的鉴定,共涉及10种血清型。结果表明,玻片凝集法具有快速鉴定O抗原优势,液相芯片法具有快速鉴定H抗原优势,2种方法结合应用的策略可以快速、高效地实现沙门菌血清分型的目的,可作为沙门菌血清型快速鉴定方案并予以推广。

靶序列富集多重PCR-液相芯片联合检测4种常见呼吸道病毒的初步应用

目的呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体,为快速准确诊断其感染,文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染症状的患儿咽拭子标本120例及30例正常对照标本,分别纳入患儿组和对照组。针对A型流感病毒(Flu A)、B型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSVA)和B型(RSVB)的保守区序列分别设计并合成了特异性引物、探针和通用引物,构建4种病原体阳性参比品,通过对扩增和杂交条件的优化,建立了靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和Luminex液相芯片(x MAP)技术相结合的检测系统,并对该检测系统进行了特异性、灵敏度评价。收集以急性上呼吸道感染为主要表现的患儿咽拭子标本,用上述建立的方法进行检测分析,分别与单病毒基因荧光定量PCR检测方法及x TAG液相芯片法进行比对检测。结果建立了Flu A、Flu B、RSVA和RSVB4种呼吸道病毒的特异性快速分子检测方法且灵敏度可达10拷贝/μL。用快速分子检测方法和单病毒基因荧光定量PCR法对120例疑似患儿咽拭子标本进行检测,快速法阳性检出率为31.7%(38/120),荧光定量法阳性检出率为29.2%(35/120)。经一致性检验分析提示2种方法一致性较强(k>0.7)。部分标本同时采用x TAG液相芯片试剂盒进行检测,经一致性检验分析提示2种方法一致性较好(k>0.6)。结论临床的初步应用证实了4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法具备灵敏、特异、快速等优点,为临床早期、准确判断呼吸道感染的病原体提供实验依据。

庆大霉素诱导的大鼠急性肾损伤模型中尿液生物标志物NGAL的研究

目的:评价尿液中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)作为药物肾毒性生物标志物的实用性。方法:通过对Wistar大鼠腹腔注射60和120 mg·kg-1庆大霉素,每天给药1次,连续给药10 d,建立了大鼠急性肾损伤模型。应用ELISA和Luminex液相芯片方法检测分析各组动物尿液NGAL浓度,并与传统血清肾功能指标进行比较。结果:与对照组相比较,庆大霉素给药组动物肾脏重量的变化与给药时间及剂量具有一定相关性。组织病理学分析结果证实随着给药剂量及给药时间的增加,庆大霉素给药组动物出现肾小管细胞坏死损伤的动物数增加,且病变程度也随之加重。尿液生物标志物分析结果表明ELISA和Luminex液相芯片方法检测结果一致性较好,低、高剂量组动物给药后第4天,尿液中NGAL浓度开始大幅度升高,自第8天起,具有明显时间和剂量效应关系。受试者操作特性曲线(ROC)结果也表明NGAL的曲线下面积(AUC)明显高于肌酐(Cr),具有更高的灵敏度和特异性。结论:研究结果表明尿液NGAL可作为一种药物肾毒性的候选生物标志物,在药物的大鼠临床前安全性研究中将具有良好的应用前景。