鲁西斗鸡三重基序蛋白62基因生物信息学及组织表达特性分析

克隆鲁西斗鸡三重基序蛋白62(Chicken triple motif protein 62,TRIM62)基因并对其编码产物进行生物信息学分析,检测其在不同组织和器官中的表达情况。以鲁西斗鸡肺脏cDNA为模板,克隆TRIM62基因序列,运用生物信息学软件对其编码蛋白的亲/疏水性、跨膜螺旋结构、修饰结构、结构域、高级结构和互作蛋白网络等进行预测分析。采用qRT-PCR技术检测TRIM62基因在鲁西斗鸡不同组织中的表达情况。鲁西斗鸡TRIM62基因CDS区为1428 bp,编码475个氨基酸,编码蛋白分子式为C_(2410)H_(3773)N_(675)O_(712)S_(22),分子量为54.30kD,等电点(PI)为6.40,无信号肽,不存在跨膜区;存在2个明显的亲水区,其编码不稳定的亲水性蛋白。TRIM62蛋白由α-螺旋(39.16%)、β-转角(4.21%)、无规则卷曲(37.68%)和延伸链(18.95%)组成。qRT-PCR结果显示,TRIM62 mRNA在鲁西斗鸡肺脏中表达量最高,在胰腺、腺胃中的表达量次之,在肌肉组织中表达量最低。本研究成功克隆了鲁西斗鸡TRIM62基因,并初步研究了其组织表达规律,结果为TRIM62基因编码蛋白功能的深入研究奠定了基础,为鲁西斗鸡品种保护及开发利用提供有价值的参考资料。

饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡生产性能及蛋品质的影响

本试验旨在研究饲粮不同粗蛋白质水平对26～41周龄的鲁西斗鸡生产性能及蛋品质的影响。试验选用26周龄(1.952±0.288)kg健康的鲁西斗鸡200只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复10只。试验采取单因素试验设计,4个饲粮粗蛋白质水平依次为:14.0%、15.5%、17.0%和18.5%,各组均限饲,且投料量一致。试验期为16周。结果表明:在鲁西斗鸡产蛋期(26～41周龄),饲粮粗蛋白质水平对平均蛋重没有显著影响(P>0.05)。在试验前期(26～29周龄),饲粮粗蛋白质水平对平均周产蛋量、产蛋率和料蛋比均无显著影响(P>0.05);在试验中期(30～37周龄),30～33周龄17.0%饲粮粗蛋白质水平组平均周产蛋量显著高于其他各组(除30～31周龄15.5%饲粮粗蛋白质水平组外)(P<0.05),30～31周龄和36～37周龄产蛋率显著高于14.0%组和18.5%组(P<0.05),32～35周龄产蛋率显著高于15.5%组(P<0.05),但是各组间30～37周龄料蛋比差异不显著(P>0.05);在试验末期(38～41周龄),18.5%饲粮粗蛋白质水平组平均周产蛋量显著高于其他各组(P<0.05),产蛋率显著高于14.0%组和15.5%组(P<0.05),料蛋比显著低于15.5%组(P<0.05)。此外,33周龄时,随着饲粮粗蛋白质水平提高,蛋黄颜色有下降趋势(P=0.09);41周龄时,17.0%和18.5%饲粮粗蛋白质水平组蛋白高度和哈氏单位显著高于14.0%组和15.5%组(P<0.05)。综合以上结果,鲁西斗鸡产蛋期适宜的饲粮粗蛋白质水平:前期(26～29周龄)为14.0%;中期(30～37周龄)为17.0%;后期(38～41周龄)为18.5%。

鲁西斗鸡IGF-Ⅰ基因多态性与体型指标关系的研究

采用PCR-RFLP技术,对124只鲁西斗鸡IGF-Ⅰ基因的5′端调控区进行遗传多态性研究,并初步探讨其基因型与体型指标的相关性。将扩增产物进行PstⅠ酶切后出现AA、AB和BB3种基因型,其基因型频率分别是0.4516、0.3710、0.1774,等位基因A、B的频率分别是0.637、0.363。对纯合子进行测序,发现在IGF-Ⅰ基因5′端距启动子7.8kb处有A→G的转换。经χ2检验,鲁西斗鸡在该位点上处于Hardy-Weinberg平衡状态(P﹥0.05)。分析基因型与16周龄体重体尺时发现:在体重、胸宽、胸骨长指数和胫长指数方面,存在BB>AB>AA的趋势,但在颈长和腿长方面,存在着AA>AB>BB的趋势。表明"A"等位基因与颈长和腿长相关,含此基因个体适合向着斗性强的方向选育,"B"等位基因与体重、胸宽、胸骨长和胫长指数相关,含此基因个体适合向肉用方向选育。

