Inhibiting Effects of Achyranthes Bidentata Polysaccharide and Lycium Barbarum Polysaccharide on Nonenzyme Glycation in D-galactose Induced Mouse Aging Model

Objective To investigate the inhibiting effects and mechanism of achyranthes bidentata polysaccharide (ABP) and lycium barbarum polysaccharide (LBP) on nonenzyme glycation in D-galactose induced mouse aging model. Methods Serum AGE levels were determined by AGE-ELISA, MTT method was used to determine lymphocyte proliferation, IL-2 activity was determined by a bioassay method. Spontaneous motor activity was used to detect mouse's neuromuscular movement, latency of step-through method was used to examine learning and memory abilities of mouse, colormetric assay was used to determine hydroxyproline concentration in mouse skin, pyrogallol autoxidation method was used to determine superoxide dismutase (SOD) activity of erythrocytes. Results Decreased levels of serum AGE, hydroxyproline concentration in mouse skin and spontaneous motor activity in D-galactose mouse aging model were detected after treated with ABP or LBP, while lymphocyte proliferation and IL-2 activity, learning and memory abilities, SOD activity of erythrocytes, were enhanced. Conclusions ABP and LBP could inhibit nonenzyme glycation in D-galactose induced mouse aging model in vivo and ABP has a better inhibiting effect than LBP.

枸杞多糖LBP1C-2靶向钾离子通道β亚基-2活性结构域的探索

目的本研究旨在通过对LBP1C-2靶向Kvβ.2构效关系的探索,阐明LBP1C-2靶向Kvβ.2的活性结构域,为开发具有潜在抗早老痴呆活性的创新药物提供科学依据。方法枸杞多糖LBP1C-2经部分酸水解得到不同的结构片段后,对其进行单糖组成和分子量分析。通过蛋白芯片挑选出潜在靶蛋白,再用表面等离子体共振(SPR)技术验证各结构片段的靶向性。蛋白质免疫印迹以及细胞免疫荧光测试验证其生物学功能。结果通过HuProtTM人类蛋白质组芯片高通量筛选到LBP1C-2的潜在靶蛋白Kvβ.2。SPR实验表明LBP1C-2与Kvβ.2蛋白有较强结合,其结合常数KD为1.9×10^(-7) M。而LBP1C-2的化学降解后各结构片段与靶蛋白Kvβ.2有不同强度结合。其中含鼠李糖和半乳糖醛酸摩尔比为1:1的片段LBP1C-2-1I(18.1kDa)与原多糖LBP1C-2对Kvβ.2结合强度相近为3.3×10^(-7) M。对LBP1C-2-1I结构解析表明其有1,2-Rha与1,4-GalA交替连接组成。而该片段对应的酸水解外液部分LBP1C-2-1O与Kvβ.2也有结合,但与其他片段与该蛋白解离相比,更容易解离。从BV2小胶质细胞中敲减KCNAB2基因(Kvβ.2)后,BV2细胞中Aβ的降解被抑制,表明蛋白Kvβ.2可能是早老痴呆发生发展中的一个功能蛋白。结论LBP1C-2靶向Kvβ.2的主要活性结构域为1,2-Rha与1,4-GalA交替连接组成的主链核心骨架结构。本研究为深化了解LBP1C-2潜在的抗早老痴呆活性提供了重要线索,为基于枸杞多糖抗早老痴呆靶向性药物的设计和开发提供了证据。

枸杞多糖通过增强自噬抑制饥饿诱导的施万细胞凋亡

目的:探讨枸杞多糖(LBP)抑制施万细胞(SCs)凋亡的作用及相关机制。方法:RSC96细胞饥饿处理12 h制备自噬模型,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、p62的表达;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒筛选出LBP作用的最佳浓度。将RSC96细胞随机分为正常组(Control)、饥饿组(Starvation)、Starvation+LBP组,Western Blot或免疫荧光染色检测细胞自噬相关蛋白(LC3、p62)以及髓鞘相关蛋白(p75NTR、PMP22、S100β)的表达;采用Annexin V/PI荧光染色检测细胞的凋亡情况;应用流式细胞术分析细胞周期;Western Blot分析通路蛋白Erk1/2、Akt的磷酸化水平。结果:CCK8结果显示,LBP为300μg/ml时受损RSC96细胞活力最佳。与Control组相比,Starvation组LC3-II/LC3-I水平显著增高(P<0.05)。与Starvation组相比,Starvation+LBP组的凋亡和坏死细胞比例显著降低,处于S期和G2/M期的细胞比例升高;LC3-II、p75NTR、PMP22、S100β蛋白表达量增高,自噬底物蛋白p62的表达量降低;通路蛋白p-Erk1/2表达量增高(P<0.05),而p-Akt蛋白表达量略有下降。结论:LBP可通过增强细胞自噬抑制SCs凋亡,促进髓鞘相关蛋白的表达,其机制与Erk1/2激活和/或Akt抑制有关。

