酚酸类化感自毒物质对枸杞种子萌发的抑制作用

酚酸类化感自毒物质是导致农作物连作障碍的重要诱因之一。枸杞作为多年生木本植物,连作障碍突出,成因复杂。为揭示酚酸类物质对枸杞的化感自毒作用,研究了22种常见酚酸对枸杞种子萌发的抑制作用,并运用比较分子场分析方法(CoMFA)进行构效关系研究。结果发现,酚酸化合物对枸杞种子萌发作用的半抑制浓度IC50范围为39.94—115.97 mg/L;CoMFA结果表明,运用立体场和静电场能较好解释该类化合物对枸杞种子萌发的化感自毒特征,苯环1/2/3/4位具有大体积、1位具有强负电性取代基的酚酸化合物,对枸杞种子萌发具有较强抑制作用。研究结果可为客观评价酚酸类化合物对枸杞的化感自毒作用提供基础数据支撑。

不同产地及采收时间青海产野生宁夏枸杞叶片中总黄酮含量的比较

宁夏枸杞（ Lycium barbarum Linn.）为茄科（ Solanaceae）枸杞属（ Lycium Linn.）灌木，为著名的药食两用植物，其成熟果实为枸杞子，具有滋补肝肾和益精明目等功效[1]232；其叶也是传统中药之一，具有＂除烦益志、补五劳七伤、壮心气、除热毒、散疮肿和除风明目＂等功效，民间常用枸杞叶制作药膳或药饮。相关化学成分的研究结果表明：枸杞叶富含多种维生素、人体必需的氨基酸及矿质元素，还含有黄酮类、萜类、甾类、生物碱及有机酸类等次生代谢成分[2-3]，其中，黄酮类化合物具有降血脂、降胆固醇、保肝抗炎以及雌激素样作用[4]。宁夏枸杞叶片中的总黄酮含量与其清除 DPPH＆#183;的能力呈极显著正相关[5]；枸杞叶片提取物中的黄酮类成分可抑制动物体内MDA的产生，从而提高机体耐力并延缓疲劳的发生[6]。近年来，已有研究者对宁夏产枸杞叶片总黄酮的提取纯化工艺等进行了研究[7-10]，但对青海产宁夏枸杞叶的相关研究较少。

枸杞瘿螨虫瘿发生与螨量关系的研究

枸杞瘿螨是枸杞重要害虫之一,大多数时间生活于虫瘿内,发生数量很难预测,故通过枸杞虫瘿大小估计瘿螨的危害数量,对防治枸杞瘿螨有重要意义。室内培养枸杞苗木接螨成瘿,测定长、短径,观察虫瘿发展情况,并且从枸杞林地采虫瘿叶片,测量虫瘿长、厚度和重量,计算出虫瘿体积,剖开虫瘿记录枸杞瘿螨数量。结果显示,室内虫瘿长径和短径随时间变化而逐渐增长,厚度变化不大,15d后趋于平稳;野外虫瘿长径和短径集中于1.1mm-2.0mm的数量最多,其次是0.1mm-1.0mm和2.1mm-3.0mm;虫瘿的长径、短径、厚度、体积和重量与虫瘿内螨量显著相关,均呈正相关关系,其中重量与瘿内螨量高度相关,回归方程为Y=15.116X+9.441,可作为估算瘿内螨量的模型。

枸杞己糖激酶基因LbHXK的克隆及表达分析

该研究以宁夏枸杞‘宁杞1号’果实为材料,利用RT-PCR技术,分离出枸杞己糖激酶基因LbHXK的全长序列(1494bp),该基因包含完整开放阅读框ORF,编码498个氨基酸,蛋白质分子量为53.88kD,理论等电点5.96;LbHXK基因编码的蛋白具有己糖激酶家族显著的特征,包含一个己糖激酶小亚基(Gly91~Val228)和一个大亚基结构(Asn229~Asp476),该蛋白三级结构为V型,并且存在一个葡萄糖结合结构域;LbHXK与茄科烟草的同源性最高为93.36%。实时荧光定量分析发现,LbHXK基因在不同组织均有表达,叶中最高,茎中次之,根中最低,且组织间差异不显著;随着果实发育LbHXK基因表达量呈先升后降的变化趋势,并在色变期(开花后约22d)达到最高,随后到果实成熟期降至最低,且果实发育前中期显著高于后期。该研究结果为进一步探讨枸杞LbHXK基因的功能奠定了基础。

