雷可肽生物合成中LxmX的表达纯化与结晶

雷可肽是一种对革兰氏阳性菌具有强抑制活性的第V类新型羊毛硫肽,其生物合成关键酶LxmX的蛋白晶体结构对雷可肽的生物合成机制解析至关重要。本研究构建了LxmX及其突变体LxmX’(S129/189M)的重组表达载体pPSUMO-lxmX和pPSUMO-lxmX’(S129/189M),并优化了表达条件,最终以Escherichia coli BL21(DE3)/pGro7为宿主,在0.1 mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达。通过镍柱亲和层析、TEV酶切、superdex200柱层析纯化得到纯度较高的蛋白。利用坐滴法点晶,20℃培养,经过结晶条件初筛和优化,得到了符合衍射条件的晶体。研究结果为解析LxmX的结构和研究雷可肽生物合成机制奠定了基础。