枸杞果实生长发育过程中细胞壁多糖及其降解酶活性变化研究

为进一步探究枸杞多糖代谢规律,以不同生长时期的枸杞果实为研究对象,用透射电镜观察细胞壁微观结构,通过化学法提取细胞壁多糖并测定含量及其降解酶活性,使用显微共聚拉曼光谱法分析不同生长时期枸杞果实细胞壁多糖成分的变化规律,并对其细胞壁多糖含量与降解酶活性进行了相关性分析。结果表明:枸杞果实细胞壁结构变化主要发生在28~35 d,细胞壁明显变薄,果胶降解,细胞壁结构逐渐崩毁。细胞壁物质(CWM)含量先增加后降低,水溶性果胶(WSP)含量显著增加(P<0.05),碳酸钠可溶性果胶(SSP)和半纤维素含量先增加后降低。多聚半乳糖醛酸酶(PG)、β-半乳糖苷酶(β-Gal)和纤维素酶(Cx)活性升高,果胶甲酯酶(PME)和β-氨基己糖苷酶(β-Hex)活性先降低后升高。相关性分析结果表明,在枸杞果实生长发育过程中细胞壁多糖含量与细胞壁降解酶活性显著相关(P<0.05)。随着枸杞果实的发育和成熟,其细胞壁微观结构随降解酶活性的变化呈细胞壁结构崩毁、细胞壁多糖降解的变化趋势。研究结果对提高枸杞果实的加工品质、制定适合的贮藏策略具有理论和实践意义。

枸杞多糖通过SLC7A11/GPX4通路抑制铁死亡减轻小鼠脑缺血再灌注损伤

目的:探讨枸杞多糖(LBP)是否通过溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)通路抑制铁死亡进而减轻脑缺血再灌注损伤。方法:使用大脑中动脉栓塞(MCAO)方法建立小鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤模型,并同时给予枸杞多糖处理。小鼠被随机分为3组:假手术(Sham)组,I/R组,以及I/R+LBP组。使用2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色来观察脑梗死体积;通过神经功能缺损评分来评估小鼠的神经功能;利用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和亚铁离子(Fe^(2+))检测试剂盒来检测SOD、GSH、MDA和Fe^(2+)的水平变化;利用Western Blot检测抗铁死亡相关蛋白,包括SLC7A11、GPX4以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)的表达情况。结果:枸杞多糖能够减少I/R小鼠的脑梗死体积,改善I/R小鼠神经功能;枸杞多糖增加I/R损伤小鼠中SOD和GSH的含量、减少MDA的含量;Western Blot结果:I/R组脑组织中抗铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4、Nrf2的表达水平明显低于Sham组;而通过枸杞多糖处理后,I/R+LBP组中SLC7A11、GPX4、Nrf2的水平明显高于I/R组。结论:枸杞多糖可能通过SLC7A11/GPX4信号通路抑制铁死亡来减轻脑缺血再灌注损伤。枸杞多糖对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,是一种潜在的神经保护剂。

固定化酶技术评价枸杞多糖降血糖活性研究

目的研究不同分子量段的枸杞多糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,评价其降血糖活性。方法利用固定化酶技术,将α-葡萄糖苷酶固定到Fe3O4磁性纳米材料上,以对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,通过高效液相色谱法测定酶解产物对硝基苯酚的含量,并计算酶抑制率,检测不同分子量段枸杞多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响。结果不同分子量段枸杞多糖均表现出一定的α-葡萄糖苷酶抑制性。其中枸杞多糖3和枸杞多糖1的抑制作用最好,当浓度为2.5mg·ml^(-1)时,枸杞多糖3的抑制率可达到74%,枸杞多糖1的抑制率为42%,是潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂药物来源。结论该方法评价了不同分子量段枸杞多糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,为寻找潜在的枸杞降血糖成分提供了理论参考。

枸杞多糖对H_2O_2诱导的小鼠生殖细胞损伤的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对化学物质导致的生殖细胞损伤的影响。方法:用彗星电泳技术检测睾丸细胞拖尾细胞百分率及尾长。实验分四组:正常对照组;阳性对照组,睾丸细胞中仅加入H2O2染毒;LBP对照组,细胞中加入不同浓度的LBP;LBP+H2O2组,细胞先用不同浓度LBP作用1h,再加入H2O2共同培养25min。结果:LBP各剂量均能使过氧化氢染毒细胞的拖尾细胞百分率和尾长显著降低,二者呈剂量-反应关系。结论:LBP能抑制H2O2诱导的睾丸细胞损伤,对生殖细胞具有明显的保护作用。

