Genetic Fingerprint Concerned with Lymphatic Metastasis of Human Lung Squamous Cancer

背景与目的筛选肺鳞癌患者淋巴转移差异表达基因群。方法原发癌组织及区域淋巴结取自10例接受完全性肺癌切除手术的肺鳞癌患者。根据组织来源将标本分为三组:不伴淋巴转移的肺鳞癌组织(TxN-,n=5)、伴有淋巴转移的肺鳞癌组织(TxN+,n=5)及相应转移淋巴结中的肺鳞癌细胞(N+,n=5)。对各组进行激光显微切割以获得纯净癌细胞,T7RNA线性扩增获取足够量的RNA,实验通道和参照通道分别标记以后与含6000个已知人类基因或表达序列标签的cDNA基因芯片杂交,扫描荧光信号以后进行数据分析。结果共有37个基因可将TxN+组与TxN-组区分开,其中在TxN+组高表达的基因有8个,主要涉及蛋白合成、信号传导、伴侣蛋白和酶等。有29个基因在TxN-组高表达,这些基因主要编码细胞周期调节子、转导子、信号传导蛋白以及细胞凋亡调节蛋白。比较N+组与TxN+组却没有发现具有显著性的差异表达基因。结论肺鳞癌的淋巴转移表型的获得可能是早期事件。这些差异基因的发现有助于阐明肺鳞癌淋巴转移的分子机制和寻找新的治疗靶点。

表皮钙黏蛋白mRNA表达水平与人NSCLC临床病理特征关系研究

背景与目的钙黏蛋白在维持正常上皮细胞的连接起着重要的作用,表皮钙黏蛋白是钙黏蛋白家族中的一种,其表达降低可能与人类癌症的侵袭和去分化密切相关。本研究拟探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中表皮钙黏蛋白mRNA表达水平与NSCLC病理分级和临床分期之间的关系。方法用RT-PCR方法检测53例NSCLC标本、46例癌旁肺组织、5例肺部良性结节性病变组织中表皮钙黏蛋白mRNA的表达水平,根据手术、病理和影像学结果判断有无转移并确定分期,分析表皮钙黏蛋白mRNA表达水平与临床变量之间的关系。结果表皮钙黏蛋白mRNA在NSCLC和癌旁肺组织中的阳性率分别为45.3%(24/53)和45.7%(21/46),P>0.05;低分化、晚期、肺门纵隔淋巴结转移的NSCLC,其表皮钙黏蛋白mRNA的表达量显著性降低(P<0.05);表皮钙黏蛋白mRNA表达阳性和阴性的患者中位生存期分别为15.5个月和46个月,其表达量与患者预后无显著相关性(P>0.05)。结论E-cadherin与NSCLC的淋巴结转移、分化及病理分期有关,但无证据表明其能影响NSCLC患者的预后。

nm23 mRNA表达与肺癌的分化转移及病理之间的相关性研究

目的 :研究肺癌中nm2 3mRNA表达水平与肺癌病理分级和临床分期之间的关系。方法 :5 3例肺癌标本 ,4 6例 (癌旁 )正常肺组织 ,5例肺部良性结节性病变组织 ,用RT -PCR方法检测标本中nm2 3mRNA的表达水平 ,根据手术、病理和影像学结果判断有无转移并确定分期 ,就nm2 3mRNA表达水平与临床变量之间进行分析。结果 :nm2 3mRNA在肺癌和 (癌旁 )正常肺组织中的阳性率分别为 4 3.4 % ( 2 3/ 5 3)和 39.1% ( 18/ 4 6 ) ,P >0 .0 5 ;低分化、晚期、肺门纵隔淋巴结转移的非小细胞肺癌 ,其nm2 3mRNA的表达量显著降低 (P <0 .0 5 )。结论 :nm2 3mRNA与肺癌的分化、转移及病理分期有关 ,检测nm2 3mR

Identification of metastasis associated gene G3BP by differential display in human cancer cell sublines with different metastatic potentials G3BP as highly expressed in non-metastatic

OBJECTIVE: To investigate genes involved in cancer metastasis, mRNA differential display was used to compare the levels of gene expression in two cell sublines derived from human giant cell carcinoma of lung (PG) which had different metastatic potentials. METHODS: Using in vivo tumorigenicity and a spontaneous metastasis assay in nude mice, two sublines (BE1, LH7) from human giant cell carcinoma of lung (PG) with different metastatic potentials were isolated and characterized. mRNA differential display was used to compare the levels of gene expression between them and the obtained results were confirmed by Northern hybridization. RESULTS: One differentially expressed band was nearly identical (99% homology) to Ras-GTPase-Activating protein SH3 domain binding protein (G3BP). G3BP displayed a strong expression in LH7 (non-metastatic in recipient nude mice) and a very weak expression in BE1 (100% metastatic frequency). The same different expression level of G3BP was detected in Northern hybridization with another panel of cell sublines with different metastatic potentials (established in our lab) derived from human prostate carcinoma cell line PC-3M. CONCLUSION: Our results indicate that G3BP was implicated in cancer metastasis because of its differential expressions in the two panels of cell sublines with different metastatic potentials.

