Acinetobacter lwoffii ChI-06合成几丁质酶抑制剂的发酵动力学研究

对Acinetobacter lwoffii ChI-06合成几丁质酶抑制剂的发酵过程和发酵动力学进行了研究。应用Logistic方程和Luedeking-Piret方程,得到了描述菌体生长、抑制剂合成及基质消耗的动力学模型。模型反映了该菌体合成抑制剂过程的动力学特征,模型值与实验数据拟合良好。

Detection of Multi-drug Resistant Acinetobacter Lwoffii Isolated from Soil of Mink Farm

There were 4 Acinetobacter lwoffii obtained from soil samples.The antimicrobial susceptibility of the strains to 16 antimicrobial agents was investigated using K-B method.Three isolates showed the multi-drug resistance.The presence of resistance genes and integrons was determined using PCR.The aadA 1,aac（3＇）-IIc,aph（3＇）-VII,aac（6＇）-Ib,sul2,cat2,floR,and tet（K）genes were detected,respectively.

鲁氏不动杆菌Acinetobacter lwoffii UL产类胡萝卜素的纯化与鉴定及其抗氧化活性检测

以鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii) UL发酵提取得到的类胡萝卜素粗提液为试材,用薄层层析(thin layer chromatography,TLC)和硅胶柱层析纯化后得到组分1和组分2;通过溶解性试验、HPLC、傅里叶红外光谱(fourier transform infrared spectrometer,FTIR)、核磁共振氢谱(nuclear magnetic resonance,1H-NMR)和液相质谱联用仪(UPLC-Q-TOF-MS-MS)对组分2进行鉴定,结果表明该色素为脂溶性色素,且含有多个甲基和亚甲基、多烯长链、苯环以及羰基等类胡萝卜素特征结构,初步推断其含有虾红素(astacen),以及较少的虾青素(astaxanthin)。采用ABTS、FRAP、DPPH三种方法评价类胡萝卜素粗提液、纯化后的组分1和组分2的抗氧化活性,结果表明类胡萝卜素粗提液具有抗氧化性,纯化后的类胡萝卜素抗氧化活性显著提高。

胡子鲇“吊头病”病原的研究

从患“吊头病”胡子鲇 (Clariasfuocus)的肝、肠和腹水分离出病原菌 ,用浸泡法和投喂法进行感染试验 ,两种方法的死亡率都在 80 %以上。通过细菌学和应用全自动化微生物鉴定系统 (VITEK - 12 0 )鉴定 ,结果表明 ,鲁氏不动杆菌 (Acinetobacterlwoffii)是胡子鲇“吊头病”的病原菌。用 2 5种抗生素进行敏感试验表明 ,鲁氏不动杆菌对其中大部分药物敏感 ,如普乐健、链霉素、卡那霉素、庆大霉素等 ,但对四环素、红霉素、苯唑青霉素、头孢他定不敏感。

一株洛菲不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究

目的研究洛菲不动杆菌对亚胺培南、美洛培南耐药的分子机制。方法K-B纸片琼脂扩散法检测洛菲不动杆菌B69对头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、阿米卡星的耐药性,琼脂对倍稀释法检测B69对亚胺培南、美洛培南的最低抑菌浓度;PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因,测序确定耐药基因型别;粗提酶水解亚胺培南纸片试验检测酶活性。结果洛菲不动杆菌B69具有多重耐药性;PCR扩增IMP基因阳性,经测序为IMP-8;粗提酶水解亚胺培南。结论产IMP-8型金属β-内酰胺酶是洛菲不动杆菌B69对碳青霉烯耐药的重要机制。

奶牛生乳中洛菲不动杆菌的分离鉴定与耐药性分析

对29份外观正常的奶牛生乳乳样进行乳品质分析和细菌学检测,利用16SrDNA序列分析鉴定乳样中分离的菌株,并进行14种药物的敏感性试验。结果表明,10份乳样有细菌检出,其中4份乳样中分离得到洛菲不动杆菌;药物敏感性结果表明,洛菲不动杆菌对复方新诺明具有较强的耐药性;乳品质分析结果表明,该4份乳样体细胞数(SCC)偏高,乳成分和部分理化性质与其他正常乳无明显区别。

奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA3’-23s rRNA 5’间序列的克隆及测序

目的:对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列(16S^23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行克隆测序,为分子探针技术鉴定两菌奠定基础。方法:针对临床常见致病菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列两端的16S及23S rRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物,对两菌进行扩增,利用PMD-18TVector质粒对两菌的PCR产物进行T载体克隆构建,测序后申报Genbank。结果:两菌的通用引物扩增产物构建的T载体克隆,测序结果经Blast分析,确定为两菌的ISR序列,申报Genbank获得接收。结论:成功的对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌ISR序列进行了克隆测序,该序列可以用于两种菌的通用引物PCR扩增技术鉴定。

美国青蛙腐皮病病原的研究

Three bacteria strains were isolated from the skin tissue of Rana grylio with "necrotic skin disease".After artificial infection by the bacteria strain skin 1-3 was determined to be the pathogen of the "necrotic skin disease".It was identified to be Acinetobacter lwoffii by VITEK-AMS-60 automatic identification system.The bacteria were rod shaped with a size of (0 75～0 93 ) μm×(1 5～2) μm, Gram-negative, and non-mobile. It was sensitive to 17 species of drugs and resistant to 5 drugs.

