Inhibiting Effects of Achyranthes Bidentata Polysaccharide and Lycium Barbarum Polysaccharide on Nonenzyme Glycation in D-galactose Induced Mouse Aging Model

Objective To investigate the inhibiting effects and mechanism of achyranthes bidentata polysaccharide (ABP) and lycium barbarum polysaccharide (LBP) on nonenzyme glycation in D-galactose induced mouse aging model. Methods Serum AGE levels were determined by AGE-ELISA, MTT method was used to determine lymphocyte proliferation, IL-2 activity was determined by a bioassay method. Spontaneous motor activity was used to detect mouse's neuromuscular movement, latency of step-through method was used to examine learning and memory abilities of mouse, colormetric assay was used to determine hydroxyproline concentration in mouse skin, pyrogallol autoxidation method was used to determine superoxide dismutase (SOD) activity of erythrocytes. Results Decreased levels of serum AGE, hydroxyproline concentration in mouse skin and spontaneous motor activity in D-galactose mouse aging model were detected after treated with ABP or LBP, while lymphocyte proliferation and IL-2 activity, learning and memory abilities, SOD activity of erythrocytes, were enhanced. Conclusions ABP and LBP could inhibit nonenzyme glycation in D-galactose induced mouse aging model in vivo and ABP has a better inhibiting effect than LBP.

多指标响应面优化枸杞提取工艺研究

枸杞中含有丰富的枸杞多糖和枸杞黄酮,均具有较高的药用价值。选取提取方法、提取时间、料液比、提取次数、提取温度、浸泡时间进行单因素试验,根据单因素结果选取3个影响较大的因素,结合响应面法中的Box-Behnken试验设计对枸杞总多糖和总黄酮的提取工艺进行优化,得到优化提取工艺条件为:加热回流法,浸泡1.0h,提取时间55min,料液比1∶12(g∶m L),提取温度81℃,提取2次。总多糖提取率能够达到45.36%,总黄酮提取率达到0.29%。该方法提取率高、重复性好,高效环保。为枸杞中总多糖和总黄酮的提取方法提供参考依据。

枸杞多糖通过增强自噬抑制饥饿诱导的施万细胞凋亡

目的:探讨枸杞多糖(LBP)抑制施万细胞(SCs)凋亡的作用及相关机制。方法:RSC96细胞饥饿处理12 h制备自噬模型,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、p62的表达;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒筛选出LBP作用的最佳浓度。将RSC96细胞随机分为正常组(Control)、饥饿组(Starvation)、Starvation+LBP组,Western Blot或免疫荧光染色检测细胞自噬相关蛋白(LC3、p62)以及髓鞘相关蛋白(p75NTR、PMP22、S100β)的表达;采用Annexin V/PI荧光染色检测细胞的凋亡情况;应用流式细胞术分析细胞周期;Western Blot分析通路蛋白Erk1/2、Akt的磷酸化水平。结果:CCK8结果显示,LBP为300μg/ml时受损RSC96细胞活力最佳。与Control组相比,Starvation组LC3-II/LC3-I水平显著增高(P<0.05)。与Starvation组相比,Starvation+LBP组的凋亡和坏死细胞比例显著降低,处于S期和G2/M期的细胞比例升高;LC3-II、p75NTR、PMP22、S100β蛋白表达量增高,自噬底物蛋白p62的表达量降低;通路蛋白p-Erk1/2表达量增高(P<0.05),而p-Akt蛋白表达量略有下降。结论:LBP可通过增强细胞自噬抑制SCs凋亡,促进髓鞘相关蛋白的表达,其机制与Erk1/2激活和/或Akt抑制有关。