ABT生根粉对枸杞嫩枝插穗生根的影响

用ABT生根粉 80 0～ 10 0 0 μg g处理枸杞嫩枝插穗 ,生根率 78%～ 85% ,平均生根条数 4 .2～ 5.6条 穗 ,平均根长 4 .3～ 5.8cm ,生根时间提前

枸杞果糖激酶基因LbFRK7的克隆及表达分析

该研究以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,基于转录组测序TR28373|c0_g1序列,利用RT-PCR技术,克隆出枸杞果糖激酶基因LbFRK7的全长序列为1 060bp,其中,ORF开放阅读框为1 044bp,编码有348个氨基酸,蛋白质分子量为37.44kD,理论等电点5.05;LbFRK7编码的氨基酸序列包含有pfkB碳水化合物激酶家族高度保守的3个特异性区域,2个底物识别位点,4个ATP结合位点;LbFRK7与烟草和辣椒的FRP7基因序列相似性较高,达到90%;利用实时荧光定量技术分析发现,不同组织中LbFRK7基因均有表达,且果实中的表达量最高,根中最低;随着果实的发育,果实中LbFRK7基因的表达量呈先升后降的变化趋势,并于开花后15d达到最高。在果实发育前期,LbFRK7基因的表达量与果糖含量的变化趋势相同,但在果实发育中期和后期,LbFRK7基因的表达量与果糖含量的变化趋势相反。相关分析结果显示,LbFRK7表达量与果糖和蔗糖含量的相关系数分别为-0.326和-0.339,但均未达到显著水平。研究表明,LbFRK7基因在枸杞果实发育过程中对果糖转化起到一定作用,特别是在果实成熟过程中对果糖含量的升高具有重要的作用。该研究结果为进一步探讨枸杞LbFRK7的功能及果糖代谢奠定了基础。

枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

以‘宁杞1号’枸杞果实为材料,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,克隆出枸杞木糖异构酶基因(Lycium barbarum Linn. xylose isomerase,LbxylA)的全长,开放阅读框为1 446 bp,编码481个氨基酸,蛋白质分子质量为53.54 kDa,理论等电点5.37;对其进行生物信息学分析,发现LbxylA与烟草和马铃薯的木糖异构酶基因序列相似性较高,达到95%;构建重组质粒pGEX4T-1-LbxylA,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行原核表达,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-Dthiogalactoside,IPTG)诱导培养,筛选出重组蛋白的适宜表达条件为:在18℃条件下100 μmol/L IPTG诱导10 h蛋白量最大,该蛋白为融合表达的且部分可溶;进一步纯化该蛋白并将获到的LbxylA融合蛋白为抗原,以日本大耳兔免疫制备Lbxyl A多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定法,测定抗体血清的效价高于1∶81 000;随着果实的发育,果实中LbxylA的相对表达量呈现逐渐下降的趋势,且在开花后9 d果实中LbxylA表达丰度最高;利用Western blot检测到LbxylA蛋白的变化与LbxylA相对表达量基本一致,但在开花后9 d果实中蛋白表达量低于开花后15 d,随后逐渐降低,果实成熟时两者的表达量到达最低。这表明枸杞果实发育前期LbxylA蛋白由于翻译后加工可能导致蛋白质表达滞后于基因,其结果有助于进一步研究LbxylA功能及其对果实糖积累的作用。