Lycium barbarum polysaccharides protected human retinal pigment epithelial cells against oxidative stressinduced apoptosis

AIM: To investigate the protective effect and its mechanism of lycium barbarum polysaccharides(LBP)against oxidative stress-induced apoptosis in human retinal pigment epithelial cells.METHODS: ARPE-19 cells, a human retinal pigment epithelial cell lines, were exposed to different concentrations of H2O2 for 24h, then cell viability was measured by Cell Counting Kit-8(CCK-8) assay to get the properly concentration of H2O2 which can induce half apoptosis of APRE-19. With different concentrations of LBP pretreatment, the ARPE-19 cells were then exposed to appropriate concentration of H2O2, cell apoptosis was detected by flow cytometric analysis. Expression levels of Bcl-2 and Bax were measured by real time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) technique.RSULTS: LBP significantly reduced the H2O2-induced ARPE-19 cells’ apoptosis. LBP inhibited the H2O2-induced down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax.CONCLUSION: LBP could protect ARPE-19 cells from H2O2-induced apoptosis. The Bcl-2 family had relationship with the protective effects of LBP.

壳聚糖改性棉织物的黑枸杞色素染色

提取黑枸杞天然色素,对壳聚糖改性棉织物进行直接法染色,探究了染浴pH值、温度、时间、氯化钠浓度等因素对染色效果和防紫外性能的影响,通过对染色织物的色深值Integ、颜色特征值及UPF值综合评价,得到最佳染色工艺。结果表明,具体工艺如下:浴比1∶30,提取母液30 mL,pH值为4,食盐为0,焙烘温度110℃,焙烘时间4 min;染色过程中可不添加食盐,实现了无盐染色,大大减轻了染料废水处理的负担;经此方法染色所得紫色棉织物不但具有较好的耐摩擦色牢度、耐皂洗色牢度和耐日晒色牢度,同时具有优良的防紫外线性能。

枸杞提取物对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:体外通过过氧化氢(H2O2)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞造成氧化损伤,观察枸杞提取物对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞活性的影响,探讨枸杞提取物通过抗氧化对ARPE-19细胞的保护作用。方法:采用不同浓度H2O2诱导体外ARPE-19细胞的氧化损伤,确定最佳浓度;采用MTT法检测枸杞含药血清对ARPE-19细胞活力的影响,确定安全有效的药物浓度;观察各组细胞的形态,划痕试验检测各组ARPE-19细胞的活力;Western Blot法检测各组细胞Nrf2/ARE信号通路相关因子Nrf2的质蛋白和核蛋白的表达水平;试剂盒检测氧化应激水平的相关指标活性氧(ROS)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)活力。结果:当H2O2浓度为200μmol/L,作用2 h时,ARPE-19细胞出现明显的氧化损伤(P<0.01);不同浓度的枸杞含药血清对ARPE-19细胞的干预效果不同,在2.5%、5%、10%的浓度下对损伤的ARPE-19细胞具有明显的促进增殖的作用(P<0.05),故选择2.5%、5%、10%浓度的枸杞含药血清进行下一步实验,与模型组相比,枸杞含药血清组细胞形态良好,长势均匀;细胞内的ROS含量显著降低(P<0.01),GSH含量明显上升(P<0.05),CAT活力显著升高(P<0.01);Nrf2质蛋白表达增强(P<0.05),核蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:枸杞含药血清能够提高ARPE-19细胞自身的抗氧化能力,从而对ARPE-19细胞产生保护作用。

枸杞多糖对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞中NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响

目的 观察枸杞多糖(LBP)对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体/细胞焦亡信号通路的影响。方法 将体外培养的ARPE-19细胞,随机分为5组,即正常组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、LBP低浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+100μg·mL^(-1)LBP)、LBP中浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+200μg·mL^(-1)LBP)和LBP高浓度组(55.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+400μg·mL^(-1)LBP)。采用免疫荧光观察各组细胞中NLRP3蛋白的表达,Western blot检测炎症小体NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和其下游细胞焦亡蛋白消皮素D(GSDMD)的相对表达量,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(interleukm,IL)-1β和IL-18的表达水平。结果 免疫荧光结果显示,NLRP3蛋白主要在视网膜色素上皮细胞胞质中表达,且与正常组相比,高糖组NLRP3蛋白的表达水平升高(P<0.05);而与高糖组相比,LBP中、高浓度组NLRP3蛋白的表达水平降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD蛋白的相对表达量降低(P均<0.05)。ELISA结果显示,与正常组相比,高糖组细胞中IL-1β和IL-18表达水平均升高(P均<0.05);与高糖组相比,LBP中、高浓度组中IL-1β、IL-18表达水平均降低(P均<0.05)。结论 LBP可通过抑制NLRP3炎症小体/细胞焦亡信号通路的激活,从而对高糖环境下的人视网膜色素上皮细胞产生保护作用。

