枸杞叶黄酮对HepG2细胞脂质代谢的影响及作用机制

目的:以正常培养和油酸诱导培养的HepG2细胞为模型,探讨枸杞叶黄酮(Lycium barbarum leaves flavonoids,LBLF)对HepG2细胞脂质积累的影响。方法:实验划分为空白组、模型组、阳性对照组以及LBLF低、中、高剂量组。通过油红O染色判断各组别的脂滴聚集情况,并测定各组别脂质水平、氧化应激指标,最后通过实时聚合酶链式反应和Western blot检测脂质生成相关关键基因mRNA水平和蛋白水平的表达情况。结果:LBLF可减少油酸诱导的HepG2细胞内甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇以及丙二醛和活性氧的水平,提升高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、过氧化氢酶水平。同时,Western blot结果显示LBLF干预能上调磷酸化AMP活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,p-AMPK)/AMPK水平,下调甾醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1c,SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome?proliferator-activated?receptor?γ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinalpha,CEBPα)蛋白的表达;实时聚合酶链式反应结果表明,LBLF干预能下调ACC、FAS、SREBP-1c、SCD-1、PPARγ、CEBPα等基因的表达。结论:枸杞叶黄酮可通过调节脂质生成和氧化相关基因的表达水平,部分缓解由油酸诱导的HepG2细胞脂质代谢紊乱。

超声波辅助双水相法提取枸杞叶黄酮及其胰脂肪酶抑制活性

[目的]开发一种安全、无毒且高效的枸杞叶黄酮类化合物提取方法。[方法]采用超声波辅助双水相法实现高得率、绿色的枸杞叶黄酮类化合物提取,并评价产物活性。通过单因素和Plackett-Burman(PB)试验考察各因素对黄酮提取效果的影响,选取聚乙二醇(PEG400)使用量、硫酸铵使用量、料液比3个因素通过响应面中心组合试验设计优化提取条件;通过胰脂肪酶活性抑制试验评价提取物活性。[结果]超声波辅助双水相法提取枸杞叶黄酮最佳工艺条件为:聚乙二醇PEG相对分子质量400,PEG质量分数28%、硫酸铵质量分数16%、超声功率250 W,超声处理时间40 min、超声处理温度40℃、料液比1∶30 (g/g),该条件下所提取的枸杞叶黄酮提取物的总黄酮含量为(486.30±3.29) mg/g,其对胰脂肪酶活性具有显著抑制作用,半数抑制质量浓度(IC50)为1.06 mg/mL。[结论]最优提取条件下,超声波辅助双水相法所提取的枸杞叶黄酮得率高、溶剂残留低,该方法所得枸杞叶黄酮对胰脂肪酶具有良好的抑制作用。

不同品系及成熟度宁夏枸杞叶资源化学研究及抗氧化活性评价

目的分析不同品系及不同成熟度宁夏枸杞叶中多类型资源性化学成分及抗氧化活性差异,为其资源化利用提供依据。方法采用UPLC-TQ-MS技术对不同成熟度的果用和叶用2种宁夏枸杞(宁杞7号、宁杞菜1号)叶中的黄酮类、酚酸类和生物碱类等19种主要化学成分进行分析测定,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)及2,2'-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力、铁离子还原能力评价其抗氧化活性。结果叶芽和幼叶中各成分含量显著高于嫩叶和成熟叶。果用宁夏枸杞叶中芦丁含量较高,而叶用宁夏枸杞叶中槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷和甜菜碱含量较高。所有样品均呈现良好的抗氧化性,且随着成熟度增加抗氧化活性均呈现减弱趋势。宁杞菜1号幼叶的DPPH清除能力最高,叶芽的ABTS自由基清除能力和铁离子还原能力较强,而宁杞7号叶芽3者均较高。叶用宁夏枸杞叶的抗氧化活性较果用宁夏枸杞叶高。宁夏枸杞叶抗氧化活性与隐绿原酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷、绿原酸、甜菜碱含量呈显著正相关。结论不同品系不同成熟度宁夏枸杞叶所含资源性成分含量及抗氧化活性差异较大,果用和叶用宁夏枸杞叶芽与幼叶各成分含量均较高且均具有较好的抗氧化活性,具有较高的开发应用价值,叶用宁夏枸杞叶开发应用价值高于果用宁夏枸杞叶。研究结果可为不同品系及不同成熟度宁夏枸杞叶的资源化利用提供参考。

不同采收期宁夏枸杞叶中总黄酮含量的比较

The contents of total flavonoids in leaves of Lycium barbarum L.at different picked times were determined by RP-HPLC.It was showed that thecontent of total flavonoids in leaveswas the highest(1.99%) in May and the second(1.36%) in August,and decreased sharply after September and went down to the lowest in October(0.36%).So the best picked time in Xi′ning City,Qinghai Province was early summer.Moreover,contents of three major aglycones,such as quercetin,kaempferol and isorhamntin,were compared.Consistently for all picked times,the content of quercetin was much higher than those of kaempferol and isorhamntin.