枸杞多糖对小鼠耐缺氧效应的研究

连续给予（灌胃）小鼠不同剂量的枸杞多糖（ＬＢＰ）７ｄ，进行密闭缺氧试验。结果表明，ＬＢＰ（５０～９００ｍｇ／ｋｇ，ｉｇ）可以显著延长小鼠的存活时间（Ｐ＜０．０１），其中以７００ｍｇ／ｋｇ剂量效果最好，平均存活时间为４７．３±４．４ｍｉｎ，比对照组延长５２．１％。ＬＢＰ可降低小鼠血红蛋白增加率，抑制组织脂质过氧化反应以及增加血浆中ＳＯＤ活性。

枸杞子活性多糖的研究

目的 对 4个均一枸杞多糖 :LBP 1a 1,LBP 1a 2 ,LBP 3a 1和LBP 3a 2进行结构研究和药理评价。方法采用凝胶柱色谱、酸水解、过碘酸氧化和波谱学等方法测定多糖样品的分子量、单糖组成及连接方式 ,并以小鼠脾淋巴细胞增殖反应为免疫活性指标对多糖样品进行活性评价。结果 4个多糖样品的分子量分别为 11 5× 10 4 ,9 4×10 4 ,10 3× 10 4 ,8 2× 10 4 ,LBP 1a 1,LBP 1a 2为 1,6连接的葡聚糖 ;LBP 3a 1,LBP 3a 2具有 1,4连接的多聚半乳糖醛酸主链 ,及微量的半乳糖和阿拉伯糖分支。 4个多糖均具有免疫促进作用。结论 4种多糖首次从枸杞子中分离得到 ,具有 1。

枸杞多糖对慢性辐射小鼠细胞凋亡及bc1-2基因表达的影响

目的:探讨枸杞多糖(LBP)对辐射小鼠细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法:以水提取-乙醇沉淀法制备枸杞多糖,并制成0.8%的饲料,给予受试小鼠(枸杞多糖组)。正常对照组、辐射对照组给予普通饲料。除正常对照组外,另两组均用60Coγ射线对动物进行全身性照射,每天照射1次,每天照射剂量为0.084Gy,每周照射5d,连续照射6w,照射总剂量为2.52Gy。检测骨髓微核率、睾丸精母细胞染色体畸变、精子畸形率、肝细胞caspase-3mRNA表达水平、细胞凋亡及凋亡相关基因bc1-2表达等指标。结果:LBP可使辐射引起的微核率、染色体畸变、及精子畸形率显著降低,骨髓细胞增殖活性提高,凋亡率降低,使辐射小鼠bc1-2基因表达提高、caspase-3mRNA表达水平降低。结论:枸杞多糖的抗辐射作用与其调控细胞bc1-2基因表达,影响细胞凋亡有关。

枸杞子活性成分及分析方法研究进展

枸杞为茄科枸杞属植物,枸杞子是枸杞的成熟果实,为我国传统中药材,具有清除自由基、抗氧化、提高免疫力以及抑制细胞突变和肿瘤生长等药理作用,目前主要用于肿瘤以及高血脂、高血糖、动脉粥样硬化等一些老年疾病的辅助治疗。文章概述了枸杞中多糖、黄酮、色素等活性成分的研究概况及分析方法研究进展,并对枸杞活性成分的开发与利用进行了展望。

枸杞及其多糖对家兔血脂的影响

采用萃取、离子交换层析、凝胶层析等方法，从枸杞中分离得到了粗品枸杞多糖及其纯化组分枸杞多糖－Ｘ。将枸杞、枸杞多糖及其枸杞多糖－Ｘ三者对实验性家兔高脂血症进行降血脂试验（开放型单向质反应序贯试验），探讨枸杞及其多糖降血脂的作用。试验结果表明，枸杞及其多糖对实验性高脂血症兔的血脂均有明显影响，能显著降低血清胆固醇及甘油三酯含量，降脂有效率达１００％。

枸杞多糖提取及消除羟自由基活性研究

以宁夏枸杞为原料,采用碱性乙醇溶液提取法,通过单因素试验和正交试验,以多糖得率为衡量指标,优选出碱性乙醇提取枸杞多糖的最佳工艺条件,考察条件枸杞多糖消除羟自由基的活性。结果表明:液料比、乙醇体积分数、pH值、浸提温度、浸提时间对枸杞多糖得率均有显著影响;碱性乙醇提取枸杞多糖最佳条件为液料比50:1(ml/g)、乙醇体积分数8%、pH10.5,于70℃条件下浸提6.5h,枸杞多糖得率最高可达29.19%,比传统水提法提高9.51%;当枸杞多糖质量浓度为2.35mg/ml时,对羟自由基的消除率可达44.90%。

枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c-myc表达的影响

目的 :探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法 :采用老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型 ,分别连续灌服枸杞多糖 2个月和 1个月 ,应用半定量逆转录 聚合酶链式反应技术 (RT PCR)检测小鼠骨髓原癌基因c myc表达的变化。结果 :老年小鼠和D 半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c myc表达量明显高于青年小鼠和正常对照小鼠 (P <0 .0 0 1) ,给药后则可明显得到抑制 (P <0 .0 5 )。结论 :抑制原癌基因c myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一。

不同分子量枸杞多糖的超滤法分离及抗氧化活性研究

目的：测定不同分子量枸杞多糖（LBP）的含量和抗氧化活性。方法：用5种不同截留分子量（MWCO）的超滤膜分离LBP，苯酚-硫酸法测定不同分子量多糖的含量，铁离子还原力（FRAP）法测定抗氧化活性。结果：得到6种不同分子量的LBP样品液，其中分子量（Mw）5000以下的LBP占74．5％，FRAP值0．745；5000-1万的占11．0％，FRAP值0．597；1—3万的占7．7％，FRAP值0．923；3—10万的占2．4％，FRAP值1．060；10～30万的占2．4％，FRAP值0．720；30万以上的占1．9％，FRAP值0．401。结论：超滤能够实现不同分子量LBP的良好分离，可作为枸杞活性成分开发利用的一种新方法。MW在5000以下的LBP为总多糖的主要功效成分，开发利用价值最大。

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响

目的研究早期糖尿病大鼠视网膜超微结构的改变及枸杞多糖的干预效果。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病SD大鼠模型,治疗组给予枸杞多糖灌胃,观察血糖、体重变化和24周时的视网膜超微结构改变。结果糖尿病早期视网膜改变主要是神经元细胞和神经胶质细胞等神经组织的线粒体病变和细胞的变性、凋亡。枸杞多糖组与糖尿病模型组比较,体重和血糖差异均无统计学意义(P>0.05);而视网膜超微结构病变明显减轻,且局限于内核层。结论枸杞多糖可以明显减轻线粒体的病理改变,阻止神经细胞凋亡,其机制并非通过降低血糖,控制糖尿病发挥作用,有望用于早期糖尿病视网膜神经病变的防治。

枸杞多糖组分3对小鼠抗脂质过氧化作用的影响

用枸杞多糖组分 3(L BP3)灌喂小鼠 31d后 ,测定小鼠体内超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH - Px)的活性 ,以及丙二醛 (MDA)和脂褐素的含量。结果表明 ,与对照相比 ,L BP3可提高或显著提高 (P<0 .0 1)小鼠体内 SOD和 GSH- Px的活性 ,并能降低或显著降低 (P<0 .0 1)体内 MDA和脂褐素的含量。由此表明 ,L

枸杞多糖抗肿瘤作用免疫学机理的探讨

目的:探讨枸杞多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。方法:60只小鼠随机分为6组:正常对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺(Cy)阳性对照组和5,10,20 mg·kg-1·d-1枸杞多糖(LBP)组,每组10只,各组分别给予相应剂量,灌胃给药后,检测胸腺重量及巨噬细胞吞噬功能、脾细胞抗体、CTL杀伤功能。结果:一定剂量的 LBP能显著抑制移植性肿瘤 S180 的生长,且能明显增强荷瘤鼠巨噬细胞率和吞噬指数,增加脾细胞抗体生成,提高荷瘤鼠的脾细胞转化功能和CTL的杀伤能力,均以10 mg·kg-1·d-1 LBP效果最佳。结论:LBP显著提高荷瘤小鼠的非常异性免疫、体液免疫和细胞免疫功能,且能显著提高荷瘤小鼠 CTL的杀伤能力。这可能是枸杞多糖抗移植性肿瘤的机理之一。

枸杞多糖对小鼠淋巴细胞信号系统的效应

对枸杞多糖（ＬＢＰ）发挥免疫调节效应的信号传导系统进行探讨。结果显示，５０～４００μｇ／ｍｌＬＢＰ可剂量依赖性的升高小鼠淋巴细胞内ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ的水平，５０μｇ／ｍｌ尚可升高ＰＭＡ活化的脾淋巴细胞内ｃＧＭＰ的水平。另外，１００μｇ／ｍｌＬＢＰ可增加ＣｏｎＡ活化后的小鼠脾淋巴细胞膜上的ＰＫＣ活性。说明ＬＢＰ的作用途径可能是通过影响ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ系统以及促进ＰＫＣ活性来发挥免疫调节效应的。