枸杞子活性成分及分析方法研究进展

枸杞为茄科枸杞属植物,枸杞子是枸杞的成熟果实,为我国传统中药材,具有清除自由基、抗氧化、提高免疫力以及抑制细胞突变和肿瘤生长等药理作用,目前主要用于肿瘤以及高血脂、高血糖、动脉粥样硬化等一些老年疾病的辅助治疗。文章概述了枸杞中多糖、黄酮、色素等活性成分的研究概况及分析方法研究进展,并对枸杞活性成分的开发与利用进行了展望。

枸杞子中红色素的提取及稳定性

枸杞子中红色素的提取及稳定性伍明，王杰，闪春霞，任仲皎，宋锡瑾，詹国庆（中南民族学院化学系武汉４３００７４）关键词枸杞，色素，液泛提取法枸杞子为茄科枸杞属植物的果实，具有补肾养肝，润肺明目以及调节机体免疫力，抑制肿瘤生长和细胞突变，延缓衰老及抗脂肪肝...

枸杞子中红色素的提取及稳定性

本文对比了从枸杞子中提取红色素的回流法、索氏提取法和液泛提取法，并研究了红色素的稳定性。试验结果表明，液泛提取法优于其他两法。红色素耐热、酸和碱，并在铜、钙离子存在下稳定。故此技术将会得到广泛应用。

枸杞色素及多糖的不同提取次序对其得率及抗氧化活性的影响

为探究先后提取枸杞多糖及枸杞色素时对各自得率的影响。本研究通过分别考察这两种成分在提取过程中的提取溶剂、提取温度、料液比、提取次数及提取时间等因素对枸杞色素和枸杞多糖的得率影响,确定枸杞色素和枸杞多糖在提取次序不同时,两者的最佳提取工艺以及对DPPH·和·OH自由基清除率。结果表明,首先提取枸杞多糖后,枸杞色素的最佳提取工艺为采用正己烷,80℃时,料液比1∶10,提取2次,每次1 h,枸杞色素得率为2.48%,此时枸杞多糖得率为7.45%;而首先提取枸杞色素后,采用了超声辅助提取的方式提取枸杞多糖,发现超声效率为25%,料液比1∶10,提取20 min,枸杞多糖得率为5.23%,此时枸杞色素得率为3.93%。因此,首先提取枸杞多糖,使其平均得率为7.45%,而后提取枸杞色素,其平均得率为2.48%;总体上,枸杞色素1和枸杞多糖1对DPPH·自由基清除率都较高,枸杞多糖1对·OH自由基清除率较高,其抗氧化活性都接近Vc。

枸杞子中食用红色素的提取及稳定性研究

采用正交实验,确定了提取枸杞子红色素的最佳条件及产率,并分析了枸杞子红色素的稳定性。结果表明:(1)在90℃下采用85%乙醇,以1:4物料比,用索氏提取器连续提取3次,每次1.5h条件下红色素产率最高;(2)枸杞红色素为水溶性色素,耐光性、耐高温性好,在酸性介质、还原剂以及常用食品添加剂等条件下有较好的稳定性,是可广泛用于食品、饮料、医药等行业的天然植物色素。

NaCl胁迫对枸杞叶片甜菜碱、叶绿素荧光及叶绿素含量的影响

研究了在不同盐分胁迫下枸杞叶片甜菜碱含量、叶绿素荧光动力学参数和叶绿体色素含量的动态变化。结果表明,枸杞叶片叶绿素荧光参数(Fm、Fv、Fv/Fm、Fm/Fo、Fv/Fo)随盐浓度的增加呈现下降的趋势,叶绿体色素(chla、chlb、chla/chlb)含量在低盐浓度下(0.3%NaCl)呈升高趋势,高盐浓度(0.6%～0.9%NaCl)下则均下降,随胁迫时间的延长,以上各参数均呈先下降后上升的总趋势,而类胡萝卜素与叶绿素的比值(car/chl)则随盐浓度的增加及胁迫时间的延长逐渐上升。枸杞叶片甜菜碱含量在一定范围内随盐浓度的增加以及胁迫时间的延长呈逐渐积累的趋势。初步证明盐胁迫下枸杞叶片甜菜碱的积累与叶绿素荧光及叶绿体色素含量的变化有关,这也可能是枸杞抗盐的重要生理原因之一。

