基于网络药理学探究罗布麻叶治疗高血压病的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接法探究罗布麻叶治疗高血压病的机制,为临床用药提供科学理论依据。方法通过差异分析和加权基因共表达网络分析筛选高血压病相关基因集。依据中药药理学技术平台和SwissTargetPredic-tion数据库筛选罗布麻叶的潜在活性成分和预测潜在作用靶点。通过蛋白-蛋白网络分析和KEGG通路富集分析,探究罗布麻叶治疗高血压病的核心基因和关键信号通路。通过分子对接、实时荧光定量聚合酶链式反应和Westernblot验证筛选的核心基因。结果通过网络药理分析和实验验证发现罗布麻叶治疗高血压病的关键基因SERPING1。基于KEGG通路富集分析发现,罗布麻叶治疗高血压病的关键信号通路是“补体和凝血级联反应”及“百日咳”。结论罗布麻叶可以调控SERPING1的表达通过“补体和凝血级联反应”及“百日咳”信号通路治疗高血压。

基于网络药理学及实验验证探讨罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的作用机制

目的:利用网络药理学及实验验证的方法探讨罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库,筛选罗布麻叶-钩藤主要化学成分和作用靶点,高血压病疾病靶点通过GeneCards、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)查询,将罗布麻叶-钩藤的作用靶点与疾病靶点交集得到罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的共同靶点,将共同靶点导入STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。将共同靶点导入DAVID在线数据库进行基因本体(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用AutoDock和PyMOL进行分子对接和可视化。采用两肾一夹法建立高血压病大鼠模型,治疗组大鼠给予罗布麻叶-钩藤药液连续灌胃2周,模型组与空白组给予等体积0.9%氯化钠溶液连续灌胃2周。比较3组收缩压(SBP)、胸主动脉病理结构及炎症指标水平。结果:筛选后得出罗布麻叶的活性成分6个,钩藤的活性成分33个,罗布麻叶-钩藤药对治疗高血压病的靶点152个,包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-8、IL-4、IL-1α、IL-2、IL-10、趋化因子配体2 (CCL2)、细胞间黏附分子-1 (ICAM1)等。KEGG富集分析共得到TNF信号通路、缺氧诱导因子-1 (HIF-1)信号通路、Toll样受体(TRL)信号通路等122条信号通路。分子对接结果显示,山柰酚和槲皮素与TNF、CCL2和IL-8等结合较好。实验结果显示罗布麻叶-钩藤药对显著降低了高血压病大鼠的血压,有效改善了高血压病大鼠胸主动脉的病理组织结构,降低了高血压病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α水平。结论:罗布麻叶-钩藤药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗高血压病。

高效液相色谱法比较不同种属和产地罗布麻叶中金丝桃苷的含量

目的建立罗布麻叶中有效成分金丝桃苷的HPLC含量测定方法，并且对不同种属和产地的罗布麻叶进行比较。方法采用Shim-Pack VP-ODS色谱柱；乙腈-四氢呋喃-0．1％醋酸（15．5：5．5：79）为流动相；流速1．0mL·min^-1；检测波长为360nm；柱温为30℃；进样量20μL。结果金丝桃苷线性范围0．01～0．2mg·mL^-1（r=0．9999）；重复性试验RSD=1．02％（n=5）；平均回收率为101．5％，RSD=2．1％；罗布麻属罗布麻叶中金丝桃苷含量在0．60～0．91％，白麻属两种含量在0．39～0．55％。结论本方法结果准确，重现性好，发现罗布麻属和白麻属两属之间金丝桃苷含量差异明显，为建立完善罗布麻叶质量标准提供依据。

罗布麻叶HPLC指纹图谱构建及在种属鉴别中的应用

目的建立罗布麻叶的HPLC指纹图谱。用以控制罗布麻叶的内在质量,并对罗布麻叶药材与其混淆品进行鉴别。方法采用HPLC梯度洗脱的方法建立指纹图谱,"计算机辅助相似度评价系统"软件进行数据处理.据此对不同种属的药材进行比较。结果建立的罗布麻HPLC指纹图谱方法的精密度、稳定性和重现性较好。罗布麻叶(红麻叶) HPLC指纹图谱共标定12个共有指纹峰,与白麻属样品图谱之间呈显著差异。可以依此鉴别。结论HPLC指纹图谱可以用作罗布麻叶药材的质量控制。

罗布麻总黄酮高效液相色谱指纹图谱研究

目的：建立罗布麻总黄酮有效部位的指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法：采用HPLC—DAD法进行测定，色谱柱：Kromasil C18（4．6mm×250mm，5Ixm），流动相0．05％磷酸乙腈-0．05％磷酸水梯度洗脱，柱温25℃，流速1．0mL·min^-1；检测波长360nm。结果：测定7批罗布麻总黄酮的HPLC图，建立标准指纹图谱，有17个共有峰，并用中药指纹图谱相似度评价系统计算其相似度，各批总黄酮的相似度介于0．95～1．0。梯度洗脱得到的色谱图色谱蜂分离较好，达到了指纹图谱的要求，并在相同的色谱条件下测定了罗布麻叶药材的HPLC图谱，其结果与罗布麻总黄酮有很好的相关性。结论：该方法精密度、稳定性及重现性较好，特征性及专属性强，可全面控制罗布麻总黄酮及其制剂质量，确保每批产品的均一性。

