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hnRNP K在肺腺癌中表达及其作用的研究 被引量:2
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作者 唐凤鸣 李为民 +2 位作者 陈燕 王冬梅 韩娟 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期823-826,共4页
目的研究核内不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算... 目的研究核内不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算阳性表达率;构建hnRNP K siRNA表达载体,采用Lipofectamine 2000瞬时转染A549细胞24h后,RT-PCR、Western blot检测A549细胞hnRNP K mRNA及其蛋白表达量;以流式细胞仪检测重组质粒hnRNP K siRNA及siRNAn转染A549细胞后细胞周期及凋亡的变化。结果肺腺癌组织中肿瘤直径≤3cm、3~5cm、≥5cm的hnRNP K的阳性表达率分别为38.5%、95.2%、91.7%;hnRNP K siRNA转染24h后的A549细胞hnRNPK mRNA及蛋白表达明显被抑制(P〈0.01);hnRNP K siRNA能显著抑制A549的生长及细胞周期的分布,G0/G1的细胞数从37.21%增加到85.60%,S和G2/M的细胞数分别从47.71%、13.00%减少到13.50%和0.32%,差异均有统计学意义(P〈0.01)。hnRNP K siRNA能促进A549的凋亡,其凋亡率达到4.79%(P〈0.01)。结论hnRNP K能促进肺腺癌细胞的生长;hnRNP K siRNA可抑制肺腺癌细胞的生长,促进其凋亡。 展开更多
关键词 肺腺癌 核内不均一核糖核蛋白k sirna
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hnRNP B1 siRNA对肺癌组织hnRNP B1表达干扰效果的体内研究 被引量:1
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作者 闻春生 李为民 +1 位作者 蒲丹 陈文彬 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期808-811,共4页
目的在体内实验中观察所构建的核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)特异性的siRNA真核细胞表达载体对肺癌组织hnRNP B1表达的干扰作用。方法选取转染本课题组已构建并经体外实验证实有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表... 目的在体内实验中观察所构建的核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)特异性的siRNA真核细胞表达载体对肺癌组织hnRNP B1表达的干扰作用。方法选取转染本课题组已构建并经体外实验证实有较好干扰效果的两对hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体(重组质粒A和B)的人肺腺癌细胞株A549,将其接种于BALB/Cnu/nu裸鼠右前腋下,构建肺癌动物模型。分别应用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测接种40、60d时肿瘤组织中的hnRNP B1 mRNA和蛋白质表达水平。结果hnRNP B1特异性的siRNA真核细胞表达载体在体内表达40d时均能较稳定而明显地抑制肿瘤组织中hnRNP B1 mRNA的表达,免疫组织化学从蛋白表达方面也予以证实,而且重组质粒A和B两组间的表达的差异无统计学意义。但是随着时间的延长(接种60d时),siRNA的干扰效果会逐渐减弱,与未转染A549细胞比较无明显差异。结论hnRNP B1特异性的siRNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一。 展开更多
关键词 肺癌 核内不均一核糖核蛋白B1 sirna真核表达载体
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肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因RNA干扰的体外研究 被引量:1
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作者 蒲丹 周陶友 +5 位作者 李为民 吴迪 陈小兵 陈敏 唐凤鸣 韩娟 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期805-807,822,共4页
目的体外研究特异的小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因表达及生长的抑制作用。方法设计和构建由H1启动子驱动产生的特异的hnRNP B1 siRNA表达质粒,转染至A549细胞,荧光定量PCR法及Western blot检测hnRNP B1基因的表达,MTT... 目的体外研究特异的小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因表达及生长的抑制作用。方法设计和构建由H1启动子驱动产生的特异的hnRNP B1 siRNA表达质粒,转染至A549细胞,荧光定量PCR法及Western blot检测hnRNP B1基因的表达,MTT法检测该表达质粒转染后对A549细胞生长的影响。结果针对hnRNP B1基因构建的重组质粒具有明显的干扰效果,受特异hnRNP B1 siRNA干扰的A549细胞hnRNP B1 mRNA及蛋白表达下调,细胞生长受到抑制。结论应用RNA干扰技术可阻止hnRNP B1基因的表达,有望成为肿瘤基因治疗新的研究方向。 展开更多
关键词 肺癌 核内不均一核糖核蛋白B1 sirna
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hnRNPB_1基因的RNA干扰抑制肺癌细胞A549增殖研究
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作者 蒲丹 李为民 +5 位作者 周陶友 吴迪 陈小兵 陈敏 唐凤鸣 韩娟 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期389-392,共4页
目的探讨特异性小分子干扰(small interference,siRNA)抑制肺癌A549细胞核内不均一核糖蛋白B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPB1)基因的表达后,对A549细胞增殖的影响。方法构建hnRNPB1特异性的siRNA真核细胞表... 目的探讨特异性小分子干扰(small interference,siRNA)抑制肺癌A549细胞核内不均一核糖蛋白B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPB1)基因的表达后,对A549细胞增殖的影响。方法构建hnRNPB1特异性的siRNA真核细胞表达载体并转染人肺癌细胞株A549,观察重组载体分别在第1、4及6周对A549细胞hnRNPB1基因的干扰效果以及对肺癌细胞周期及凋亡的影响。结果特异性siRNA真核表达可显著抑制肺癌细胞hnRNPB1基因的表达,使hnRNPB1 mRNA的表达减少46%~73%,蛋白表达减少77.69%~83.04%,作用时间至少可维持克隆形成后4周,同时,hnRNPB1基因表达下调抑制了A549细胞在体外的增殖,促进了肺癌细胞的凋亡。结论特异性siRNA能特异、高效地抑制肺癌细胞株A549细胞hnRNPB1基因的表达,RNAi可能为肺癌的基因治疗提供新策略。 展开更多
关键词 肺癌 核内不均一核糖核蛋白B1 小分子干扰RNA
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长链非编码RNA MALAT1对氧糖剥夺/复氧诱导的人脑微血管内皮细胞血管生成的影响
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作者 高昶 刘燕 +1 位作者 杨皓翔 张翠翠 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期832-839,共8页
目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制。方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K (hnRNPK)... 目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制。方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K (hnRNPK)和血管内皮生长因子A (VEGFA)的结合位点。HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1 (OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA (OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组。采用小干扰RNA (siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中。利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平。6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1 (MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平。结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点。管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1组比较,OGD/R+siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 肺腺癌转移相关转录本1 血管生成 不均一核糖核蛋白k 血管内皮生长因子A
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