1～12周龄鲁西斗鸡粗蛋白质沉积及需要量

本研究旨在确定1 ～ 12周龄鲁西斗鸡粗蛋白质需要量.试验选用1日龄鲁西斗鸡600只,随机分为5个组,每个组6个重复,每个重复20只.试验期分1～6周龄和7～12周龄2个阶段,采用单因子试验设计,各组分别饲喂不同粗蛋白质水平的饲粮.在6和12周龄末,每重复屠宰1只鸡进行体成分的测定.结果表明：饲粮粗蛋白质水平对1～6周龄鸡平均日增重、料重比、每克增重消耗蛋白质、蛋白质沉积量和沉积率有显著影响（P＜0.05）;对7～12周龄鸡平均日增重、料重比、蛋白质沉积量有显著影响（P＜0.05）.以粗蛋白质食入量（CPI）为因变量,对应的平均日增重（△W）为自变量进行线性回归分析,结合各阶段代谢体重,得出粗蛋白质需要量（CPR）析因模型：1 ～6周龄,CPR=1.17w0.75＋ 370.87△W;7～ 12周龄,CPR=1.20w0.75 ＋578.97△W.根据本试验结果,结合各阶段平均日采食量,得出1～6周龄和7～12周龄鲁西斗鸡粗蛋白质需要量分别为18.55％、17.39％.

鲁西斗鸡产蛋期粗蛋白质需要量

本试验旨在综合饲养试验和屠宰试验研究粗蛋白质(CP)水平对产蛋期(26～41日龄)鲁西斗鸡生产性能、体成分和鸡蛋内容物成分的影响,以确定鲁西斗鸡产蛋期的CP需要量。试验选用平均体重为(1.952±0.288)kg健康的26周龄鲁西斗鸡200只,随机分为4个组,每组5个重复,每个重复10只。试验采用单因素试验设计,各组分别饲喂不同CP水平的饲粮,CP水平分别为:14.00%、15.50%、17.00%和18.50%,各组按相同投喂量进行限饲,试验期为16周。结果表明:1)根据生产性能变化规律可将试验期划分为3个阶段,在26～29周龄,CP水平对产蛋率、平均日产蛋量(ADEM)、料蛋比和平均蛋重均无显著影响(P>0.05);在30～37周龄,17.00%CP组产蛋率显著高于其他组(P<0.05);在38～41周龄,随CP水平提高,产蛋率和ADEM呈线性(P<0.05)或二次曲线(P<0.05)提高,料蛋比呈线性降低(P<0.05)。2)饲粮CP水平对鲁西斗鸡屠体和鸡蛋内容物所含的CP、粗脂肪(EE)、粗灰分、水分和总能(GE)均无显著影响(P>0.05)。3)以平均日粗蛋白摄入量(ADCPI)为依变量,以平均日增重(ADG)和ADEM为自变量,进行回归分析,得出鲁西斗鸡产蛋期CP需要量的析因模型:26～29周龄,ADCPI=3.52ADG+0.35ADEM+2.18BW0.75;30～37周龄,ADCPI=4.02ADG+0.35ADEM+2.42BW0.75;38～41周龄,ADCPI=3.09ADG+0.53ADEM+2.10BW0.75,其中BW0.75表示代谢体重。根据本试验结果,结合最佳生产性能组的ADG、ADEM和BW0.75,得到鲁西斗鸡产蛋期前期(26～29周龄)、中期(30～37周龄)和后期(38～41周龄)3个阶段的饲粮CP适宜添加水平分别为:14.19%、16.92%和18.28%。

鲁西斗鸡饲粮适宜能量水平及生长规律

本试验旨在研究饲粮代谢能（ME）水平对鲁西斗鸡生长性能的影响,并得出鲁西斗鸡的生长变化规律.选用1日龄健康鲁西斗鸡1 000只,随机分为5个组,每个组4个重复,每个重复50只,试验期分1～6周龄和7～20周龄2个阶段.试验各阶段的ME水平分别为：1～6周龄,11.98、12.19、12.38、12.62、12.81 MJ/kg;7～20周龄,11.63、11.82、12.03、12.25和12.45 MJ/kg.结果表明：1）饲粮ME水平对鲁西斗鸡平均日采食量、平均日增重无显著影响（P＞0.05）,饲粮ME水平对7～ 20周龄鲁西斗鸡料重比有显著影响（P＜0.05）,全期料重比以中ME组（1～6周龄：12.38 MJ/kg;7～20周龄12.03 MJ/kg）最小.2）1～ 20周龄,鲁西斗鸡平均日采食量（ADFI）与周龄（t）的变化方程为ADFI=-0.01＋5.73×t（R2=0.982 7,P＜0.000 1）;体重（BW）与周龄（t）变化方程为BW=1 607.60/（1 ＋22.53e-027t） （R2=0.996 7,P ＜0.000 1）.由此可见,以全期最佳料重比为依据,鲁西斗鸡饲粮适宜ME水平1～6周龄为12.38 MJ/kg,7～20周龄为12.03 MJ/kg.