枸杞天然活性成分提取的研究进展

综述了在提取枸杞多糖、黄酮类物质及色素等方面的研究进展情况,对各种不同提取方法如溶剂浸提法、超声波提取法、微波提取法等进行了概括和比较,并对提取技术的发展进行了展望。

外源甜菜碱对盐胁迫下枸杞光合功能的改善

研究了外源甜菜碱对盐胁迫下枸杞扦插苗叶片光合功能的影响.结果表明,外源甜菜碱能使盐胁迫下的枸杞叶片叶绿素荧光动力学参数Fo、Fm、Fv、Fv/Fm、Fm/Fo和Fv/Fo增高,使光合色素叶绿素a Chla 、叶绿素b Chlb 和类胡萝卜素 Car 含量明显增加,叶绿素a与b的比值 Chla/Chlb 升高,类胡萝卜素与叶绿素的比值 Car/Chl 降低,说明外源甜菜碱有利于植物对光能的捕获、吸收、传递和转换,提高叶片的光合活性,降低盐胁迫对植物的抑制作用.

超临界流体CO_2萃取枸杞子红色素的工艺条件研究

本文采用超临界CO2 流体萃取方法 ,从枸杞子中萃取红色素。讨论样品含水量、样品粉碎度、萃取温度、压力、时间和流速对萃取率的影响 ,从而确定最佳萃取工艺条件 。

枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞抗衰老作用的影响

背景 年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病与视网膜色素上皮（RPE）细胞的衰老有关,寻求抗RPE细胞衰老的药物对AMD的防治有重要意义.研究表明枸杞多糖（LBP）有延缓衰老的作用,但其对RPE细胞衰老的作用机制尚不完全明确. 目的 研究LBP对体外培养的人RPE细胞的吞噬功能、清除脂褐素的功能及细胞增生活性的影响,探讨LBP防治AMD的可行性.方法 分离猪视网膜神经上皮层,密度梯度离心法提取猪眼光感受器外节（POS）,并用异硫氰酸荧光素（FITC）标记,然后分别加入含0.01、0.10、1.00 g/LLBP的人RPE中培养24 h,荧光显微镜下测量正常对照组、POS对照组及各质量浓度LBP＋POS组人RPE细胞吞噬POS的荧光面积,评估LBP对人RPE细胞吞噬功能的影响.将密度为5×104个/ml的人RPE细胞与猪POS混合培养3周以建立POS诱导的脂褐素模型,然后将模型细胞分别加入含上述质量浓度LBP的培养液中,用流式细胞术定量检测人RPE细胞内脂褐素的自发荧光值（A）,观察LBP对人RPE细胞清除脂褐素功能的影响.对脂褐素化的人RPE细胞进行培养后分别加入含有上述不同质量浓度LBP的培养液,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定培养24、48和72 h后各组细胞生长的增生值（A）. 结果 光学显微镜下可见猪POS呈大小均一、排列整齐、独立的细杆状形态,透射电子显微镜下可见双层膜盘样结构,荧光显微镜下可见FITC标记后呈黄绿色荧光.正常对照组未发现人RPE细胞对猪POS的吞噬,但随着LBP质量浓度的增加,RPE细胞对猪POS的吞噬面积逐渐增加,差异有统计学意义（F=21.425,P=0.006）.与POS对照组比较,不同质量浓度LBP＋POS组人RPE细胞对猪POS的吞噬面积均增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞术检测结果表明,正常对照组RPE细胞中脂褐素荧光值非常低,RPE细胞与POS共培养后细胞中脂褐素荧光值明显增加,不同质量浓度的LBP作用后,RPE细胞内脂褐素自发荧光值逐渐下降,均低于POS对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中1.00 g/L LBP＋POS组RPE细胞内脂褐素自发荧光值最低,LBP对脂褐素的清除能力最强.LBP干预人RPE细胞24、48、72 h,正常RPE细胞组的细胞增生值（A）均最高,脂褐素化RPE细胞组A值最低,随着LBP质量浓度的增加,各质量浓度LBP＋脂褐素化RPE细胞组A值逐渐增加,各时间点1.00 g/L LBP＋脂褐素化RPE组A值接近正常RPE细胞组,差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 LBP能增强人RPE细胞的抗衰老作用,其作用机制与增强人RPE细胞吞噬POS、清除脂褐素的功能及细胞增生活性有关.