宁夏枸杞体外抗氧化机理研究

目的:研究宁夏枸杞中主要的4种抗氧化物质(枸杞多糖、黄酮、类胡萝卜素和VC)的抗氧化能力,分析它们对枸杞果实总抗氧化能力的贡献率,探索宁夏枸杞果实的体外抗氧化机理。方法:采用FRAP法、DPPH法、ABTS法和清除羟自由基法4种体外抗氧化方法来评价枸杞鲜果的总抗氧化能力。结果:4种方法测得枸杞黄酮对枸杞果实总抗氧化能力的贡献率均大于96%,VC对枸杞果实总抗氧化能力的贡献率均小于4%,高质量浓度的枸杞多糖(642.7170 mg/L)和类胡萝卜素(109.9280 mg/L)检测不到抗氧化能力。结论:枸杞黄酮的抗氧化能力决定着枸杞果实的体外抗氧化能力。

枸杞总黄酮类化合物抗脂质过氧化研究

利用Ｆｅ２＋－Ｃｙｓ－Ｈｉｓ体系诱发鼠肝线粒体和红细胞产生脂质过氧化的方法，研究了枸杞总黄酮类化合物（ＴＦＬ）的抗脂质过氧化作用。结果表明，ＴＦＬ可阻断该体系诱发的鼠肝线粒体脂质过氧化，当ＴＦＬ终浓度在０．０２５～２．０ｍｇ／ｍｌ范围时，对丙二醛（ＭＤＡ）生成阻断率为３８．３８％～９９．９６％，呈剂量－效应关系，同时具有保持线粒体膜流动性的作用。扫描电镜观察到ＴＦＬ对脂质过氧化所致红细胞形态结构的破坏有保护作用。

枸杞黄酮类化合物清除氧自由基及对小鼠L_(1210)癌细胞能量代谢的抑制作用

采用ＥＳＲ自旋捕捉法和微量量热法能量研究了枸杞总黄酮（ＴＦＬ）对活性氧自由基的清除作用，及对Ｌ１２１０细胞热代谢的影响。结果表明：在Ｆｅｎｔｏｎ体系中，ＴＦＬ７．５～２００ｍｇ／Ｌ对ＯＨ·的清除率为２０％～７２％；在Ｘａｎ／ＸＯ体系中ＴＦＬ０～２１７ｍｇ／Ｌ，Ｏ－·２清除率为０～５１％；ＴＦＬ０．５６ｇ／Ｌ对多形核白细胞ＰＭＮ呼吸爆发的产热峰完全抑制，对Ｌ１２１０细胞的能量代谢有明显抑制作用，对正常大鼠ＰＭＮ能量代谢有促进作用。

枸杞果酒发酵过程中黄酮含量的变化

以宁夏枸杞为原料,选用两种酵母进行发酵,跟踪检测发酵过程中发酵醪中黄酮含量、pH值、酒精体积分数的变化。结果发现:发酵过程中黄酮含量持续增加至最大值后基本保持不变,酒精体积分数不断增大至最大值后基本保持不变,经过回归分析,两者之间呈现良好的相关关系,并得到了其回归模型;发酵醪的pH值在发酵前期表现为轻微下降,下降至一定值以后基本保持不变;不同的酵母菌种对发酵过程中各组分的变化趋势无影响,但各组分的变化速度不同。

大孔吸附树脂纯化枸杞总黄酮的研究

研究大孔吸附树脂纯化柴达木枸杞总黄酮的工艺条件及参数。通过比较11种大孔吸附树脂的静态吸附解吸性能,筛选出适合纯化柴达木枸杞总黄酮的树脂类型;并进行动态吸附解吸实验,利用单因素和响应面法优化大孔吸附树脂纯化柴达木枸杞总黄酮的工艺条件。结果表明,HPD400型大孔吸附树脂的纯化效果最佳,最佳纯化工艺条件:以16.0mLpH为4.0的柴达木枸杞总黄酮粗提液上柱,流速1.0mL/min;充分吸附后用3BV去离子水洗柱,然后用23.0mL80%乙醇溶液以流速1.0mL/min进行解吸。此工艺的平均回收率为89.92%;经HPD400树脂纯化后提取物中总黄酮含量从10.80%提高到27.62%。

