类胡萝卜素合成酶基因LycB导入番茄的研究

以4个番茄品种的子叶为受体,以LycB为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对番茄进行了遗传转化,经愈伤诱导、芽诱导、生根培养和潮霉素选择培养,获得的抗性植株经PCR和PCR-Southern分析鉴定,初步证明外源基因LycB已整合到番茄的基因组中。

根癌农杆菌介导的番茄遗传转化

利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA101携带LycB基因(番茄红素β-环化酶)和潮霉素抗性基因,以东农704、708、709三个番茄品种的子叶、茎段为转化受体对番茄进行遗传转化,经PCR分子检测初步证明,目的基因LycB已整合进番茄基因组中。

番茄ACC合酶反义基因对河套蜜瓜的转化

河套蜜瓜（CucumismeloLcvHetau）的子叶经预培养。芽诱导和生根培养，获得再生小植株，诱导率达58％。取带有番茄ACC合酶反义基因的双元载体pMQ6／JM109与农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）LBA4404经三亲融合后，与在MS0上萌发5d、并在MS＋1mg／LNAA培养基上预培养3d的子叶共培养48h，然后转入含50mg／L卡那霉素的MS＋6mg／LZT的芽诱导培养基中，1l个月后诱导生芽，待芽长1．5－2cm时转入生根培养基中，1－2周后可诱导产生大量的根，形成完整的转基因小植株。经PCR和分子杂交检测证明，目的基因已整合入河套蜜瓜的基因组中。

加工番茄遗传转化再生体系的建立

加工番茄种子出芽后7-8 d,子叶剪成约0.2-0.4 cm,0.3-0.5 cm的小块,以MS＋B5为基本培养基,附加IAA0.2 mg/L分别与0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mg/L的6-BA/ZT/TDZ组合;6-BA2.0 mg/L分别与0.0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L的IAA/IBA/NAA组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT/TDZ与0.2mg/LIAA组合中,出芽率最高的培养基为MS＋ZT1.0 mg/L＋IAA0.2 mg/L和MS＋TDZ2.0 mg/L＋IAA0.2 mg/L。在不同浓度的IAA/IBA/NAA与6-BA2.0 mg/L组合中,IAA明显优于NAA和IBA,筛选出MS＋2.0 mg/L6-BA＋1.0 mg/LIAA为最佳生芽培养基。以1/2MS添加NAA//BA0.0,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L进行生根比较,再生芽在MS＋0.5 mg/L IBA生根培养基上生根最好,并发育成完整的小植株。

番茄子叶外植体转化系统的优化

目的 :对番茄子叶外植体的转化进行优化 ,为进行转基因番茄的研究奠定基础。方法 :通过正交设计实验 ,以子叶外植体的存活天数为观察指标 ,分别对农杆菌稀释浓度、浸染时间和转化方式等条件进行优化。结果 :在子叶预培养 2d、活化农杆菌稀释倍数约 30倍、侵染时间为 1 0min、共培养时间为 2d的情况下 ,子叶存活时间最长 ,抗性芽产生频率达 2 5 %。结论 :获得了高效的番茄子叶外植体转化系统 。

红番3号加工番茄遗传转化再生体系的建立

本研究以加工番茄红番3号子叶为外植体,对加工番茄再生体系无菌苗的苗龄、培养基激素的配比和培养基基质选择方面进行优化。结果表明:8～10 d的子叶为最佳的外植体。以MS为基本培养基,附加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)分别与不同浓度6-BA(1.0、1.5、2.0、2.5mg·L-1)/ZT(0.1、0.5、1.5、2.0mg·L-1)的组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT与不同浓度IAA组合中,诱导出愈伤组织和不定芽分化最高的培养基为MS+ZT 0.5mg·L-1+IAA 0.1mg·L-1+植物凝胶2g·L-1。以1/2MS添加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)进行生根比较,再生芽在1/2MS+IAA 0.1mg·L-1生根培养基上生根最好。

番茄06P28子叶受体系统建立的研究

以番茄06P28为试材,对其子叶分化培养基及该材料对潮霉素和羧苄青霉素的天然耐性进行了研究。结果表明:适宜的分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L,潮霉素的筛选浓度和羧苄青霉素的抑菌浓度分别以10 mg/L3、50 mg/L为宜。

抗番茄花叶病毒RNAi载体转化加工番茄

加工番茄是普通番茄中的一种栽培类型,主要特点是矮化,果实比普通栽培番茄略小,果皮比普通栽培番茄厚,耐贮藏运输,目前已逐渐成为新疆的特色产业和出口创汇的支柱产业。ToMV（番茄花叶病毒）是影响新疆加工番茄产量的重要病害,发病时可造成番茄严重减产。药剂、疫苗等均起不到有效的防治作用。抗病毒育种是最经济、有效的防治方法。

番茄cry1基因果实特异性植物表达载体的构建及其转化番茄的研究

隐花色素(cryptochrome)是一类对UV-A/蓝光作出应答的光受体。果实特异性植物表达载体是用在番茄果实中特异表达的Lefsm1基因的启动子(fsp)替换质粒pBI121原有的35S启动子构建而成(称为pBI121fsp)。将番茄隐花色素家族成员之一cryptochrome1中465bp特异片段导入到植物载体pBI121fsp构建成果实特异性表达的RNAi植物表达载体(pBI121fsp-cry1),通过根癌农杆菌介导转入番茄子叶,经组织培养成功获得转基因植株。为后续对CRY1与番茄果实中抗氧化剂番茄红素之间的关系研究提供了材料。