一个与非小细胞肺癌转移相关的基因——RAB5A基因

采用ｍ Ｒ Ｎ Ａ 差异展示技术 （ ｍ Ｒ Ｎ Ａ Ｄ Ｄ） 研究具有相同细胞来源， 但转移能力高低不同的人肺腺癌细胞系 Ａ Ｇ Ｚ Ｙ８３ － ａ （ 低转移） 和 Ａｎｉｐ９７３ （ 高转移） ， 分析在两个细胞系中基因差异表达的情况，发现在高转移细胞系中有 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 基因的表达。该基因为蛋白质入胞信号的调控者， 为 Ｒ Ａ Ｓ 超家族成员。为进一步证实其转录表达的调控改变情况， 以及 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 高表达的临床意义， 进一步采用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 和免疫组织化学的方法检测了５０ 例临床非小细胞肺癌的手术标本， 结果表明， Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 的表达有随转移发生而增强的趋势， 而 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 的蛋白表达程度在有转移的病例中明显增强 （ Ｐ＜ ００５） 。

肿瘤转移相关基因cDNA芯片的制备与应用

目的建立制备肿瘤转移相关基因cDNA基因芯片的方法,并探讨其在肿瘤转移表达谱应用方面的意义。方法选择了399个已知转移相关基因克隆,经PCR扩增纯化后,以Cartesian Pixsys 5500芯片点样仪点布于多聚赖氨酸包被的玻片上;采用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP双重荧光标记人大肠癌和肺癌细胞、正常组织、大肠癌和肺癌组织总RNA并与阵列进行杂交。结果经ScanArrayTM 4000共聚焦荧光扫描仪检测,图像背景均匀,信号清晰,效果满意。对大肠癌细胞系和组织标本及肺癌标本表达基因扫描结果行联合聚类分析发现:两种癌的基因表达大多数相同,仅少数有差别,有30种在两种转移癌中呈持续上调或下调的基因,包括运动因子基因、粘附分子、蛋白水解酶、癌基因、抑癌基因、抑制或促进凋亡基因以及诱导血管增生和信号转导的基因等。结论优化的cDNA基因芯片制备技术用于基因表达分析有较高的效率和可靠的实用性能。检测的肿瘤转移相关基因的表达在两种癌无明显差别,表明不同癌其浸润和转移的分子机制大致相同。

用基因芯片研究人肺癌转移相关基因

目的 自制肿瘤转移相关基因芯片研究人肺癌高、低转移细胞系PG和PAa间以及肺癌、淋巴结转移癌与正常肺组织间的基因表达谱差异,筛选与肺癌转移相关的特异基因。方法 提取2种肺癌细胞系、人肺癌、淋巴结转移癌及周围正常肺组织的mRNA后逆转录标记cDNA探针,与自制的含399个肿瘤转移相关基因的微阵列膜杂交,QuantArray软件分析杂交信号强度获得差异表达基因。结果 正常肺组织与肺原发癌的基因表达谱有显著差异。淋巴结转移癌组织与PG高转移细胞系表达基因行聚类分析,共同表达且最具统计学意义的基因有64个,包括上调基因27个,下调基因37个。结论 多基因参与肺癌的转移过程,肺转移癌与高转移细胞系共同差异表达的基因可能与肺癌的高转移特性密切相关。