枸杞多糖通过抑制NF-κB/NLRP3通路减少视网膜色素变性小鼠感光细胞凋亡

目的探讨枸杞多糖可否通过抑制核因子激活的B细胞的κ-轻链增强子/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)信号通路减少视网膜色素变性(RP)小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。方法(1)体外实验将小鼠视网膜神经节细胞(661W细胞)分为正常组、模型组、枸杞多糖低剂量组(40 mg/L)、中剂量组(80 mg/L)、高剂量组(160 mg/L)和阳性药物对照组(NLRP3抑制剂,160 mg/L);分别用50、100、200和400μmol/L四种剂量的H_(2)O_(2)干预661W细胞,选出最佳H_(2)O_(2)浓度(200μmol/L)造模,细胞计数试剂盒CCK-8测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3标志物的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(WB)检测细胞凋亡标志物的表达。(2)选用C57/BL6小鼠和Rd10小鼠进行体内实验,分组为正常组、模型组、枸杞多糖低剂量组(0.08 g/d)、中剂量组(0.16 g/d)、高剂量组(0.32 g/d)和阳性药物对照组(NLRP3抑制剂,0.08 g/d),其中正常组为C57/BL6小鼠,其余组为Rd10小鼠,每组10只,相对应的药物连续灌胃4周,通过视网膜电图、组织病理学检查和WB等方法观察NF-κB/NLRP3通路及细胞凋亡标志物的表达,评估枸杞多糖对视网膜光感受器细胞凋亡的影响。结果(1)体外实验中,与正常组相比,模型组661W细胞凋亡率明显增加(P<0.01),且NF-κB/NLRP通路关键蛋白NLRP3、NF-κB、p-NF-κB和促凋亡蛋白caspase-3的表达水平上调(P<0.01),Bax/Bcl-2的比值增大(P<0.01),白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度显著升高(P<0.01)。与模型组相比,高剂量的枸杞多糖降低了661W细胞的凋亡率(P<0.01),下调了NF-κB/NLRP3通路关键蛋白NF-κB、NLRP3、p-NF-κB和caspase-3的表达(P<0.01),减小了Bax/Bcl-2的比值(P<0.01),降低了IL-1β和TNF-α的浓度(P<0.01)。(2)体内实验中,高剂量的枸杞多糖显著增加了Rd10小鼠外核层(ONL)厚度的形态变化以及a波和b波振幅的功能变化(P<0.01),下调了NF-κB(P<0.05)、NLRP3、p-NF-κB和caspase-3的表达水平(P<0.01),减小了Bax/Bcl-2的比值(P<0.01),降低了IL-1β(P<0.01)和TNF-α(P<0.05)的浓度。结论枸杞多糖可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路改善视网膜形态和功能,保护光感受器免受细胞凋亡的影响。

不同产地“宁杞1号”枸杞果实的多糖合成代谢差异

基于同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantity,iTRAQ)技术,以采自宁夏中宁的“宁杞1号”枸杞果实为样品,以采自新疆精河、内蒙古乌拉特前旗、甘肃瓜州和青海德令哈的“宁杞1号”枸杞果实为对照,进行差异蛋白组学的生物信息学分析。结果表明,新疆/宁夏组、内蒙古/宁夏组、甘肃/宁夏组和青海/宁夏组分别有446,166,966个和1015个差异表达蛋白(DEPs),与枸杞多糖合成代谢相关的DEPs共160个。进一步筛选得到23个与枸杞多糖相关DEPs,包括蔗糖磷酸合成酶、β-葡萄糖苷酶和α-半乳糖苷酶等。推测采自不同产地的枸杞果实的多糖合成代谢差异通路主要包括蔗糖、纤维素、半乳聚糖、半纤维素和果胶合成代谢过程,且这些过程均可通过UDP-葡萄糖链接在一起。通过蛋白组学分析枸杞多糖合成途径上的相关蛋白,为深入研究不同产地同种枸杞多糖调控机制提供理论参考。

枸杞多糖对H_2O_2诱导的小鼠生殖细胞损伤的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对化学物质导致的生殖细胞损伤的影响。方法:用彗星电泳技术检测睾丸细胞拖尾细胞百分率及尾长。实验分四组:正常对照组;阳性对照组,睾丸细胞中仅加入H2O2染毒;LBP对照组,细胞中加入不同浓度的LBP;LBP+H2O2组,细胞先用不同浓度LBP作用1h,再加入H2O2共同培养25min。结果:LBP各剂量均能使过氧化氢染毒细胞的拖尾细胞百分率和尾长显著降低,二者呈剂量-反应关系。结论:LBP能抑制H2O2诱导的睾丸细胞损伤,对生殖细胞具有明显的保护作用。