琼氏不动杆菌和鲁氏不动杆菌的临床分布及耐药分析

目的·回顾性分析上海市某三级甲等医院琼氏不动杆菌和鲁氏不动杆菌的临床分布及耐药情况,为临床防控该类菌奠定基础。方法·收集该院2011年8月—2016年8月琼氏不动杆菌和鲁氏不动杆菌,采用法国生物梅里埃微生物和药敏分析系统VITEK2 Compact进行细菌鉴定及药敏分析,分析其临床分布特点和耐药性。结果·共分离获得28株琼氏不动杆菌和58株鲁氏不动杆菌。前者样本来源主要是泌尿科、胸外科和老年科,样本种类主要是尿液和痰液,对庆大霉素、氨苄西林舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、左氧氟沙星、环丙沙星和复方新诺明的耐药率分别为35.71%、3.57%、10.71%、3.57%、3.57%、3.57%、3.57%、3.57%、0、3.57%和35.71%;而后者样本主要来源是泌尿科、老年科、呼吸科和肾内科,样本种类主要有尿液、痰液和血液,其对上述抗生素耐药率分别为29.31%、13.79%、13.79%、6.90%、20.69%、18.97%、12.07%、15.52%、18.97%、31.03%和31.03%。5年中这2种菌的耐药率基本恒定,亚胺培南和美罗培南耐药率略有升高。结论·琼氏不动杆菌和鲁氏不动杆菌的耐药率较已报道的鲍曼不动杆菌低,而且琼氏不动杆菌耐药率总体较鲁氏不动杆菌耐药率低;该分析可为防控由这2种菌引起感染的经验性用药提供数据支持。

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选、鉴定及降解酶初步提取

该实验采用富集培养的方法从土壤中筛选出有效降解玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的菌株。初筛采用ZEN涂布至无机盐培养基作为唯一碳源,复筛是以菌株的发酵液对ZEN的降解率作为评价指标,得到一株菌株A.lwoffi.Haut.1,其发酵液在37℃下与5μg/m L ZEN共培养48 h,降解率高达93.54%。经16S rDNA基因测序分析、生理生化实验和菌落形态观察初步对菌株进行鉴定,并对该菌株的降解活性物质进行初步定位,最终探究丹宁-聚乙二醇法和盐沉法对无细胞上清液进行粗降解酶的提取效果。结果表明,该菌株鉴定判断为鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii);该菌株的无细胞上清液的降解率最高为82.31%,无细胞上清液经加热处理、蛋白酶K处理和蛋白酶K+SDS处理后,降解率分别为20.10%、41.67%和18.68%,说明降解活性物质主要为胞外酶;当单宁浓度为15 mg/mL,聚乙二醇溶液浓度为10 mg/mL,提出的酶液降解率为64.33%,而盐沉法加入60%硫酸铵提出的粗酶液降解率为20.30%,因此,单宁聚乙二醇法提取降解酶效果更好。该研究为菌株降解ZEN的作用机理提供了研究基础,也为生物降解ZEN提供了新的研究材料。

荧光定量 PCR 检测原料乳中鲁氏不动杆菌方法的建立

为建立鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)的快速检测方法,本研究以A.lwoffii中的β-内酰胺酶基因(ALbla_(OXA-134))为目的基因设计特异性引物,建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测A.lwoffii的方法。结果显示,该方法可快速检测A.lwoffii的存在,检测灵敏度为2.4×10~2cfu/m L,建立的标准曲线为y=-3.838x+40.93,相关系数为0.993。与其他原料乳中常见的微生物均未发现交叉反应。人工阳性样品乳中A.lwoffii的检测限为2.4×10~3cfu/m L。最后,对2015年11月至2016年1月长江下游地区8个牧场的原料乳进行监测。结果表明该检测方法具有较好的敏感性、特异性和实用性,为快速检测原料乳中的A.lwoffii提供了有力的技术支撑,有利于保障原料乳的质量安全。

