不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点

目的比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据。方法分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态;采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(G1u)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标;利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,最后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察。结果本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小。接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组。此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得最低。白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM%、MN%、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT%、PLT显著高于埋块组。免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组>匀浆组>细胞组>埋块组的趋势。结论细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用。裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系。

裸小鼠可移植性人肺癌瘤株的建立及其生长特性和微细结构的观察

用人体肺腺癌细胞系(LTEP-a-2)接种于裸小鼠皮下,成功地建立了一株可移植性瘤株模型。历时2年共传15代,共用62只裸小鼠,肿瘤总发生率为(54/62)87.1％。第7代以后肿瘤迅速生长,一般30天左右可长出500mm^3大小瘤体,仍保持肺腺癌的特征。

2种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的比较

目的比较直接接种人卵巢癌COC1细胞和COC1细胞经体内传代后接种Balb/c-nu裸鼠皮下移植瘤模型制备方法的成瘤率。方法雌性突变系Balb/c-nu小鼠40只,分为对照组及实验组,每组20只。COC1细胞注射于裸鼠一侧背部皮下,对照组细胞培养后即接种,观察统计数据后处死,取瘤体制成单细胞悬液再接种于实验组裸鼠,比较两种不同方法接种的成瘤率,并观察成瘤时间、瘤重及肿瘤生长速度。结果实验组成瘤率为70%,对照组仅为30%。结论经过裸鼠体内传代后的COC1细胞用于制备人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型具有较高的成瘤率。

CEA高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤模型的建立

将１例人肺高分化腺癌手术标本直接移植于ＮＩＨ裸小鼠皮下，建立了ＣＥＡ高表达人肺高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型（ＬＡＸ─９１），裸鼠间已传３２代，历时２年余。ＬＡＸ─９１潜伏期短，生长稳定，移植成功率１００％。各代移植瘤病理组织学观察均保持了原病人肿瘤的结构，并且有分泌功能，染色体分析显示人恶性肿瘤特征。血清ＣＥＡ含量多次测定结果表明，ＬＡＸ─９１具有稳定高分泌ＣＥＡ的生物学特性。该移植瘤模型的建立，为进一步研究人肺癌和癌胚抗原的关系提供了有用的手段。

CEA高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤模型的建立

将１例人肺高分化腺癌手术标本直接移植于ＮＩＨ裸小鼠皮下，建立了ＣＥＡ高表达人肺高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型（ＬＡＸ－９１），裸鼠间已传３２代，历时２年余。ＬＡＸ－９１潜伏期短，生长稳定，移植成功率１００％。各代移植瘤病理组织学观察均保持了原病人肿瘤的结构，并且有分泌功能，染色体分析显示人恶性肿瘤特征。血清ＣＥＡ含量多次测定结果表明，ＬＡＸ－９１具有稳定高分泌ＣＥＡ的生物学特性。该移植瘤模型的建立，为进一步研究人肺癌和癌胚抗原的关系提供了有用的手段。

三氧化二砷抗裸鼠肺癌移植瘤药效学研究

目的:探讨三氧化二砷(A s_2O_3)对裸鼠肺癌移植瘤的抗肿瘤作用。方法:建立肺癌移植瘤模型。随机分为5组,每组6只,A s2O33组分别给予A s2O310、5、2m g/kg体重,腹腔注射;生理盐水(N S)组给予等体积的生理盐水,用法同A s_2O_3组;顺铂组(D D P)组按1m g/kg体重给药。用药2周后,观察用药前后肿瘤生长情况、裸鼠体重变化,测量肿瘤大小,流式细胞仪检测瘤细胞凋亡,取瘤组织行病理学检查和瘤细胞超微结构观察。结果:A s_2O_3组肿瘤大小均较N S组明显缩小(P<0.01);大、中剂量的A s_2O_3瘤组织细胞凋亡增多,病理可见以中度坏死为主,小剂量以轻度坏死为主。电镜下大、中剂量A s_2O_3组可见肿瘤细胞凋亡征象。结论:A s_2O_3对裸鼠肺癌移植瘤有显著的抗肿瘤作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是A s_2O_3三氧化二砷的抗肿瘤机制之一。

