单细胞测序揭示Ly6E分子对乳腺癌4T1细胞移植瘤微环境中DC浸润及功能的抑制作用

目的:本研究利用单细胞RNA测序分析技术(scRNA-seq)初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物E(Ly6E)调控肿瘤免疫微环境(TIME)的潜在机制。方法:利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞(Ly6E-KO),观察其和野生型细胞(Ly6E-WT)体外增殖和体内生长能力的差异。流式细胞术分选两类肿瘤组织中的CD45阳性细胞,再进行sc RNAseq分析。对于测序结果,首先利用Seurat软件包筛选差异表达基因谱,根据标记基因进行注释;再利用Cellchat和Monocle2软件分析细胞互作关系和特定免疫细胞的演化轨迹。结果:与Ly6E-WT相比,Ly6E-KO体外增殖能力无显著差异,但体内生长能力显著降低(P<0.001)。ScRNA-seq分析显示,Ly6E-KO移植瘤浸润DC比例显著高于Ly6E-WT,且DC处于更加活跃的增殖和分裂状态;三种DC亚群(pDC、cDC1和cDC3)与T细胞均存在显著的互作关系。同时发现,Ly6E-KO肿瘤中浸润T淋巴细胞增殖、活化及效应相关的基因表达水平均升高,提示Ly6E-KO具有更强抗肿瘤能力。最后,本研究对人类乳腺癌队列的sc RNA-seq数据进行了分析,进一步证实了上述发现。结论:肿瘤细胞Ly6e基因敲除后可通过增加TIME中DC活化及浸润,继而增强机体抗肿瘤免疫应答。

禽流感病毒NS1蛋白与鸡LY6E蛋白间的相互作用

利用细菌双杂交系统,研究了禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)非结构蛋白(Nonstructurol1protein,NS1)和鸡淋巴细胞抗原复合体(LY6E)蛋白之间的相互作用。用RT-PCR方法克隆了AIV NS1基因和鸡LY6E基因的全长开放阅读框,将其克隆于细菌双杂交系统中的2个质粒中,成功构建了重组诱饵质粒pBT/NS1和重组目标质粒pTRG/LY6E。SDS-PAGE电泳表明,IPTG诱导后它们均得到正确表达。将重组质粒pBT/NS1和pTRG/LY6E共转化报告菌株,获得的阳性共转化子在含有3-AT和链霉素的组氨酸缺失的M9+筛选培养基上生长,表明AIV NS1蛋白和鸡LY6E蛋白之间存在相互作用,为AIV致病机制的研究提供了新的资料。

用生存分析模型挖掘LY6E基因表达与胃癌放疗敏感性关系研究

目的:验证Lymphocyte antigen 6 complex,locus E (LY6E)的表达与胃癌放疗敏感性有联系的这一假设。方法:采用TCGA数据库中公开的胃癌数据,将胃癌的数据随机地分为两部分,一份作为测试数据,另一份作为验证数据。以P值为0. 05作为显著性判断标准。结果:LY6E的表达对于胃癌患者的总生存无明显联系;在测试和验证数据中,LY6E高表达的胃癌患者在放疗与非放疗两组间的总生存差异无统计学意义(P>0. 05),多因素调整后仍然无统计学意义(P> 0. 05)。多因素调整后,验证数据与测试数据的HR值分别为0. 72(0. 29-1. 76)和1. 28(0. 47-3. 47),P值为0. 47和0. 63;另一方面,在LY6E低表达的胃癌患者中,放疗组的生存率比非放疗组有着明显的提高,验证数据与测试数据的HR值调整后为0. 05(0. 005-0. 46)和0. 06(0. 01-0. 36),P值为8. 39*10-3和2. 36*10-3。结论:低表达的LY6E与胃癌放疗敏感性有明显的关联,LY6E低表达的患者接受放疗后生存率明显升高,表明LY6E是胃癌精准放疗的潜在的有效分子标记物。

细胞膜锚定蛋白LY6E对T细胞活化及HIV-1感染的相关研究

淋巴细胞抗原6复合体E(LY6E)是细胞膜表面的糖基磷脂酰肌醇(glycosylphophatidylionositol,GPI)锚定蛋白,对T细胞功能的影响以及在HIV-1感染中起到的作用并不明确.本实验构建了LY6E过表达的Jurkat稳定细胞系Jurkat-LY6E,并用anti-CD3和anti-CD28抗体刺激该细胞系活化后检测相应细胞因子表达,实验结果表明,LY6E过表达的Jurkat细胞系产生白介素-2(interleukin-2,IL-2)的水平要明显高于对照细胞系Jurkat-p WPI;而利用HIV-1假病毒感染Jurkat细胞,结果表明LY6E并未对HIV-1复制产生明显影响.综上所述,LY6E分子可以促进T细胞活化,但并不能影响HIV-1假病毒在T细胞中的感染复制过程.