饲粮能量水平对鲁西斗鸡屠宰性能和体成分的影响

本试验旨在研究饲粮能量水平对生长前期（1~42日龄）和生长后期（43~140日龄）鲁西斗鸡屠宰性能和体成分的影响。选用1日龄健康鲁西斗鸡公母混雏1000只,随机分为5个处理,每个处理4个重复,每个重复50只,分生长前期和生长后期进行饲养试验。试验各阶段的代谢能（ME）水平分别为：1~42日龄,11.98、12.19、12.38、12.62、12.81 MJ/kg；43~140日龄,11.63、11.82、12.03、12.25和12.45 MJ/kg。结果表明：饲粮能量水平对42日龄和140日龄鲁西斗鸡屠宰性能指标半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率和体成分指标水分、粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）、粗灰分（CA）含量以及沉积净能（ER）均无显著影响（P〉0.05）。140日龄鲁西斗鸡水分含量显著低于1日龄和42日龄鲁西斗鸡（ P〈0.05）；CP和CA含量随日龄增加显著升高（ P〈0.05）；1日龄鲁西斗鸡EE含量显著高于42日龄和140日龄（ P〈0.05）；42日龄鲁西斗鸡ER显著低于1日龄和140日龄（ P〈0.05）。本试验条件下,日龄对鲁西斗鸡水分、CP、EE、CA含量以及ER均有显著影响,EE含量随日龄增长呈现下降的趋势,反映了鲁西斗鸡的品种特性。

鲁西斗鸡营养物质利用率的比较研究

选用1日龄鲁西斗鸡72只,随机分成6组,每组12只.5个试验组分别饲喂不同粗蛋白（CP）水平饲粮,分别于21～31、63～73、105～115、147～157日龄用全收粪法,进行4个时期的消化代谢试验,预试期7d,正试期3d.每个阶段设置相应内源组,禁食24 h排空,收集24 h排泄物.研究结果表明,饲粮粗蛋白水平可以影响鲁西斗鸡营养物质利用率,以饲粮粗蛋白（CP）代谢率为依据,各阶段适宜CP水平为18.29％、17.00％、16.00％、14.66％;鲁西斗鸡不同阶段营养物质利用率有差异,以63～73日龄最高.鲁西斗鸡营养物质利用率受饲粮营养水平和饲养阶段双重影响.

13～24周龄鲁西斗鸡蛋白质代谢规律及需要量研究

本研究旨在确定13～24周龄鲁西斗鸡粗蛋白质需要量。选用13周龄健康鲁西斗鸡480只，随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复16只。试验分13～18、19～24周龄两个阶段，采用单因子试验设计，各处理组分别饲喂不同粗蛋白水平的饲粮。在18和24周龄末，每个重复屠宰1只进行体成分的测定。结果表明，饲粮蛋白水平对13～18周龄鲁西斗鸡平均日增重、料重比和蛋白沉积量有显著影响（P〈0．05）；对19～24周龄鲁西斗鸡生产性能和蛋白沉积均无显著影响（P〉0．05）。以粗蛋白食入量（CPI）为因变量（Y），对应的日增重（aw）为自变量（x）进行线性回归，结合各阶段代谢体重，得出粗蛋白需要量（CPR）析因模型：13～18周龄：CPR=1．30W -0.75 776．70AW；19～24周龄：CPR=1．30W-0.75 ＋795．57AW。根据本试验结果，结合各阶段平均日采食量，得出13～18、19～24周龄鲁西斗鸡粗蛋白需要量分别为16．55％和15．05％。