罗布麻叶HPCE指纹图谱的研究

目的:建立罗布麻叶HPCE指纹图谱分析方法,评价不同产地罗布麻叶药材的质量。方法:用HPCE技术对不同产地罗布麻叶进行分析,测定其指纹图谱,并作模糊聚类法分析和相似度评价。结果:初步建立了以7个共有峰为特征指纹信息的HPCE指纹图谱;发现少数产地罗布麻叶HPCE指纹图谱有一定差异。结论:方法准确可靠,重现性好,可作为罗布麻叶内在质量评价的依据。

罗布麻叶化学成分测定

对罗布麻叶水浸膏中总黄酮、槲皮素、水溶性碳水化合物的含量进行了测定及薄层层析分析。

罗布麻叶无机元素的动态变化研究

目的探讨罗布麻叶无机元素的动态变化。方法采用电感耦合等离子发射光谱法和微波消解-原子荧光光谱法测定不同采收时间罗布麻叶中无机元素含量,用SPSS11.5对数据进行相关性分析。结果共检测了23种无机元素,不同生长期罗布麻叶中无机元素积累具有一定规律。结论罗布麻叶中重金属积累曲线最小峰值与传统采收期基本一致,为确定罗布麻叶的最佳采收期提供依据。

罗布麻叶的HPLC指纹图谱及抗氧化活性谱效关系研究

目的建立罗布麻叶的指纹图谱并考察其体外抗氧化活性的谱效关系,为揭示其抗氧化活性物质基础提供参考。方法采用HPLC法建立20批罗布麻叶的指纹图谱,不同产地罗布麻叶体外抗氧化活性的测试采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)自由基清除法,利用灰色关联度分析(GRA)法和双变量相关性分析(BCA)法对谱效关系进行探讨。结果建立了20批罗布麻叶HPLC指纹图谱,确定了18个共有峰,相似度在0.883~0.989范围内。运用对照品比对法鉴定了其中7个峰:X2为绿原酸,X7为芦丁,X8为金丝桃苷,X9为异槲皮苷,X12为紫云英苷,X17为槲皮素,X18为山柰酚。对样品的指纹图谱进行聚类分析,结果显示可聚为4类。20批罗布麻叶均有不同程度的清除自由基活性。GRA法分析结果显示,18个共有峰与清除自由基的关联度在0.6917~0.9593范围内,大小依次为X2>X9>X8>X17>X18>X12>X11>X7>X13>X15>X14>X1>X10>X3>X5>X6>X16>X4。BCA法分析结果显示,2号峰(绿原酸)、8号峰(金丝桃苷)、9号峰(异槲皮苷)、17号峰(槲皮素)和18号峰(山柰酚)的含量变化与DPPH·自由基清除活性大小密切相关。结论市售不同产地罗布麻叶的化学成分基本一致,但不同产地的药材质量有一定差异,罗布麻叶抗氧化作用是多成分共同起效的结果。通过建立HPLC指纹图谱及分析谱效关系探寻罗布麻叶抗氧化物质基础,可为该药材的质量评价提供参考。

罗布麻叶挥发性成分分析及其动态变化研究

目的:探讨罗布麻叶挥发性成分的动态积累,为确定罗布麻叶的最佳采收期提供依据。方法:采用HS-GC-MS法分析不同采收时间罗布麻叶的挥发性成分,并用峰面积归一化法确定各成分的相对含量,以其中的主要活性成分指标,考察它们的动态变化。结果:初步分离出39种成分,鉴定出38种成分,其中共有成分21种,不同生长期罗布麻叶中挥发性成分积累具有一定规律。结论:罗布麻叶挥发性成分积累曲线最大峰值与传统采收期基本一致。

罗布麻叶及其易混品的鉴定研究

目的建立罗布麻叶及其易混品大花罗布麻叶的鉴定方法。方法用传统鉴定方法及现代鉴定技术,对罗布麻叶与大花罗布麻叶进行鉴定。结果罗布麻叶与大花罗布麻叶的药材性状、显微特征、薄层色谱及HPLC指纹图谱具有一定差异。结论可以作为罗布麻叶药材品质鉴定依据。

正交试验法优化罗布麻叶中总黄酮的闪式提取工艺

[目的]优化闪式提取器提取罗布麻叶中总黄酮成分的工艺条件。[方法]在单因素试验的基础上,运用L9(34)正交试验优选罗布麻叶总黄酮的闪式提取工艺。[结果]闪式提取法提取罗布麻叶中总黄酮的最佳工艺为:乙醇浓度55%,料液比1∶50(W/V,g/ml,下同),提取时间50 s,提取次数2次;在此条件下,最高提取率为4.24%。验证性试验用最佳工艺条件提取5次,RSD为1.07%。[结论]该工艺稳定可行,闪式提取高效、快速,不破坏成分,有推广价值。