洛菲不动杆菌株多药耐药NDM-1基因的鉴定

目的检测并鉴定洛菲不动杆菌多药耐药菌株中新德里金属β内酰胺酶新德里金属β-内酰胺酶(new delhi metallo-β-lactamase,NDM)-1基因表达。方法抗菌药物最小抑菌浓度(minimal inhibitory,MIC)筛选多药耐药菌株,PCR方法鉴定候选菌株中金属β-内酰胺酶基因,经PCR测序、亚胺培南和亚胺培南+EDTA复合纸片的双纸片协同法鉴定金属β内酰胺酶表型,并采取接合实验和全基因组测序来确定NDM-1。结果自458株金属β-内酰胺酶阳性菌株中分离出一株洛菲不动杆菌,并检出NDM-1基因,此菌株并不合并存在VIM和IMP金属β-内酰胺酶基因阳性表达。该菌株对所有的β-内酰胺类抗生素均不敏感,而对阿米卡星、多粘菌素、替加环素敏感。全基因组测序确定其位于一个48.9 kb的质粒上,目标带纯化后克隆、扩增的目标序列与文献报道的NDM-1基因同源性为100%。结论 NDM-1是一种针对碳青霉烯类抗生素耐药的新机制,临床工作者应关注其对洛菲不动杆菌多药耐药的影响。

鲁氏不动杆菌降解高效氯氰菊酯条件的响应面优化

目的探讨鲁氏不动杆菌J-2降解氯氰菊酯的最优条件。方法以鲁氏不动杆菌J-2为对象,采用单因素法考察环境因素对鲁氏不动杆菌降解高效氯氰菊酯效果的研究,再采用Box-Behnken实验设计和响应曲面法(RSM)优化降解条件。结果单因素培养温度、底物浓度和装载量为影响菌株J-2降解高效氯氰菊酯的主要因素,响应面优化的最优条件下鲁氏不动杆菌J-2在72 h对高效氯氰菊降解率达到81.5%,降解量可达9.78 mg。结论响应面法优化菌株J-2降解高效氯氰菊酯的最优条件为:温度25℃、底物浓度300 mg/L、初始pH 6.0,接种量9%,装载量40 mL,本研究为菌株应用于去除或消减拟除虫菊酯农药污染的环境提供理论基础。

养殖鳗鲡红头病的研究

1995年2月—1996年10月,对欧洲鳗鲡红头病进行了病原菌分离、人工感染、病原菌生理、生化特性和药物敏感性的测定,观察了病理组织变化。结果认为病原菌鲁氏不动杆菌为革兰氏染色阴性、无动力的双杆状菌,接触酶阳性,氧化酶、旷V—P反应、MR反应、吲哚反应、H_2S产生阴性、对四环素、强力霉素、妥布霉素敏感。主要病变为头部水肿、出血、鳃丝水肿、溃烂,肝脏细胞实质性坏死,形成坏死结疖、肾小管上皮层分解,血细胞浸润形成溃疡灶、脾脏充血、肿大、细胞相互融合。

野生疣鼻天鹅洛菲不动杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

为确认导致野生疣鼻天鹅(Cygnus olor)死亡的致病菌,2020年8月,从三门峡天鹅湖国家城市湿地公园病死的野生疣鼻天鹅脏器中分离到可疑致病菌株HeNSMX-1,经染色镜检、细菌MALDI-TOF鉴定和16S rDNA序列分析,确定该分离菌株为洛菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)。采用纸片法分析HeNSMX-1菌株的耐药性,结果显示:对阿米卡星、加替沙星、多西环素、卡那霉素、环丙沙星、头孢噻肟、庆大霉素和氧氟沙星敏感,对阿莫西林、氨苄西林和头孢克肟耐药。

菌株对苜蓿和燕麦中木质素降解的影响

优质苜蓿和燕麦干草对草食畜牧业高效健康发展起着重要作用,但是苜蓿和燕麦干草中含有木质素,而木质素一定程度上阻碍了苜蓿和燕麦干草等饲草营养效果的发挥。为了探究生物发酵对木质素降解的效能,提升苜蓿和燕麦的饲用价值,以金皇后紫花苜蓿和燕科2号燕麦为研究对象,将初花期苜蓿和灌浆期燕麦刈割后,晾晒、压捆。将具备降解木质素功能的阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai,BA)、约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii,AJ)、鲁菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii,AL)、云南微球菌(Micrococcus yunnanensis,MY)、类动胶杜擀氏菌(Duganella zoogloeoides,DZ)和鞘氨醇杆菌(Sphingobium yanoikuyae,SY)6株细菌菌株,经活化后制备为菌液,添加至苜蓿和燕麦干草中,利用近红外光谱分析仪对处理前后苜蓿和燕麦干草的干物质、粗灰分、粗脂肪、粗蛋白、木质素、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维等含量进行测定,评估其饲用价值。结果表明,6株试验菌添加至苜蓿干草,木质素含量以及中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量的变化规律基本一致,均有不同程度降低,其中,鲁非不动杆菌对苜蓿干草的营养成分和饲用价值的改善较好,使得苜蓿干草的营养成分和饲用价值显著提升;而在燕麦干草中分别添加6株菌剂未能提升其饲用价值。在调制苜蓿干草中,可以添加菌剂降解木质素而提升干草的品质。

鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌的医院感染情况及耐药性分析

目的了解鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌的医院感染和细菌耐药情况。方法收集2016年1月1日至2018年12月31日该院临床标本中分离的鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌,并对标本来源、分布和药敏试验结果进行分析。结果186株鲍曼不动杆菌来源科室主要分布于呼吸内科、康复医学科、神经内科、肾内科和内分泌科,标本以痰液和中段尿为主,对替卡西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、头孢吡肟和庆大霉素的耐药率分别为26.03%、24.76%、22.86%、18.70%、18.70%、18.20%和16.60%。51株洛菲不动杆菌来源科室主要分布于呼吸内科、泌尿外科、神经内科、肾内科和康复医学科,标本以痰液和中段尿为主,对头孢他啶、环丙沙星、亚胺培南、头孢吡肟、替卡西林/克拉维酸、美罗培南和庆大霉素的耐药率分别为24.00%、22.00%、18.00%、18.00%、15.62%、14.00%和10.00%。结论两种不动杆菌都主要分离于老年男性的呼吸道标本,二者的耐药率均不高,洛菲不动杆菌的总体耐药率低于鲍曼不动杆菌,但是耐碳青霉烯类抗菌药物的洛菲不动杆菌的检出率高于耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌,需要引起重视。

苯酚降解菌UW7的鉴定及对苯酚的降解作用

从焦化厂污水处理曝气池泥样中分离出具有降解苯酚能力的UW7菌株,根据形态、生理生化性状初步鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter).该菌16S rRNA基因序列(在GenBank中的登录号为GU083586)与多株鲁氏不动杆菌(A.lowffii)的相似性在99%以上.结合形态、生理生化特性,鉴定UW7菌株为鲁氏不动杆菌(A.lowffii UW7),该种细菌具有降解苯酚的特性尚未见报道.该菌株降解苯酚的最适温度为30℃,最适生长pH 7.0,对2.5 g/L浓度的苯酚能够有效降解,对3.5～4.0 g/L浓度的苯酚有较强的耐受能力,是处理高浓度苯酚废水的良好菌种资源.

鲁氏不动杆菌的临床分布及耐药性分析

目的探讨鲁氏不动杆菌的临床分布及耐药性,以指导临床合理用药。方法分析2007年5月-2012年10月20株鲁氏不动杆菌的临床分布,采用美国BD公司phoenixTMl00全自动细菌鉴定/药敏仪及配套试剂NMIC/ID-4进行药敏试验,检测其对16种常用抗菌药物的耐药性。结果 20株鲁氏不动杆菌从男性标本分离出的有12株占60.0%,女性8株,占40.0%;科室分布以呼吸内科、消化内科、心内科、泌尿科、ICU为主,分别占25.0%、15.0%、10.0%、10.0%、10.0%;标本分布以痰液和尿液为主,分别占50.0%和25.0%;鲁氏不动杆菌仅40.0%为多药耐药菌,该菌对氨苄西林、氨曲南、头孢拉定的耐药率高,>90.0%;对氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类等抗菌药物较敏感,耐药率<40.0%。结论鲁氏不动杆菌在男性患者、痰液标本及呼吸内科中检出居多,目前耐药性尚不严重,对β-内酰胺类的抗菌药物普遍耐药,临床可选用氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类等敏感抗菌药物进行治疗。

携带bla_(NDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中的适应度代价

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒丢失的10621衍生菌株,利用生长曲线、生物被膜、无营养生存时间等体外适应度测量实验,分析10621NDM-1(+)及质粒缺失的10621NDM-1(-)之间的适应度差异。【结果】pNDM-BJ01在10621菌株中不稳定,连续传代11次即在群体中完全丢失。在26℃和37℃下,10621NDM-1(-)与10621NDM-1(+)菌株的生长曲线无显著性差异。在26℃条件下,10621NDM-1(-)菌株形成生物被膜的能力明显强于10621NDM-1(+),而在37℃条件下,10621NDM-1(+)强于10621NDM-1(-)。在无营养的PBS缓冲液中,10621NDM-1(-)菌株生存能力明显高于10621NDM-1(+)。【结论】编码blaNDM-1的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中具有较大的适应度代价,缺失这一质粒的菌株在外界环境中的生存能力强于抗性菌株,pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌存续与扩散的能力有限。