应用基因表达谱芯片从抗脱落凋亡肺癌A549细胞中筛选转移相关基因

背景与目的正常上皮或内皮细胞脱离细胞外基质会发生脱落凋亡,但肿瘤细胞可不依赖细胞基质生长而不发生凋亡,这一现象被称为抗脱落凋亡,目前国内外相关研究均认为抗脱落凋亡是肿瘤发生转移的始动环节。本实验旨在比较抗脱落凋亡及正常贴壁生长肺腺癌A549细胞基因组表达差异,从中筛选肺癌转移相关基因。方法利用多聚羟乙基甲基丙烯酸树脂处理培养皿,致细胞无法贴壁生长,建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系;利用北京博奥生物芯片公司的人类V2.0全基因组寡核苷酸微阵列芯片,检测其与正常贴壁生长A549细胞的基因表达差异性,筛选肺癌转移相关基因。结果共得到表达差异的基因745个,从中筛选出63个与肺癌转移密切相关的基因。结论成功建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系并筛选出转移相关差异表达基因,为进一步研究肺癌转移相关信号转导通路及其它相关研究提供依据。

nm23和p53基因与肺腺癌生物学特性的关系

目的:检测肺腺癌组织中nm23表达和p53基因外显子突变情况,寻找有助于准确预测局部肿瘤进展、分型和预后情况的临床参照指标。方法:应用PCR技术检测31例肺腺癌术后存档蜡块组织中nm23表达及p53基因外显子突变情况,并与肺腺癌的病理及临床指标进行相关性分析。结果:nm23表达及p53基因突变率分别为38.7%(12/31)及48.4%(15/31)。nm23表达和p53基因突变与临床分期相关,P值分别为0.005、0.037。结论:nm23表达和p53基因突变与肺癌临床分期和生存相关,在判断肺腺癌细胞增殖、分化程度、恶性程度及预后转归方面有一定价值,可作为判断肺腺癌预后的参考指标,指导高危患者的进一步治疗。

人类肺癌转移相关基因的筛选

目的:应用基因芯片研究人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C的基因表达谱的差异,并筛选肺癌转移相关基因。方法:分别提取并纯化两细胞株的mRNA,运用基因芯片技术得到95-D和95-C细胞的差异表达基因谱。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对部分有差异表达的基因进行分析验证。结果:在95-D和95-C细胞中有表达差异2倍以上的基因共389条,其中表达上调的121条,表达下调的268条。RT-PCR的验证结果与芯片的筛查结果基本相符。结论:人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C在基因表达谱上存在显著差异,这种差异表达的意义有待进一步研究。

原癌基因c-met在肺癌组织中的表达

目的 :研究c met蛋白、mRNA和增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearanti gen ,PCNA)在肺癌浸润和转移中的表达及意义。方法 :应用免疫组化SP法检测 62例肺癌组织及 2 9例转移灶中c met蛋白的表达和肺癌组织中PCNA的表达 ,应用原位杂交的方法检测肺癌组织中c metmRNA的表达。结果 :62例肺癌中c met蛋白和mRNA的表达与分化程度、肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移相关 ,P <0 0 5。淋巴结转移站数与c met蛋白的表达亦相关 ,P <0 0 5 ;且c met蛋白在淋巴结转移灶的染色强度( 0 2 186± 0 0 2 83 )远高于相应原发灶的染色强度 ( 0 13 62± 0 0 2 66) ,P <0 0 1。PCNA标记指数 (labelingindex ,LI)与TNM分期、淋巴结转移有显著的相关性 ,P <0 0 5。c met蛋白阳性表达组PCNA LI( 0 63± 0 2 5 )显著高于c met蛋白阴性表达组 ( 0 48± 0 19) ,P <0 0 5。结论 :c met能增强肺肿瘤细胞的浸润转移能力 ,并促进肿瘤细胞增殖 。

叉头框转录因子M1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌原发病灶中叉头框转录因子M1(FOXM1)的表达水平及其与临床病理因素的关系。方法收集同济大学附属上海市肺科医院2000年1月—2010年5月行手术切除原发灶的非小细胞肺癌94例,采用免疫组化法检测原发灶FOXM1的表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果 FOXM1表达强阳性率为64.9%。FOXM1的阳性表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移和吸烟情况密切相关(P<0.01)。FOXM1表达阳性者生存时间较阴性者短(P<0.01)。FOXM1表达水平、病理分化程度和临床分期均是影响非小细胞肺癌预后的独立因素(P<0.05,P<0.01)。结论 FOXM1在非小细胞肺癌中高表达,且与预后不良密切相关。