罗布麻叶黄酮类成分分布与积累规律的研究

目的探讨罗布麻叶中黄酮类成分的分布特点与动态积累规律。方法采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定不同生长部位和生长期罗布麻叶中5种黄酮类成分。结果紫云英苷含量呈现出上部叶>中部叶>下部叶的规律;金丝桃苷、异槲皮苷的含量以6、7月份较高。结论为罗布麻叶的生态分析、合理采收以及资源开发利用提供有价值的资料。

罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3β抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡机制研究

心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。

罗布麻叶中肝毒性成分吡咯里西啶生物碱的含量分析及其初步风险评估

目的:对罗布麻叶中吡咯里西啶生物碱的含量进行测定,并根据测定结果进行肝毒性初步风险评估。方法:样品经过Qu ECh ERS法提取后,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定印美定、石松胺、印美定氮氧化物和石松胺氮氧化物的含量。结果:6批罗布麻叶样品中印美定、石松胺、印美定氮氧化物和石松胺氮氧化物的含量范围分别为10.5127.56、20.6642.54、40.5476.89和61.45164.23μg·kg^(-1)。含量超过一些国家或组织的规定,长期使用存在一定的安全风险。结论:本研究所建立的方法为罗布麻叶中肝毒性成分吡咯里西啶生物碱的质量控制和安全性评价提供了科学依据。

罗布麻叶中有害物质检测

目的:检测罗布麻叶药材中重金属及农药残留量。方法:用电感耦合等离子发射光谱法和原子荧光光度法分析不同产地罗布麻叶中重金属含量,用毛细管气相色谱法检测药材中农药残留量。结果:罗布麻叶中重金属及农药残留量基本符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》(2001)的限量指标规定;不同产区罗布麻叶中重金属、农药残留量有些差异。结论:为罗布麻叶药材的安全性评价提供资料。

RP-HPLC法测定罗布麻叶中芦丁和槲皮素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定罗布麻叶中芦丁和槲皮素的含量。方法：采用krom asil C18柱（4.6mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇（A）-0.08%磷酸（B）,梯度洗脱;流速1.0 mL/m in;检测波长360nm。结果：芦丁进样量在0.42~7.10μg范围内（r=0.9998）,槲皮素进样量在0.011~0.19μg范围内（r=0.9997）线性关系良好,平均回收率芦丁为98.77%（RSD%=1.2）,槲皮素为99.19%（RSD%=1.8）。结论：该方法操作简便,准确,重复性好,可同时测定罗布麻叶中芦丁和槲皮素的含量。

罗布麻叶分散片的制备及溶出度测定

目的优化罗布麻叶分散片处方工艺,并测定其溶出度。方法在单因素试验基础上,以微晶纤维素(MCC)、低取代羟丙基纤维素(L-HPC)、淀粉用量为影响因素,崩解时间、溶出度(30 min)的总评"归一值"(OD值)为评价指标,星点设计-效应面法优化处方工艺。再以槲皮素含有量为指标,采用《中国药典》方法测定溶出度。结果最佳条件为罗布麻叶浸膏粉用量40%,MCC用量26%,L-HPC用量6%,淀粉用量12%,硫酸钙用量15.1%,以60%乙醇为润湿剂制软材,硬脂酸镁用量0.9%,OD值0.988。所得分散片崩解时间小于3 min,分散均匀性良好,在20 min时的溶出度达90%以上。结论该方法合理可行,可用于制备罗布麻叶分散片。

不同种属罗布麻叶水解产物中槲皮素含量比较研究

目的：应用《中国药典》一部（2005年版）中罗布麻叶水解产物中槲皮素的含量测定方法对不同种属的罗布麻叶进行比较。方法：采用Hypersil ODS2色谱柱（4．6×250mm，5μm）：甲醇-0．4％磷酸（50：50）为流动相；流速1．0ml／min；检测波长360nm；柱温30℃。结果：线性范围0．14～1．12μg，相关系数0．99995，在此色谱条件下，两属三种罗布麻叶中槲皮素含量无明显差异。结论：该方法不能明显区分正品与非正品罗布麻，质量控制有待更具特征性的指标。

不同采收期的罗布麻叶和其商品中槲皮素的含量测定

目的建立HPLC法测定不同采收期的罗布麻叶和其商品药材中槲皮素的含量。方法采用Aglient Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长:360nm,柱温:30℃。结论罗布麻由开花转向结果和叶由绿变黄时,槲皮素的含量相对较高,是采集叶较理想的时间。国内部分省市销售的大多数罗布麻叶药材中的槲皮素含量符合药典规定,也尚有少数样品未达到药典标准,建议有关部门还需加强对罗布麻叶的质量监督检查。