绿袍散中金胺O检测方法的建立

目的:建立绿袍散中金胺O染色物的检测方法,并对其进行筛查,同时建立阳性样品中金胺O的含量测定方法。方法:采用HPLC-DAD法对绿袍散中的金胺O进行筛查,并采用HPLC-MS/MS对阳性样品进行确认。结果:对21批次样品进行筛查和确认发现,有2批样品检出金胺O。金胺O在1.01~5.06μg·ml^-1(r=0.9999)的范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.31%,RSD为1.36%(n=9)。阳性样品中检出的金胺O含量分别为132.60,137.41μg·g^-1。结论:本方法准确可靠,可作为绿袍散中金胺O的检测。

绿袍散及原料药中5种非法添加黄色染色剂的检测

目的建立可同时检测绿袍散及其原料中5种(金胺O、柠檬黄、日落黄、金橙Ⅱ和酸性橙10)非法添加黄色素的高效液相色谱二极管阵列检测器(ultra performance liquid chromatography-diode array detector,UPLC-DAD)检测方法,用于快速筛查绿袍散及原料中的非法添加染色色素。方法色谱柱为Acquity BEH C 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相分别以甲醇为流动相A、0.02 mol/L乙酸铵为流动相B进行梯度洗脱;柱温40℃;流速0.3 ml/min,检测波长:金胺O和柠檬黄为432 nm,日落黄、金橙Ⅱ和酸性橙10为484 nm;进样量:2μl。采用超高效液相色谱串联质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS)对UPLC-DAD检出色素的疑似阳性样品进行佐证和确认。结果5种色素对照品溶液在一定浓度范围内线性关系良好,线性相关系数(r)均大于0.9997;精密度良好,相对标准偏差(RSD)均小于1.03%;重复性良好;柠檬黄、日落黄、酸性橙10、金胺O和金橙Ⅱ峰面积的RSD分别为2.73%,2.92%,1.97%,1.56%和1.58%,表明该供试品溶液在24 h之内稳定性良好;回收率均在96.33%-99.34%之间。10批绿袍散样品中均未检出上述5种非法添加黄色素,6批原料药中仅有一批原料药(黄柏)中检出金胺O。结论UPLC-DAD技术应用快速、灵敏,且容易推广,可作为筛查绿袍散及其原料中5种非法添加黄色染料的检查方法。

绿袍散质量标准的建立

目的:提高绿袍散的质量标准。方法:采用显微鉴别法对处方中青黛、黄柏、山豆根、薄荷、黄连、儿茶进行定性鉴别;TLC法对处方中青黛、冰片进行定性鉴别;HPLC法测定绿袍散中盐酸小檗碱流动相为乙腈∶0.033 mol·L-1磷酸二氢钾(35∶65),检测波长:265 nm;HPLC法测定靛蓝、靛玉红的含量,流动相为甲醇∶水(70∶30),检测波长:289 nm,均采用OSAKA SODA CAPCELL PAK-C18反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流速:1.0 ml·min-1;柱温:30℃;进样量:10μl。结果:显微鉴别专属性强;TLC色谱斑点清晰,分离度好、专属性强;盐酸小檗碱的线性范围为24.56~393.00μg·ml-1(r=0.999 8),平均回收率为98.47%,RSD=1.8%(n=6)。靛蓝的线性范围为400.20~6 403.00μg·ml-1(r=0.999 7),平均回收率为98.59%,RSD=1.8%(n=6)靛玉红的线性范围为1.46~23.38μg·ml-1(r=0.999 8),平均回收率为91.29%,RSD=1.7%(n=6)。结论:本法操作简便,专属性强,重复性好,可用于该制剂的质量控制。