MTA1、nm23H_1 mRNA表达及突变与卵巢癌淋巴结转移的关系

目的 研究MAT1、nm2 3H1mRNA表达及突变与卵巢癌淋巴结转移的关系。 方法 应用逆转录 PCR(RT PCR)和逆转录 PCR 单链构像多态性分析 (RT PCR SSCP)技术 ,对 8例正常卵巢、2 0例卵巢癌及其相应的 2 0例淋巴结组织 ,进行MTA1和nm2 3H1mRNA表达及突变的检测。 结果 转移卵巢癌原发灶MTA1mRNA高表达率为 10 0 % (7/ 7) ,无转移为 38 5 % (5 / 13) ,P =0 0 10 3;有癌转移淋巴结高表达率为 87 5 % (6 / 7) ,无癌转移为 2 3 % (3/ 13) ,P =0 0 118。有转移卵巢癌原发灶nm2 3H1mRNA低表达率为 10 0 % (7/ 7) ,无转移为 30 % (4 / 13) ,P =0 0 0 43;有癌转移淋巴结低表达率为 10 0 %(7/ 7) ,无癌转移为 38 5 % (5 / 13) ,P =0 0 10 2。MTA1/nm2 3H1mRNA表达的相对吸光度值 (A值 ,曾称光密度OD值 )的比值随转移而增加。单链构像多态性分析 (SSCP)未发现突变。 结论 MTA1、nm2 3H1基因的转录表达与卵巢癌淋巴结转移呈正负相关关系 ,起着正负调控的重要作用。这两个基因的异常表达是卵巢癌转移中的频发事件而与基因突变无关。

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因

目的克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞分化相关基因。方法在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞系分化的基础上，采用ｍＲＮＡ差异显示技术，对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果在全反式维甲酸诱导前后的细胞之间存在明显的基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达，而有些基因经ＲＡ作用后表达水平降低或完全被抑制。经克隆筛选，获得了一些经全反式维甲酸诱导激活或抑制的差异表达基因片段，对其中的３个片段进行了序列分析和同源性比较。结论全反式维甲酸具有调控分化相关基因表达与否的重要作用。

癌转移抑制基因nm23在人肺癌中的转录表达研究

目的 探讨nm23基因在人肺癌发生、发展中的作用。方法 采用狭缝印迹杂交技术和非放射性地高辛标记检测系统,检测了143份不同部位、不同性质人肺组织中的nm23H1和nm23H2基因的mRNA表达。结果 nm23H1和nm23H2基因的mRNA表达均有从正常肺组织、肺良性病变组织、非癌肺组织、癌灶组织到癌转移淋巴结组织逐渐降低的趋势。其中,肺癌组织的nm23H2基因mRNA表达较正常肺组织显著较低(P<0.05),癌转移淋巴结组织的nm23H1和nm23H2基因mRNA表达均较正常肺组织显著降低(P<0.05)。肺癌组织的nm23基因表达与淋巴结有无癌转移无明显关系(P>0.05)。结论 nm23基因表达降低可能与肺癌发生有关。

mag-1基因与肿瘤细胞转移的相关性研究

目的:探讨mag-1基因与肿瘤细胞转移的关系。方法:检测mag-1在人肺巨细胞癌高低转移细胞株PLA801D与PLA801C、肺癌高低转移细胞株A549与H1299及乳腺癌高低转移细胞株MCF-7与MDA-MB-231中mag-1的表达水平;检测构建的mag-1正反义真核表达载体转染细胞后mag-1表达水平的变化;将mag-1正义表达载体分别转染低转移细胞株PLA801C及MCF-7并筛选出稳定克隆;研究mag-1过表达对细胞形态、增殖、迁移、黏附及侵袭等生物学行为的影响。结果:高转移细胞株PLA801D中mag-1的mRNA及蛋白表达水平均显著高于低转移细胞株PLA801C中mag-1的表达水平,乳腺癌高低转移细胞株中mag-1的蛋白表达水平也有明显的差异;过表达mag-1细胞的形态及增殖能力没有发生改变,而细胞的黏附、迁移及侵袭能力增强。结论:mag-1可能促进肿瘤细胞的转移。

不同转移能力肺癌细胞株差异非编码RNA的鉴定

目的:探讨不同转移能力的肺癌细胞株中miRNA表达差异,并分析miRNA在肺癌转移过程中的功能及意义。方法:利用非编码小RNA芯片技术,检测高转移肺癌细胞株(PGBE1)与低转移肺癌细胞株(PGLH7)间miRNA的表达差异,并通过qPCR鉴定。结果:非编码小RNA芯片分析显示,在不同转移能力肺癌细胞中得到4条差异表达的miRNA,分别为hsa-mir-34b、hsa-mir-23a、hsa-mir-23b和hsa-mir-199a-5p。实时定量PCR对差异的miRNA进行鉴定,4条差异的miRNA在低转移细胞株(PGLH7)中的丰度均高于其在高转移细胞株(PGBE1)中的丰度,P<0.05,与芯片结果吻合。结论:4条miRNA可能与肺癌转移相关,对miRNA功能探讨将有助于研究肺癌转移的分子机制。