枸杞中黄酮类化合物纯化工艺的研究

采用静态吸附法筛选适合纯化枸杞黄酮类化合物的大孔树脂,并优化其动态吸附纯化工艺。静态吸附纯化试验表明:供试4种大孔树脂中,HPD-100对枸杞中黄酮类化合物吸附量最高,解吸率达到82.15%。动态吸附纯化试验表明:上样浓度为5.0mg/mL、上样流速为2.0mL/min、洗脱液乙醇质量分数为50%、洗脱速度为1.5mL/min时,枸杞总黄酮的纯度为78.53%,回收率达71.35%。

大孔吸附树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的研究

研究应用大孔树脂纯化枸杞叶总黄酮的工艺,比较了AB-8、ADS-5、ADS-7、ADS-17、ADS-21、HP-20六种大孔树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的优劣,结果表明,HP-20型大孔树脂对枸杞叶总黄酮的吸附性能与解吸效果最好。确定了其最佳工艺为:上柱液13 BV,上样流速2 mL/min,上样浓度2.336 mg/mL,以70%乙醇为洗脱液,洗脱流速2 mL/min,洗脱剂用量3.5 BV。在此条件纯化后,枸杞叶黄酮提取物中总黄酮含量由29.02%提高到83.75%。该工艺条件科学合理,可有效地用于枸杞叶黄酮的分离富集。高效液相色谱检测芦丁含量由9.88%提高到23.79%。

宁夏枸杞黄酮类化合物HPLC指纹图谱研究

目的建立宁夏枸杞黄酮类化合物高效液相色谱指纹图谱,为鉴别不同来源的宁夏枸杞提供依据。方法以10个宁夏不同产地的宁夏枸杞主栽品种"宁杞号"样品建立枸杞黄酮类化合物指纹图谱共有模式,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"软件进行数据处理,对15个不同来源的枸杞样品进行了分析。结果本研究建立的方法重现性较好;16个特征峰构成了宁夏枸杞黄酮类化合物色谱指纹图谱的特征;不同产地、不同品种的枸杞样品黄酮类化合物组成与量存在差异。结论所建立的枸杞黄酮类化合物的HPLC指纹图谱对不同产地、不同品种枸杞的鉴别具有参考价值。

枸杞中黄酮类化合物的超声波强化提取

为了提高枸杞中黄酮类化合物的提取效果,通过超声波细胞粉碎仪的强化作用,对枸杞中的黄酮类化合物进行提取研究,通过单因素和正交试验确定最佳工艺参数。结果表明,最佳提取工艺参数为:乙醇体积分数80%,液料比50 mL/g,超声波工作/间歇时间3 s/1 s,超声波功率500 W,提取时间50 min。在此条件下提取率达到89.87%。

枸杞晒干过程中黄酮类化合物和苯丙氨酸解氨酶活性的变化

本实验在枸杞表面涂抹Na2CO3、Na2SO3溶液作为除蜡剂,以不涂抹除蜡剂为空白对照,研究晒干过程中总黄酮和苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)活性的变化,并利用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测枸杞中山奈酚、芦丁和槲皮素含量的变化。对总黄酮含量和PAL活性、3种不同处理方式条件下3种黄酮类化合物含量之间进行相关性分析。结果表明:Na2CO3、Na2SO3和空白对照处理下的枸杞在晒干过程中PAL活性、总黄酮含量呈现持续上升的趋势,山奈酚、芦丁和槲皮素含量均呈现先增加后下降趋势;同一处理下的PAL活性和总黄酮含量变化呈显著极强正相关,山奈酚、芦丁和槲皮素含量变化呈正相关;除蜡剂影响同一干燥时间下PAL活性、总黄酮、山奈酚、芦丁和槲皮素含量的大小,并且其达到最高值的时间也受除蜡剂的影响。