枸杞多糖对小鼠耐缺氧效应的研究

连续给予（灌胃）小鼠不同剂量的枸杞多糖（ＬＢＰ）７ｄ，进行密闭缺氧试验。结果表明，ＬＢＰ（５０～９００ｍｇ／ｋｇ，ｉｇ）可以显著延长小鼠的存活时间（Ｐ＜０．０１），其中以７００ｍｇ／ｋｇ剂量效果最好，平均存活时间为４７．３±４．４ｍｉｎ，比对照组延长５２．１％。ＬＢＰ可降低小鼠血红蛋白增加率，抑制组织脂质过氧化反应以及增加血浆中ＳＯＤ活性。

枸杞多糖对慢性辐射小鼠细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对辐射小鼠细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法:以水提取-乙醇沉淀法制备枸杞多糖,并制成0.8%的饲料,给予受试小鼠(枸杞多糖组)。正常对照组、辐射对照组给予普通饲料。除正常对照组外,另两组均用60Coγ射线对动物进行全身性照射,每天照射1次,每天照射剂量为0.084Gy,每周照射5d,连续照射6w,照射总剂量为2.52Gy。检测骨髓微核率、睾丸精母细胞染色体畸变、精子畸形率、肝细胞caspase-3mRNA表达水平、细胞凋亡及凋亡相关基因bc1-2表达等指标。结果:LBP可使辐射引起的微核率、染色体畸变、及精子畸形率显著降低,骨髓细胞增殖活性提高,凋亡率降低,使辐射小鼠bc1-2基因表达提高、caspase-3mRNA表达水平降低。结论:枸杞多糖的抗辐射作用与其调控细胞bc1-2基因表达,影响细胞凋亡有关。

枸杞及其多糖对家兔血脂的影响

采用萃取、离子交换层析、凝胶层析等方法，从枸杞中分离得到了粗品枸杞多糖及其纯化组分枸杞多糖－Ｘ。将枸杞、枸杞多糖及其枸杞多糖－Ｘ三者对实验性家兔高脂血症进行降血脂试验（开放型单向质反应序贯试验），探讨枸杞及其多糖降血脂的作用。试验结果表明，枸杞及其多糖对实验性高脂血症兔的血脂均有明显影响，能显著降低血清胆固醇及甘油三酯含量，降脂有效率达１００％。

枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c-myc表达的影响

目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c myc表达量明显高于青年小鼠和正常对照小鼠 (P <0 .0 0 1) ,给药后则可明显得到抑制 (P <0 .0 5 )。结论 :抑制原癌基因c myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一。

枸杞及其多糖对家兔血脂的影响

将枸杞、枸杞多糖及其构格多糖—X三者对实验性家兔高血脂症进行降血脂试验（开放型单向质反应序贯试验），探讨枸杞及其多糖降血脂的作用。结果表明，构相及其多精能显著降低血清胆固醇及甘油三酯含量，降脂有效率达100％。

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响

目的研究早期糖尿病大鼠视网膜超微结构的改变及枸杞多糖的干预效果。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病SD大鼠模型,治疗组给予枸杞多糖灌胃,观察血糖、体重变化和24周时的视网膜超微结构改变。结果糖尿病早期视网膜改变主要是神经元细胞和神经胶质细胞等神经组织的线粒体病变和细胞的变性、凋亡。枸杞多糖组与糖尿病模型组比较,体重和血糖差异均无统计学意义(P>0.05);而视网膜超微结构病变明显减轻,且局限于内核层。结论枸杞多糖可以明显减轻线粒体的病理改变,阻止神经细胞凋亡,其机制并非通过降低血糖,控制糖尿病发挥作用,有望用于早期糖尿病视网膜神经病变的防治。

枸杞多糖提取及消除羟自由基活性研究

以宁夏枸杞为原料,采用碱性乙醇溶液提取法,通过单因素试验和正交试验,以多糖得率为衡量指标,优选出碱性乙醇提取枸杞多糖的最佳工艺条件,考察条件枸杞多糖消除羟自由基的活性。结果表明:液料比、乙醇体积分数、pH值、浸提温度、浸提时间对枸杞多糖得率均有显著影响;碱性乙醇提取枸杞多糖最佳条件为液料比50:1(ml/g)、乙醇体积分数8%、pH10.5,于70℃条件下浸提6.5h,枸杞多糖得率最高可达29.19%,比传统水提法提高9.51%;当枸杞多糖质量浓度为2.35mg/ml时,对羟自由基的消除率可达44.90%。

