LUNX基因增强子的克隆及调控活性分析

目的鉴定人肺特异性X蛋白(lung specific X protein,LUNX)基因的增强子及其调控活性。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增生物信息学预测的3个增强子片段(E1:+3770～+3959bp;E2:+6454～+6555bp;E3:+14553～+14652bp),通过荧光素酶报告基因表达体系检测转录活性。结果 PCR产物经测序证实后,分别定向连接至pGL3-Promoter载体中报告基因启动子上游的Kpn I和Xho I酶切位点和报告基因下游的BamHI和Sal I酶切位点上,经酶切鉴定后,构建了6种荧光素酶报告基因表达体系。以pSV-β-Galactosidase质粒为内对照,瞬时转染HEK293细胞,培养48h后检测细胞裂解液中荧光素酶活性。当3个DNA片段位于报告基因启动子上游时,均不具有增强转录的能力。将它们分别连接于报告基因下游时,E1和E3所调控的荧光素酶活性分别是对照pGL3-Promoter的2.83倍(P<0.05)和1.59倍(P<0.05)。结论 LUNX基因的+3770～+3959bp和+14553～+14652bp序列具有增强转录的能力,为LUNX表达调控机制的深入研究奠定了基础。

非小细胞肺癌患者外周血和骨髓中LUNX基因表达的临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血和骨髓微转移的肺特异性X蛋白(LUNX)基因诊断的临床意义。[方法]应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对42例肺癌患者和12例肺良性病变患者的外周血和骨髓中LUNX基因mRNA表达进行检测。[结果]42例肺癌患者有14例在外周血中检测到LUNX基因mRNA的表达,阳性表达率为33.3%,有10例在骨髓中检测到LUNX基因mRNA的表达,阳性表达率为23.8%。LUNXmRNA的表达与CK-19基因mRNA的表达率无显著性差异(P>0.05)。外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及TNM分期均存在密切关系(P<0.05)。[结论]外周血和骨髓LUNX基因mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。

有助于确诊肺癌扩散的LUNX基因

肺癌即使是在早期发现并加以切除,仍可能是致命性的。大约1/4经治疗的Ⅰ期肺癌病人最终死于肺癌复发。Ⅰ期肺癌未显示出可见的肿瘤扩散至淋巴结或肺部以外的其他组织的迹象。日本科学家现已发现一个基因,该基因可帮助医生确定哪些病人很可能出现肿瘤复发。这个被称作LUNX的基因仅在肺部组织和原发部位以及扩散的肿瘤组织中有活性。

LunX和CK19基因定量表达在肺癌诊断及疗效观察中的应用研究

目的:探讨采用荧光定量RT-PCR检测肺癌患者外周血LunX和CK19基因的表达,以及在肺癌诊断和疗效观察中的应用价值。方法:建立定量检测LunX和CK19 mRNA的荧光定量RT-PCR技术,检测在肺癌患者外周血的表达及治疗前后的表达水平的比较。结果:外周血标本中治疗前病例、治疗后病例和肺部良性病例LunX mR-NA的表达分别为83.87%(26/31)、46.67%(7/15)和10%(1/10)。治疗前肺癌组和肺部良性病例组LunX mRNA的表达差异有统计学意义,χ2=15.2,P<0.001;肺癌治疗前后LunX mRNA的表达也有统计学意义,χ2=4.9,P<0.05。正常对照10例和非肺癌的肿瘤患者4例LunX mRNA的表达均为阴性,与LunX基因相比较,CK19基因灵敏度相近,但特异性较差。结论:荧光定量RT-PCR检测LunX基因的表达可以作为肺癌诊断及治疗前后疗效考核的重要参考指标,应用价值优于CK19基因。

lunx mRNA RT-PCR检测肺癌的微转移

目的:建立以lunx为靶基因,RT-PCR检测肺癌患者区域淋巴结和外周血中微转移的方法,检验lunxmRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法:以肺部良性疾病30例、健康人10例外周血为对照,采用逆转录PCR(reversetranscriptasepolymerasechainreaction,RT-PCR)法半定量检测lunxmRNA的表达,研究26例肺癌患者外周血微转移情况;以因肺良性疾病切除的11枚淋巴结为对照,采用RT-PCR法半定量检测lunxmRNA表达研究肺癌手术切除区域淋巴结44枚微转移情况并与常规病理对比。结果:20例非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)外周血lunxmRNA阳性率为60.0%,6例SCLC中4例(67.0%)外周血lunxmRNA阳性。在44枚肺癌患者区域淋巴结中16枚(36.4%)表达lunxmRNA,高于常规病理的13.6%(P<0.05);而30例肺良性疾病和10例健康者外周血以及11枚正常淋巴结中均不表达lunxmRNA。结论:lunxmRNART-PCR法检测肺癌患者外周血和手术切除区域淋巴结微转移具有较高的特异性和敏感性,有助于指导临床治疗。

非小细胞肺癌组织BCRP、LUNX mRNA表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、肺组织特异度蛋白X(LUNX)mRNA表达变化,并探讨二者在NSCLC诊断、疾病进展评估及预后判断中的作用。方法选取NSCLC组织54例份作为观察组,正常肺组织24例份作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组组织BCRP、LUNX mRNA相对表达量,分析观察组中二者的相关性及其在NSCLC诊断中的价值。比较观察组不同临床病理参数患者癌组织中的BCRP、LUNX mRNA相对表达量,随访并比较BCRP、LUNX高低表达患者的中位生存时间。结果观察组与对照组BCRP mRNA相对表达量分别为0.60±0.27、0.19±0.09,LUNX mRNA相对表达量分别为12.94±2.10、9.41±4.25;两组比较P均<0.05。观察组BCRP、LUNX mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.426,P<0.01)。BCRP、LUNX联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)为0.824,均高于LUNX、BCRP单独诊断的0.792、0.761,联合诊断的灵敏度为70.37%、特异度为83.33%。观察组中、低分化者BCRP mRNA相对表达量低于高分化者(P<0.05);观察组不同性别、年龄、组织学分型、临床分期、分化程度、淋巴结转移者的BCRP、LUNX mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。BCRP、LUNX高表达患者的中位生存时间均短于低表达患者(P均<0.05)。结论 NSCLC组织中BCRP、LUNX表达均升高,且BCRP高表达与肿瘤分化程度有关,二者联合检测有助于NSCLC患者的诊断和预后判断。

LUNX mRNA在恶性胸腔积液中表达及其诊断价值

目的检测LUNX mRNA在非小细胞肺癌胸腔积液中的表达,并分析其诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法检测非小细胞肺癌和肺良性病变患者胸腔积液中LUNX mRNA的表达情况,分析其表达和临床病理组织学特征的关系。结果 LUNX基因在非小细胞肺癌患者胸腔积液中阳性表达率为76.92%,而在肺良性患者胸腔积液中无表达。LUNX mRNA表达与非小细胞肺癌病理类型无关,但与其临床分期有密切关系。结论 LUNX基因可用于非小细胞肺癌早期诊断,治疗及预后。

LunX和CK19基因定量表达在鉴别良恶性胸水中的应用

肺癌、细菌性胸膜炎、慢性阻塞性肺炎等数十种疾病均可产生不同程度的胸腔积液，有时胸腔积液可能成为疾病唯一的临床表现，快速鉴别胸腔积液的良、恶性对临床诊断具有重要意义。建立了一种荧光定量RT-PCR技术检测LunX mRNA的新方法，探讨LunX基因在鉴别胸水良、恶性以及恶性肿瘤原发病灶中的应用价值。现报道如下。