枸杞色素的提取及稳定性研究

以石油醚为提取溶剂,对新疆枸杞中色素的提取工艺进行研究。本实验得到的最佳提取工艺:固料比1:23,提取温度85℃,提取时间3h。提取的枸杞色素外观呈橙红色浸膏,在波长445nm处有最大吸收峰。研究了不同光照时间、温度、pH值、氧化剂、金属离子等对枸杞色素稳定性的影响。

枸杞含药血清预处理对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护的分子机制研究

目的 观察枸杞含药血清对受损兔视网膜色素上皮细胞中超氧化物歧化酶活性及bc1-2/bax 蛋白表达的影响.方法 常规细胞培养,建立兔视网膜色素上皮细胞光损伤模型,分为正常对照组、模型组、低剂量组（光照前30min＋25μl含药血清）和高剂量组（光照前30min＋ 25μl含药血清）,分别于0、24、48、72h（以光照结束为基点）进行指标的检测.氮蓝四唑法测定兔视网膜色素上皮细胞中超氧化物歧化酶的活性,免疫印迹法检测兔视网膜色素上皮细胞中Bcl-2/Bax蛋白的表达.结果 模型组各时间点兔视网膜色素上皮细胞中SOD活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）；低剂量组及高剂量组各时间点兔视网膜色素上皮细胞中SOD的活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随时间的延长,SOD的活性逐渐增高,Bcl-2蛋白表达逐渐增高,Bax蛋白表达依次降低；高剂量组各时间点兔视网膜色素上皮细胞中SOD的活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达与低剂量组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 枸杞对RPE细胞具有一定的保护作用,这与其能提高受损RPE细胞SOD的活性有关.

枸杞中提取色素工艺条件的探讨

目的:从枸杞子中萃取色素。方法:采用超临界CO2流体萃取方法。结果:萃取温度、压力和时间对萃取率的影响。结论:从而确定最佳萃取工艺条件,为批量生产提供依据。

枸杞食用色素的提取及稳定性研究

采用有机溶剂浸提法提取宁夏枸杞中的食用色素。实验表明,以乙醇为提取溶剂,枸杞食用色素制备的影响因素主次分别为提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比。最佳提取工艺为:以无水乙醇为提取剂,料液比1∶9,45℃提取1. 5 h,此时枸杞色素的提取率最大。同时研究了枸杞色素的稳定性,研究表明:枸杞色素耐光性、耐高温性好,在酸性介质、还原剂以及常用食品添加剂存在的条件下也有较好的稳定性。

枸杞色素稳定性的研究

研究枸杞色素稳定性的影响因素,确定其适宜的贮藏与应用条件。以无水乙醇为提取剂用索氏提取器在恒温干燥的条件下提取枸杞红色素。用分光光度计法测定枸杞红色素在不同条件下最大吸光度的变化。通过对实验结果的分析,枸杞红色素应该在常温干燥避光的条件下保存,注意避免与金属离子、强碱等物质接触。

枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞脂褐素清除作用的影响

目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)在预防或阻止视网膜色素上皮老年性改变中所起的作用。方法将提取纯化的猪眼光感受器外节(photorecepter ourer segment,POS)与人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞共养3周,建立RPE脂褐素模型。将脂褐素化的RPE细胞分为4组,分别加入浓度为0μg/ml(空白对照组)、10μg/ml、100μg/ml、1 000μg/ml的LBP培养12 h、24 h、48h,流式细胞技术测定不同浓度LBP干预后的人RPE细胞内脂褐素值。结果各LBP培养组人RPE细胞在不同时间的脂褐素荧光面积均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);枸杞多糖浓度为1 000μg/ml时人RPE细胞内脂褐素荧光面积最小。结论 10μg/ml、100μg/ml、1 000μg/ml的LBP具有促进体外培养的人RPE细胞清除脂褐素的作用;浓度为1 000μg/ml时对hRPE细胞内脂褐素的清除作用最强。