淋巴细胞抗原6复合物E的表达与POF方案治疗晚期胃癌疗效的相关性分析

目的:探讨晚期胃癌患者中淋巴细胞抗原6复合物E(LY6E)的表达与"紫杉醇脂质体+奥沙利铂+氟尿嘧啶"(POF)方案化疗疗效的关系。方法:收集45例一线接受POF化疗的晚期胃癌患者的临床、病理资料,采用免疫组化法检测其LY6E的表达情况,计算客观有效率(ORR)和疾病控制率(DCR),统计分析LY6E的表达与胃癌患者临床病理特征、近期疗效及临床受益率的关系。结果:45例患者中,LY6E的阳性率为71.1%。未分化-低分化腺癌LY6E的阳性表达率显著高于中-高分化腺癌(78.9%vs 28.6%,P<0.05)。45例患者ORR为31.1%,DCR为55.6%,临床受益率为40.0%。与LY6E(-)患者相比,LY6E(+)患者的ORR、DCR和临床受益率均显著降低(ORR:18.8%vs 61.5%;DCR:43.8%vs 84.6%;临床受益率:28.1%vs 69.2%)(P<0.05)。LY6E的表达与POF方案所致化疗毒副反应无显著相关性(P>0.05)。结论:LY6E与晚期胃癌分化程度相关,晚期胃癌患者中LY6E的表达可能成为预测POF方案化疗敏感性的新指标,并有可能成为胃癌治疗潜在的新靶点。

类风湿关节炎患者Ⅰ类干扰素效应基因表达的应用价值

目的:检测类风湿关节炎(RA)患者和正常对照组Ⅰ类干扰素(IFN)效应基因mRNA的表达,探讨IFN在RA发病过程中的意义。方法:收集32例RA患者和健康体检人群,分为治疗前RA组、治疗后RA组和正常对照组,患者均为首次就诊或未使用改变病情抗风湿药,留取全血,采用qP CR方法检测MXA、MXB、IFIT1、IFIT2、ISG15、HERC5、Ly6E、RSAD2、EPSTRI1、IFI44L、IFI35和IFI6基因mRNA的表达,检测血清抗CCP抗体和RF,比较mRNA组间基因表达差异及与自身抗体水平相关性。结果:IFIT1、ISG15、HERC5、MXA、MXB、Ly6E和RSAD2在治疗前RA患者组中的mRNA表达水平高于治疗后RA组(P<0.05),IFIT2、ISG15、HERC5、MXA、MXB、Ly6E、RSAD2、EPSTRLI1和IFI35在治疗前RA组中mRNA的表达水平均高于正常对照组(P<0.05),ISG15、HERC5、RSAD2在治疗后RA组中mRNA的表达水平均高于正常对照组(P<0.05)。IFI6、IFIT2、IFI35、ISG15、MXB、Ly6E、EPSTRI1和MXA的mRNA的表达水平与抗CCP抗体呈正相关性(r=0.354～0.667,P<0.05),IFI6、IFIT2、IFI35、MXB、Ly6E、和MXA的mRNA的表达水平与RF呈正相关(r=0.362～0.579,P<0.05)。结论:RA患者炎症细胞IFN效应基因mRNA表达升高,表明IFN可能是RA自身免疫反应的诱发因素。

淋巴细胞抗原6E研究进展

淋巴细胞抗原6E(LY6E)是LY6/uPAR超家族成员之一,通过其C端的糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜表面。LY6E在T细胞发育和活化、肿瘤细胞生长和迁移以及病毒感染中发挥着重要作用。LY6E广泛表达于人的多种组织器官中,但与正常细胞相比,其在多种癌细胞中的表达量均明显升高。因此,LY6E被视为治疗恶性肿瘤的潜在靶点,目前靶向LY6E的抗体药物偶联物DLYE5953A已完成临床Ⅰ期试验。此外,LY6E能影响冠状病毒、人类免疫缺陷病毒、甲型流感病毒和登革热病毒等多种病毒感染,其第36位的亮氨酸在病毒感染过程中发挥着重要作用。对LY6E的深入研究,可为人类应对恶性肿瘤和病毒感染治疗提供新的策略。该文将对LY6E的生物学功能进行综述。