宁夏枸杞子中类黄酮的提取及其性质研究

利用95%乙醇提取宁夏枸杞子中的类黄酮,并比较不同方法的提取效果。结果表明,料液比为1:10、温度为90℃、提取2h可以得到较多的类黄酮。对类黄酮的稳定性以及清除羟自由基、超氧阴离子自由基的能力的研究表明,在类黄酮分别为130mg/L和5.3mg/L(以芦丁计)时,可以清除50%的羟自由基和超氧阴离子自由基。

高效液相色谱法测定不同产地宁夏枸杞中芦丁和绿原酸的含量

目的建立反相高效液相色谱法同时测定宁夏枸杞中芦丁和绿原酸含量的方法。方法色谱分析条件Shim-packVP-ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水-乙酸（5∶94.5∶0.5）为流动相A,乙腈∶水∶乙酸（70∶29.5∶0.5）为流动相B,采用梯度洗脱,流速0.5 ml·min^-1,检测波长342 nm,柱温30℃。结果绿原酸和芦丁线性范围均为10～100μg·ml^-1（相关系数分别为r=0.999 5和r=0.999 8）,平均回收率（n=5）分别为98.6%,99.0%;不同产地、不同年份宁夏枸杞样品中芦丁和绿原酸含量存在差异。结论该方法重现性好,适用于同时测定枸杞中芦丁和绿原酸的含量。

枸杞叶黄酮类化合物体外清除自由基作用研究

采用有机溶剂浸提法(70%乙醇)提取枸杞叶中的黄酮类化合物,然后以枸杞叶黄酮提取物为研究对象,以Vc和BHT为阳性对照,通过自由基清除实验体外评价产物的抗氧化活性。结果表明:枸杞叶黄酮提取物中黄酮类化合物的含量为277.7mg/g。枸杞叶黄酮提取物对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH^+、亚硝基自由基、ABTS+具有显著的清除能力,其最大清除率分别为62%,84%,80%,34%,78%,对Fe^(3+)的还原能力达到Vc和BHT还原能力的50%。结论:所提取的枸杞叶黄酮类化合物具有较高的体外抗氧化活性,可为枸杞叶黄酮类化合物资源的开发利用提供依据。

宁夏枸杞叶中总黄酮含量与抗氧化活性关系

为进一步开发宁夏枸杞叶资源,研究宁夏枸杞叶抗氧化活性部位中总黄酮含量与抗氧化活性间关系.以乙醇做提取溶剂,再以不同极性溶剂对醇提液进一步萃取分离;并用DPPH法(DPPH.)测定不同极性萃取部分的抗氧化能力,用分光光度法测定不同极性萃取部分中的总黄酮含量.结果表明,除石油醚萃取部位外,其他各萃取部分在一定质量浓度时,对DPPH自由基(DPPH.)清除率均达到90%,且与总黄酮含量有极显著的相关性(P<0.01),其中,正丁醇萃取部分中的总黄酮含量最高,达到77.32mg/g,其清除自由基ρ(SC50)=0.048 3mg/mL,活性与维生素C相当.可为枸杞叶的深度开发提供参考.

宁夏枸杞叶总黄酮提取和纯化方法的优化

采用L9(34)正交设计,以黄酮含量为指标,确定的宁夏枸杞叶总黄酮的最佳超声提取方法为:30倍70%乙醇超声提取50 min,超声功率为250 W;纯化方法条件为:5倍柱体积70%乙醇洗脱,浓度为4 mg/mL、pH值5.0的上样液,上样速度和洗脱流速均为1 mL/min。并以吸附率、解吸率、回收率等作为考察参数,对提取和纯化方法进行了验证。实验结果表明,该方法简便节时、易操作且毒害小,各项变异系数低。

宁夏枸杞主要产区枸杞子总黄酮的测定与分析研究

在建立宁夏枸杞果实总黄酮的快速检测方法的基础上分析我国各大宁夏枸杞产区的枸杞子总黄酮含量差异,并初步鉴别主要黄酮。以芦丁作为对照品,以石油醚脱色,70%乙醇微波提取,在258nm处直接测定。该测定方法在5.0μg/mL～15.0μg/mL浓度范围可以准确、快速地测定提取液中的总黄酮,准确度和回收率分别在99.13%和99.77%以上。中宁县作为宁夏枸杞的道地产区,枸杞子的总黄酮含量最高,各主要产区的果实总黄酮含量高低次序为:中宁>沙海>诺木洪>奇台>精河。采用色谱柱分离总黄酮和化学法鉴定主要黄酮,提取液的主要黄酮是一种异黄酮。