裸鼠肺癌原位模型的建立及肿瘤对裸鼠生理功能的影响

目的通过尾静脉注射肿瘤细胞的方法,建立一种肺癌原位移植瘤裸鼠模型,并进一步研究肺癌肿瘤生长对动物生理功能的影响。方法40只裸鼠经尾静脉注射接种人肺腺癌A549细胞,分别在第14、21、24、27、30天各解剖一组,肉眼观察肺部有无肿瘤生长及脑、肝、肾等脏器转移情况,并取肺脏、肝脏进行病理HE染色、镜检;采用全自动生化分析仪检测血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)等生化指标;取材称重,计算脏体系数。结果第21天动物肺部开始出现肿瘤结节;第27天出现死亡。除第14天解剖的动物因时间尚早未成瘤外,其余动物均有肿瘤生长。病理镜检结果为腺癌。与对照组比较,移植瘤动物的血清ALT、AST、CREA各阶段均有所升高、ALB各阶段有所降低,第21、24天的肝脏、脾脏器系数明显升高。结论通过尾静脉注射低浓度肿瘤细胞成功建立了人肺癌原位移植瘤模型;裸鼠的生理和免疫功能与肿瘤生长有很大关系。

鱼藤素对非小细胞肺癌细胞体内外增殖的影响

目的探究鱼藤素(deguelin)对非小细胞肺癌细胞A549与裸鼠移植瘤增殖的影响。方法采用CCK-8法测定鱼藤素对A549细胞增殖的抑制作用;通过赫斯特染色和AnnexinV-FITC/PI双染实验探究鱼藤素对细胞凋亡形态以及细胞凋亡率的影响;流式细胞术测定鱼藤素对A549细胞周期的影响;此外,通过裸鼠移植瘤模型的体内实验和HE染色探究鱼藤素对裸鼠移植瘤的影响。结果鱼藤素呈浓度和时间依赖性抑制A549细胞增殖;赫斯特染色和AnnexinV-FITC/PI双染实验进一步证实了鱼藤素能诱导A549细胞凋亡;鱼藤素呈浓度依赖性阻滞A549细胞周期于G 2/M期;裸鼠移植瘤模型实验和HE染色实验发现,鱼藤素对A549裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论鱼藤素对肺癌细胞A549具有显著抑制作用,为鱼藤素的抗肿瘤活性提供新的基础。

人结肠高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

将人结肠高分化腺癌手术标本,接种于裸小鼠体内建成移植瘤THCN—8901,已传14代,历时2年多,生长稳定,可移植性成功率高.组织学及超微结构形态观察,均保持了原病人肿瘤的结构,并且有分泌功能,染色体分析证实为人染色体,众数在63～94之间,该瘤株具有稳定产生CEA的生物学特性,用^(111)In—CEAMcAb能使裸小鼠移植瘤清晰显像.此瘤株的建立为结肠癌癌变基础及实验性基因治疗研究,提供了较为理想的实验动物模型.

