罗汉果花叶病毒(WMV-2-Luo)抗血清制备及ELISA检测技术研究

用西葫芦作为罗汉果花叶病毒 (WMV 2 Luo)的繁殖寄主 ,通过差速离心和PEG二次沉淀法得到WMV 2 Luo的提纯液 ,用该病毒提纯液免疫日本大白兔 ,获得了WMV 2 Luo兔抗血清。经ELISA测定 ,其效价为 1/5 12 0 ,以 0 1mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7 8,含 1 5 %NaDIECA)作为样品制备缓冲液 ,用间接ELISA法检测WMV 2 Luo的灵敏度为 1/32 0 0。用此方法检测罗汉果组培苗带毒情况和田间病株均获得成功。

罗汉果组培苗脱毒方法研究

采用热处理结合茎尖技术对罗汉果组培苗进行脱毒培养，并用间接酶联免疫法和电镜观察法对脱毒效果进行检测．结果表明．组培苗经38．5℃热处理10d后，剥取0．2～0．5mm微茎尖培养或切取1．0～1．5mm茎尖进行二次茎尖脱毒培养，茎尖苗的脱毒率均为100％，建立了两种有效的罗汉果组培苗脱毒方法。

罗汉果茎尖脱毒技术研究

以罗汉果组培苗为试材,在高温热处理不同天数后剥取茎尖,进行罗汉果花叶病毒脱毒技术研究,同时采用间接ELISA法和电镜观察法检测其脱毒效果。结果表明:适合罗汉果热处理的时间为7～15d,试管苗的成活率可达90%～100%;38.5℃热处理10d剥取0.2～0.5mm的茎尖进行培养,脱毒率为100%。