枸杞多糖抗肿瘤作用免疫学机理的探讨

目的:探讨枸杞多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。方法:60只小鼠随机分为6组:正常对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺(Cy)阳性对照组和5,10,20 mg·kg-1·d-1枸杞多糖(LBP)组,每组10只,各组分别给予相应剂量,灌胃给药后,检测胸腺重量及巨噬细胞吞噬功能、脾细胞抗体、CTL杀伤功能。结果:一定剂量的 LBP能显著抑制移植性肿瘤 S180 的生长,且能明显增强荷瘤鼠巨噬细胞率和吞噬指数,增加脾细胞抗体生成,提高荷瘤鼠的脾细胞转化功能和CTL的杀伤能力,均以10 mg·kg-1·d-1 LBP效果最佳。结论:LBP显著提高荷瘤小鼠的非常异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能,且能显著提高荷瘤小鼠 CTL的杀伤能力。这可能是枸杞多糖抗移植性肿瘤的机理之一。

枸杞多糖组分3对小鼠抗脂质过氧化作用的影响

用枸杞多糖组分 3(L BP3)灌喂小鼠 31d后 ,测定小鼠体内超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - Px)的活性 ,以及丙二醛 (MDA)和脂褐素的含量。结果表明 ,与对照相比 ,L BP3可提高或显著提高 (P<0 .0 1)小鼠体内 SOD和 GSH- Px的活性 ,并能降低或显著降低 (P<0 .0 1)体内 MDA和脂褐素的含量。由此表明 ,L

枸杞多糖-X组分对糖尿病家兔降血糖的效果

采用萃取、离子交换层析、凝胶层析等方法，从枸杞中得到了枸杞多糖四个组分，选取其中的枸杞多糖－Ｘ组分对实验性四氧嘧啶糖尿病兔进行降血糖试验（开放型单向质反应序贯试验）；同时将枸杞多糖－Ｘ与粗品枸杞多糖及枸杞的降血糖效果作比较。实验结果表明，枸杞多糖－Ｘ组分对实验性四氧嘧啶糖尿病兔有明显的降血糖作用，降血糖有效率达１００％（假阳性率为１％），糖耐量曲线明显下移。经配对序贯试验比较，枸杞多糖－Ｘ组分的降糖效果优于粗品枸杞多糖，也优于枸杞原汁。三者对正常小鼠血糖无影响。

枸杞多糖对小鼠淋巴细胞信号系统的效应

对枸杞多糖（ＬＢＰ）发挥免疫调节效应的信号传导系统进行探讨。结果显示，５０～４００μｇ／ｍｌＬＢＰ可剂量依赖性的升高小鼠淋巴细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的水平，５０μｇ／ｍｌ尚可升高ＰＭＡ活化的脾淋巴细胞内ｃＧＭＰ的水平。另外，１００μｇ／ｍｌＬＢＰ可增加ＣｏｎＡ活化后的小鼠脾淋巴细胞膜上的ＰＫＣ活性。说明ＬＢＰ的作用途径可能是通过影响ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ系统以及促进ＰＫＣ活性来发挥免疫调节效应的。

超声波萃取植物多糖的研究

研究了利用超声波萃取枸杞多糖的提取工艺,采用分光光度比色法测枸杞多糖含量,通过止交实验对超声波辅助水浸提枸杞多糖的提取工艺进行了系统研究,确定了最佳工艺,即:在50℃,1:60的料水比,浸泡2.5h,超声波提取5min,得多糖最高提取率为50.36%。

枸杞多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制研究

目的:观察枸杞多糖(LBP)对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:用链脲佐菌素(STZ)结合高脂饲料建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,根据胰岛素敏感指数、糖耐量曲线下面积分为模型组,LBP低、中、高剂量组[20、40、80mg/(kgbw?d)],同时设立正常对照及正常高剂量对照组,试验期1个月。检测LBP对Ⅱ型糖尿病大鼠血清糖基化终产物-肽(AGEs-P)、糖基化血红蛋白(HbAlc)及肾脏白介素-8(IL-8)含量、肾脏病理变化的影响。结果:LBP可降低Ⅱ型糖尿病模型大鼠血清AGEs-P及血浆HbAlc与肾脏中IL-8含量,肾脏病变明显改善。结论:LBP可降低模型大鼠糖基化终产物的产生,减少肾脏IL-8的分泌,从而预防糖尿病肾病的发生。