日粮代谢能水平对鲁西斗鸡养分利用率的影响

为研究日粮代谢能（ME）水平对生长前期（1～6周龄）和生长后期（7～20周龄）鲁西斗鸡养分利用率的影响，本试验选用体重相近的同批饲养的健康鲁西斗鸡96只（公母各半），分6个处理，每个处理4个重复，每个重复4只。采用全收粪法，于42d和91d进行2次消化代谢试验。1～6周的ME水平分别为：11．98、12．19、12．38、12．62、12．81MJ／kg；7～20周的ME水平分别为：11．63、11．82、12．03、12．25、12．45MJ／kg。结果表明，本试验条件下，日粮代谢能水平对鲁西斗鸡生长前期（1～6周）和生长后期（7～20周）总能、干物质和有机物质的表观代谢率和真代谢率均无显著影响（P〉O．05），而显著影响粗蛋白质的表观代谢率和真代谢率（P〈O．05），1～6周龄12．62MJ／kg组粗蛋白质表观代谢率和真代谢率最高，分别显著高于11．98MJ／kg组26．37％和15．61％；7～20周龄11．82MJ／kg组粗蛋白质表现代谢率和真代谢率最高．分别显著高于11．63MJ／kg组7．90％和9．00％。本试验条件下，以生长前期和生长后期粗蛋白质表观代谢率和真代谢率为评价指标，鲁西斗鸡日粮适宜代谢能水平，生长前期（1～6周）为12．62MJ／kg，生长后期（7～20周）为11．82MJ／kg。

饲粮蛋白水平对鲁西斗鸡产肉性能及内脏器官发育影响的研究

本研究旨在探讨饲粮蛋白水平对鲁西斗鸡屠宰性能及内脏器官发育的影响。试验选用1日龄鲁西斗鸡雏鸡600只（公母混雏），随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复20只。试验分为0—6、7—12、13—18、19—24周4个阶段，采用单因子试验设计，各处理组分别饲喂不同蛋白水平的饲粮。在6、12、18、24周末，每重复屠宰1只进行屠宰指标及内脏器官重量的测定。结果表明，1）饲粮蛋白水平对6、12周屠体重、半净膛重、全净膛重有显著影响，对18周屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重及腿肌重有显著影响，对24周胸肌重、腿肌重有显著影响（P〈0．05）。饲粮蛋白水平对6、12、24周产肉率无显著影响（P〉0．05），对18周半净膛率、全净膛率、胸肌率有显著影响（P〈0．05）。2）饲粮蛋白水平对各阶段末内脏器官重无显著性影响（P〉0．05），内脏器官重随体重变化呈线性增长（P〈0．05）。以产肉量最高为依据，推荐0～6、7—12、13～18和19～24周鲁西斗鸡饲粮适宜粗蛋白水平（％）分别为：17．30、17．00、16．00、14．66。

饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡肠道发育的影响

为探讨饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡肠道发育的影响，并建立肠道发育的生长模型，试验选用1日龄鲁西斗鸡雏鸡600只（公母各半），随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复20只。试验分为O～6、7～12、13～18、19～24周4个阶段，采用单因子试验设计，各处理组分别饲喂不同蛋白质水平的饲粮。在6、12、18、24周末，每重复屠宰1只进行肠道指标的测定。结果表明：（1）饲粮粗蛋白质水平对6、12、18、24周末十二指肠、空肠及回肠长度和重号均无显著影响（P〉0．051）：（2）鲁西斗鸱十二指肠、牵肠及回肠鼋号随周龄变化符合Logistic模型。

饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡产蛋高峰期养分利用率、氮代谢和血清生化指标的影响

为了研究饲粮粗蛋白质水平对鲁西斗鸡产蛋高峰期养分代谢率、氮代谢和血清生化指标的影响。本试验选用35周龄体型基本一致(2.046±0.101)kg、健康的鲁西斗鸡60只,随机分为5组,每个组6个重复,每个重复2只。试验采取单因素试验设计,4个处理饲粮粗蛋白质水平依次为:14.0%、15.5%、17.0%和18.5%,剩余1组作为绝食代谢组。结果表明:鲁西斗鸡产蛋高峰期饲粮粗蛋白质水平对干物质、有机物、粗灰分和总能的表观和真实代谢率均无显著影响(P>0.05)。17.0%饲粮粗蛋白质水平组较14.0%组和15.5%组,可显著提高粗蛋白质代谢率(P<0.05),但是与18.5%组无显著差异(P>0.05)。各组间粗蛋白质的真实代谢率无显著差异(P>0.05);随饲粮粗蛋白质水平提高,氮排出量显著提高(P<0.05)。17.0%饲粮粗蛋白质水平组氮沉积率显著高于其他组(P<0.05)。将氮沉积量(Nr)与氮食入量(Ni)进行回归,得到回归公式如下:Nr=0.649Ni-0.258(R2=0.923),可得每天的氮维持需要量为0.216 4g/kgBW0.75;17.0%饲粮粗蛋白质水平组,BUN水平显著低于14.0%组(P<0.05),但是与15.5%组和18.5%水平组差异不显著(P>0.05)。饲粮粗蛋白质水平对血清TP、GLOB和A/G均无显著影响。综合以上结果:鲁西斗鸡产蛋高峰期,适宜的饲粮粗蛋白质水平为17.0%,粗蛋白质利用率最高,氮沉积率最高,血清生化指标最优。