重组人血管内皮抑制素联合放射治疗对A549肺腺癌裸鼠移植瘤抗肿瘤效应研究

目的:探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)与放疗不同联合对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的影响。方法:采用A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为空白对照组(d 1~d 14注射0.9%氯化钠溶液),恩度组(d 1~d 14注射恩度)、恩度联合放射治疗组(联合组),联合组分为联合1组(d 1~d 14注射恩度+d 1、d 3放疗),联合2组(d 1~d 14注射恩度+d 5、d 7放疗)和联合3组(d 1~d 14注射恩度+d 9、d 11放疗),治疗14天。测量小鼠体重和移植瘤体积变化,计算抑瘤率。治疗结束后第10天处死裸鼠,作肿瘤组织病理学观察,免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)表达及微血管密度(MVD)。结果:从治疗第7天起空白对照组肿瘤体积明显增大,生长曲线陡直,恩度组肿瘤体积增速次之,联合组肿瘤生长较缓慢,其中联合2组肿瘤体积增加最慢。裸鼠处死后测量显示,肿瘤质量和体积恩度组小于空白对照组,联合各亚组小于空白对照组和恩度组,差异均有统计学意义(P<0.05),其中联合2组抑瘤率最高,达到77.8%。病理检查显示,恩度组部分肿瘤细胞出现粘液变性,联合亚组肿瘤细胞坏死、变性显著。与空白对照组比较,恩度组、联合1组、联合2组、联合3组VEGF表达降低,MVD减小,差异均有统计学意义(P<0.05),联合1、联合2、联合3各亚组间比较,VEGF表达及MVD的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:重组人血管内皮抑制素联合放射治疗对A549肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤效果明显优于单用重组人血管内皮抑制素,可能与恩度能有效减少肿瘤组织血供,增敏放疗作用有关。

SPECT图像对裸鼠肺肿瘤临床靶区确定的实验研究

目的探讨核医学单光子发射计算机断层摄影(single proton emission computed tomography,SPECT)检查方法对裸鼠肺肿瘤临床靶区确定的应用价值。方法建立稳定表达luciferase A549-luc+肺肿瘤裸小鼠模型,在同一肿瘤模型中分别获得肿瘤荧光图像与SPECT图像,应用Matlab软件计算机平台开展2种图像的对比实验研究。通过对这2种图像的数值计算和比较分析探索肺肿瘤的形态和病理细胞边界分布特征。不同测量方法得到的数据分成荧光组和SPECT组,按照配对资料分析。结果肿瘤荧光图像周长和SPECT图像周长样本为非正态分布,两组差异有统计学意义,z=2.12,P=0.034。肿瘤荧光图像面积和SPECT图像面积样本为正态分布,两组差异有统计学意义,t=165.75,P<0.001。裸小鼠肿瘤荧光图像略小于SPECT图像。图像对比研究发现,SPECT图像边缘放射性强度峰值分布不均匀,而荧光图像边缘在瘤细胞数量较少时没有形成具有可信度的荧光图像。移植瘤模型区域细胞学移行行为表现出复杂的由瘤体中央向边缘过渡而逐步减少的非线性关系。结论与荧光图像比较,SPECT处理的同一肺肿瘤裸小鼠模型病理细胞学图像边界欠清晰,但是SPECT反映的是肿瘤边缘细胞移行中的散在细胞学特征,而荧光图像不具有这些特征,提示核医学图像对裸鼠肺肿瘤临床靶区的确定是一个不容忽视的重要补充。

天佛参口服液对A549细胞体内外增殖的影响及机制研究

目的探究天佛参口服液对人非小细胞肺癌A549细胞与裸鼠移植瘤增殖的作用以及相关作用机制。方法采用Cell Titer-Glo发光法检测天佛参口服液对9种不同基因突变表型的肺癌细胞系增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测天佛参口服液对A549细胞周期及凋亡的影响;采用Western blotting法考察天佛参口服液对A549细胞增殖相关蛋白表达的影响。裸鼠sc A549细胞建立裸鼠移植瘤模型,考察天佛参口服液对小鼠皮下移植瘤生长的影响。结果天佛参口服液抑制A549细胞增殖,呈剂量相关性;天佛参口服液阻滞A549细胞周期于G_(0)/G_(1)期和G_(2)/M期(P<0.05、0.01),并且1%天佛参口服液可以显著诱导A549细胞凋亡(P<0.01);天佛参口服液显著抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Raf、丝裂原细胞外信号调节激酶(mitogen extracellular signal-regulated kinase,MEK)以及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)蛋白的磷酸化水平(P<0.05、0.01),呈剂量相关性。体内实验结果显示,2.25 mL/kg天佛参口服液对裸鼠移植瘤模型的肿瘤体内生长具有显著抑制作用(P<0.05)。结论天佛参口服液对A549细胞的体内外生长具有显著抑制作用,其作用机制可能与抑制EGFR活性和下调Ras/Raf/MEK/ERK信号通路表达有关。